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微生物学通报 2025年第2期52卷 654-667页

作者：张浩南崔一芳郭芳芳丁保安徐福洲青海大学农牧学院青海西宁810016 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

【背景】弯曲菌(Campylobacter)是一种重要的食源性病原细菌,在鸡肠道内高水平定殖,鸡天然免疫在该菌定殖中的作用机制尚未解析。【目的】探究鸡天然免疫相关的细胞外脂肪酸结合蛋白(extracellular fatty acid-binding protein,Ex-FABP... 详细信息

【背景】弯曲菌(Campylobacter)是一种重要的食源性病原细菌,在鸡肠道内高水平定殖,鸡天然免疫在该菌定殖中的作用机制尚未解析。【目的】探究鸡天然免疫相关的细胞外脂肪酸结合蛋白(extracellular fatty acid-binding protein,Ex-FABP)通过特异性结合肠杆菌素抑制弯曲菌生长的活性,为宿主发挥天然免疫功能提供理论基础。【方法】通过敲除大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)的entB基因构建不分泌肠杆菌素的表达宿主菌,原核表达纯化鸡Ex-FABP蛋白和人源脂钙蛋白2(lipocalin-2,Lcn2),Western blotting鉴定表达蛋白与肠杆菌素特异性结合,分别在富铁和限铁培养条件下,验证Ex-FABP和Lcn2对大肠杆菌、沙门氏菌(Salmonella)及entB基因突变株的抑菌活性,继而通过外源添加肠杆菌素鉴定Ex-FABP和Lcn2对不同宿主源弯曲菌的抑菌活性。【结果】利用构建的宿主菌BL21(DE3)的entB基因突变株,成功表达和纯化Ex-FABP和Lcn2蛋白,体外结合试验证实表达蛋白可与肠杆菌素特异性结合。在限铁培养条件下,Ex-FABP和Lcn2对仅分泌肠杆菌素的大肠杆菌AN102具有显著抑制生长的作用,而对大肠杆菌ATCC 25922、沙门氏菌CVCC 1806、CVCC 1800及对应的entB缺失株均无抑制作用。最后证实Ex-FABP和Lcn2通过特异性结合肠杆菌素对5株不同宿主来源的弯曲菌均有显著抑制生长的作用。【结论】鸡Ex-FABP蛋白具有与Lcn2类似的功能,即在限铁环境下可特异性结合肠杆菌素,通过阻断细菌利用肠杆菌素摄取铁的途径来抑制其生长,发挥宿主天然免疫功能,为开发新型弯曲菌防控策略提供了理论依据。

关键词：细胞外脂肪酸结合蛋白脂钙蛋白2 肠杆菌素 entB基因弯曲菌

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空肠弯曲菌Cia效应蛋白参与黏附侵袭细胞和激活炎性细胞因子的研究

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微生物学通报 2025年第2期52卷 679-689页

作者：武金亮崔一芳郭芳芳胡格徐福洲北京农学院动物科学技术学院北京102206 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

【背景】空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是世界范围内最重要的食源性病原菌之一,在家禽盲肠内通常共生定殖,成为感染人的主要来源,目前该菌在家禽肠道内的定殖机制尚未阐明。【目的】探究空肠弯曲菌不同效应蛋白在参与黏附侵袭肠上... 详细信息

【背景】空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是世界范围内最重要的食源性病原菌之一,在家禽盲肠内通常共生定殖,成为感染人的主要来源,目前该菌在家禽肠道内的定殖机制尚未阐明。【目的】探究空肠弯曲菌不同效应蛋白在参与黏附侵袭肠上皮细胞、免疫细胞及激活炎性细胞因子中的作用,解析该菌在鸡肠道内定殖的机制,为其防控提供潜在的作用靶标。【方法】首先利用同源重组技术构建空肠弯曲菌NCTC11168菌株不同效应蛋白CiaB、CiaC、CiaD和CiaI的基因缺失突变株,测定突变株对细菌生物膜形成和自身凝集能力的影响,进而测定突变株对肠上皮细胞Caco-2的黏附和侵袭能力,以及对鸡巨噬细胞系HD11的侵袭能力,最后利用RT-qPCR鉴定突变株感染HD11细胞对炎性细胞因子表达的影响。【结果】构建空肠弯曲菌不同效应蛋白CiaB、CiaC、CiaD和CiaI的基因缺失突变株;△ciaD突变株生物膜形成能力降低,△ciaC、△ciaD和△ciaI突变株自身凝集能力增强;△ciaB突变株黏附侵袭Caco-2细胞能力增强,而△ciaC、△ciaD和△ciaI突变株黏附侵袭Caco-2以及侵袭HD11细胞能力均显著降低;空肠弯曲菌感染HD11显著提高不同炎性细胞因子表达水平,△cia B、△ciaC和△ciaD突变株显著降低不同炎性因子表达水平,而△ciaI突变株显著增强不同炎性因子表达水平。【结论】空肠弯曲菌不同Cia效应蛋白在黏附侵袭肠上皮细胞、免疫细胞及激活炎性细胞因子表达中发挥不同的作用,本研究为解析空肠弯曲菌与宿主肠道上皮相互作用机制提供了理论依据,并为该菌的防控提供了潜在靶标。

关键词：空肠弯曲菌 Cia效应蛋白黏附侵袭炎性细胞因子

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空肠弯曲菌鞭毛Ⅲ型分泌系统及其效应蛋白的研究进展

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微生物学通报 2025年第2期52卷 501-509页

作者：武金亮崔一芳郭芳芳胡格徐福洲北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 北京农学院动物科学技术学院北京102206

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是最常见的食源性病原细菌之一,在世界范围内广泛流行,感染人和动物表现不同的临床症状和病理变化,特别是家禽感染后不表现任何临床症状,成为人感染的主要来源,解析该菌在宿主体内的感染和定殖机制对... 详细信息

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是最常见的食源性病原细菌之一,在世界范围内广泛流行,感染人和动物表现不同的临床症状和病理变化,特别是家禽感染后不表现任何临床症状,成为人感染的主要来源,解析该菌在宿主体内的感染和定殖机制对其防控具有关键作用。空肠弯曲菌通过鞭毛Ⅲ型分泌系统分泌效应蛋白,注入宿主细胞内,与细胞内蛋白结合,调控宿主细胞信号通路,改变宿主细胞防御机制,在空肠弯曲菌感染和定殖宿主过程中发挥重要作用。本文就空肠弯曲菌鞭毛Ⅲ型分泌系统分泌效应蛋白的种类及作用机制,以及在解析该菌致病和定殖方面的作用进行综述,对深入理解空肠弯曲菌的致病机制具有重要意义。

关键词：空肠弯曲菌鞭毛Ⅲ型分泌系统细菌效应蛋白弯曲菌入侵抗原

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犬细小病毒感染F81细胞microRNA荧光定量PCR内参基因的筛选

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畜牧与兽医 2023年第3期55卷 96-103页

作者：周宏专苏霞林路路齐颀张进徐福洲杨兵北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

犬细小病毒(canine parvovirus, CPV)是犬急性胃肠炎的主要病原之一,对犬类的健康造成极大危害。MicroRNA(miRNA)是小的、非编码的RNA,在转录后水平调节基因表达。荧光定量PCR(RT-qPCR)是评估miRNA表达水平最常用的方法,而合适的参考基... 详细信息

犬细小病毒(canine parvovirus, CPV)是犬急性胃肠炎的主要病原之一,对犬类的健康造成极大危害。MicroRNA(miRNA)是小的、非编码的RNA,在转录后水平调节基因表达。荧光定量PCR(RT-qPCR)是评估miRNA表达水平最常用的方法,而合适的参考基因在RT-qPCR数据归一化中起着至关重要的作用。本研究在分析F81细胞空白对照组和感染CPV组小RNA高通量测序结果基础上,结合参考文献,在CPV感染后12 h和24 h,通过poly(A)延伸RT-qPCR定量方法检测候选内参基因小RNA的表达情况,并使用GeNorm、NormFinder和BestKeeper算法评估这些候选小RNA的稳定性。结果选取了5种高通量测序中表达相对稳定的miRNAs(dno-miR-186-5p、pha-miR-152、dno-miR-374a-5p、tch-miR-26a-2-5p和oga-miR-26b)和常用作参考基因的小核RNA U6(RNU6-1)、核仁小RNA(small nucleolar RNA)SNORD95以及SNORD96a,经过扩增分析及对高通量测序中差异表达的dno-miR-7-5p的定量验证发现,这些候选小RNA均具有较好的稳定性。其中pha-miR-152在检测样品中稳定性最好,可在CPV感染F81细胞中作为RT-qPCR法定量miRNA表达及数据均一化的合适参考基因。筛选出的pha-miR-152有助于研究miRNAs在CPV感染过程中的定量表达分析,为进一步研究F81细胞中miRNA调控CPV感染复制的分子机制研究提供可靠手段,也为其他相关物种miRNA定量研究中内参基因的选择提供参考。

关键词：犬细小病毒 MicroRNA 内参基因逆转录定量PCR

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大肠杆菌肠菌素对空肠弯曲菌的促生长作用研究

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中国畜牧兽医 2024年第8期51卷 3585-3594页

作者：时晨欣崔一芳申学阳焦晓丽郭芳芳丁保安徐福洲青海大学农牧学院西宁810016 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

[目的]调查鸡肠道内大肠杆菌分泌肠菌素的水平,以及其对空肠弯曲菌的促生长作用。[方法]利用间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法检测临床分离的30株鸡肠道大肠杆菌分离株的肠菌素产量;利用λRed同源重组系统构建大肠杆菌entB基因缺失突变株,并... 详细信息

[目的]调查鸡肠道内大肠杆菌分泌肠菌素的水平,以及其对空肠弯曲菌的促生长作用。[方法]利用间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法检测临床分离的30株鸡肠道大肠杆菌分离株的肠菌素产量;利用λRed同源重组系统构建大肠杆菌entB基因缺失突变株,并用ic-ELISA方法测定大肠杆菌亲本株和突变株的肠菌素产量;检测亲本株和突变株在不同限铁培养基中的生长曲线;将大肠杆菌亲本株和突变株培养上清接种空肠弯曲菌,探究大肠杆菌肠菌素对空肠弯曲菌生长的影响。[结果]30株鸡肠道大肠杆菌分离株分泌肠菌素水平介于11~126μmol/L之间。利用λRed同源重组系统成功构建2株大肠杆菌entB基因缺失突变株。定性结果显示,大肠杆菌亲本株在CAS培养基中产生黄色晕圈,而entB基因缺失株不产生晕圈。ic-ELISA检测结果显示,亲本株分泌肠菌素浓度为100~150μmol/L,而基因缺失株未检测出肠菌素。大肠杆菌亲本株和entB基因缺失株在富铁培养基中生长无显著差异(P>0.05),在限铁培养基中达到平台期的D 600 nm值分别为0.6和0.3。促生长试验结果显示,大肠杆菌亲本株培养上清接种空肠弯曲菌24和36 h,菌落数分别为7.8和8.2 lg CFU/mL,而entB基因缺失株培养上清接种后菌落数分别为7.0和7.3 lg CFU/mL。[结论]大肠杆菌具有分泌肠菌素的能力,且其在限铁环境下能促进空肠弯曲菌的生长,试验结果为深入研究肠菌素介导的肠道细菌之间的相互作用奠定基础。

关键词：大肠杆菌肠菌素 entB基因空肠弯曲菌

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AIM2炎症小体在PCV2诱导巨噬细胞炎症反应中的作用

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动物医学进展 2023年第4期44卷 36-41页

作者：王丹宋江伟王菁全荣北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)感染引起的猪圆环病毒病(PCVD)严重危害世界养猪业,PCV2能够引起仔猪免疫抑制,其具体机制仍需要进一步探索。巨噬细胞是重要的免疫细胞,探索PCV2对巨噬细胞活化炎症小体的调控能够帮助进一步阐... 详细信息

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)感染引起的猪圆环病毒病(PCVD)严重危害世界养猪业,PCV2能够引起仔猪免疫抑制,其具体机制仍需要进一步探索。巨噬细胞是重要的免疫细胞,探索PCV2对巨噬细胞活化炎症小体的调控能够帮助进一步阐明PCV2致病机制。论文主要探讨PCV2感染对炎症小体活化的调控。分析了PCV2感染巨噬细胞对炎症小体通路的影响,用荧光定量PCR方法检测感染不同时期AIM2、caspase-1、IL-1β等的mRNA表达水平,利用蛋白免疫印迹法和ELISA法检测IL-1β蛋白水平的表达和上清的分泌,还检测了抑制AIM2表达对病毒感染介导炎性细胞因子产生的影响。通过上述研究发现,PCV2感染激活了AIM2炎症小体通路引发炎症细胞因子大量释放,推测其可能是PCV2引发过度炎症反应的机制。

关键词：猪2型圆环病毒黑色素瘤缺乏因子2 炎症小体白介素1β

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葡聚糖硫酸钠饲喂SPF鸡诱导肠道炎症的研究

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饲料工业 2024年第19期45卷 113-121页

作者：申学阳崔一芳时晨欣焦晓丽武金亮张浩南郭芳芳丁保安徐福洲青海大学农牧学院青海西宁810016 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

为深入探讨肠道炎症对鸡生长发育、肠道组织结构及微生物菌群等方面的影响,试验利用1%和4%两种浓度的葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液饮水诱导鸡肠道炎症,建立无特定病原(SPF)鸡肠道炎症模型,通过测定体重、器官指数、盲肠微生物菌群结构、组织... 详细信息

为深入探讨肠道炎症对鸡生长发育、肠道组织结构及微生物菌群等方面的影响,试验利用1%和4%两种浓度的葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液饮水诱导鸡肠道炎症,建立无特定病原(SPF)鸡肠道炎症模型,通过测定体重、器官指数、盲肠微生物菌群结构、组织病理、炎性细胞因子表达水平及炎症标识物钙卫蛋白(CALP)和脂质运载蛋白(NGAL)含量等,综合评价不同浓度DSS诱导的鸡肠道炎症对其生理功能的影响。结果显示:与对照组相比,DSS4组极显著抑制鸡增重(P<0.01),阻止鸡免疫器官脾脏和法氏囊的发育,盲肠微生物菌群多样性和丰度均极显著改变(P<0.01),肠杆菌科(Enterobacteriaceae)占比达到74.39%,组织病理学检测显示十二指肠、空肠、回肠和盲肠组织结构均发生显著病变,脾脏炎性细胞因子相对mRNA表达测定显示白细胞介素1β(IL-1β)表达水平极显著升高(P<0.01),而趋化因子生长调节基因1(CxCli1)和趋化因子生长调节基因2(CxCli2)极显著降低(P<0.01),白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)含量未见显著变化(P>0.05),血清和盲肠内容物CALP和NGAL含量均极显著降低(P<0.01)。DSS1组对测定指标的影响相对较小,仅少数指标出现显著改变。试验结果表明,利用口服DSS成功建立了急性肠道炎症模型,并鉴定了肠道炎症对鸡生理功能的影响。

关键词： SPF鸡葡聚糖硫酸钠肠道炎症微生物菌群炎性细胞因子

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胸膜肺炎放线杆菌利用肠菌素摄取铁促生长的研究

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动物医学进展 2024年第8期45卷 15-21页

作者：焦晓丽崔一芳申学阳时晨欣武金亮郭芳芳崔国林刘娜徐福洲河北工程大学生命科学与食品工程学院河北邯郸056038 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

肠菌素(Ent)介导的铁摄取系统在病原细菌生长和定植过程中发挥关键作用。胸膜肺炎放线杆菌是引起猪传染性胸膜肺炎的病原,为鉴定该菌不同血清型菌株能否利用肠菌素摄取铁发挥促生长作用,试验选用胸膜肺炎放线杆菌血清1~12型参考菌株,首... 详细信息

肠菌素(Ent)介导的铁摄取系统在病原细菌生长和定植过程中发挥关键作用。胸膜肺炎放线杆菌是引起猪传染性胸膜肺炎的病原,为鉴定该菌不同血清型菌株能否利用肠菌素摄取铁发挥促生长作用,试验选用胸膜肺炎放线杆菌血清1~12型参考菌株,首先在限铁条件下通过肠菌素促生长试验鉴定不同血清型菌株能否利用肠菌素;进而通过添加不同浓度的铁螯合剂DFO、细菌接种量、肠菌素等因子,筛选胸膜肺炎放线杆菌利用肠菌素促生长的最适培养条件;最后分别在限铁和富铁培养条件下通过生长曲线鉴定肠菌素对胸膜肺炎放线杆菌12个血清型菌株的促生长作用。结果显示,在测定的胸膜肺炎放线杆菌血清1~12型参考菌株中,除血清2型和10型外,其他型菌株在限铁条件下均可利用肠菌素促生长。不同因子筛选结果显示,最适细菌接种浓度为1×10^(4)CFU/mL,添加DFO浓度为20μmol/L,而添加0.4、2.0、10.0μg/mL等不同浓度的肠菌素对胸膜肺炎放线杆菌均有显著促生长作用,且随肠菌素浓度升高而促生长能力显著增强。试验证实胸膜肺炎放线杆菌可利用肠菌素促进其生长,同时证实不同血清型利用肠菌素方面存在显著差异,为解析肠菌素介导的铁摄取系统在胸膜肺炎放线杆菌中的作用机制奠定了基础。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌血清型肠菌素铁促生长

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原核表达技术在动物传染病疫苗生产中的应用

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动物医学进展 2024年第10期45卷 96-100页

作者：朱梦涵李桂萍霍彩云孙英健孙惠玲北京农学院动物科学技术学院/兽医学(中医药)北京市重点实验室北京102206 北京市农林科学院畜牧兽医研究所/北京畜牧疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

原核表达技术是基因表达中开发最早、使用最广泛的蛋白表达技术。因具有成本低廉,遗传背景清晰,培养周期短,可大量收获等特点,而在动物传染病疫苗的生产中广泛应用。论文主要总结了利用原核表达技术生产动物传染病疫苗时目的基因的选择... 详细信息

原核表达技术是基因表达中开发最早、使用最广泛的蛋白表达技术。因具有成本低廉,遗传背景清晰,培养周期短,可大量收获等特点,而在动物传染病疫苗的生产中广泛应用。论文主要总结了利用原核表达技术生产动物传染病疫苗时目的基因的选择,宿主菌的选择、以及疫苗的安全性和免疫效力的检测方法,并对原核表达技术在动物传染病疫苗生产中的安全性与制备成本的优势进行了讨论,以期为今后利用原核表达技术研发和生产疫苗提供参考和借鉴。

关键词：原核表达技术目的基因宿主菌疫苗安全性检测疫苗免疫效力检测

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禽偏肺病毒感染Vero细胞的外泌体蛋白质组学分析

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中国家禽 2022年第10期44卷 24-30页

作者：王丹侯磊宋江伟王菁全荣刘爵北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 扬州大学兽医学院江苏扬州225009

为研究C型禽偏肺病毒(aMPV/C)感染Vero细胞后外泌体中蛋白质组分的变化,试验收集感染病毒后48 h的细胞培养液,用超速离心法分离外泌体。经透射电镜观察、纳米颗粒跟踪技术分析、蛋白质印迹法(Western blot)鉴定后,对外泌体进行示踪试验... 详细信息

为研究C型禽偏肺病毒(aMPV/C)感染Vero细胞后外泌体中蛋白质组分的变化,试验收集感染病毒后48 h的细胞培养液,用超速离心法分离外泌体。经透射电镜观察、纳米颗粒跟踪技术分析、蛋白质印迹法(Western blot)鉴定后,对外泌体进行示踪试验。利用非标记定量液相色谱-质谱联用(lable-free LC-MS/MS)技术和生物信息学方法分析外泌体的蛋白质组分。结果显示:分离的外泌体为杯状双层膜囊泡,具有特征性膜蛋白CD63、CD81、Tsg101,能够进入未感染的Vero细胞;aMPV/C感染组中170个蛋白表达上调,11个蛋白表达下调;差异表达蛋白大多来源于细胞器和细胞膜,主要参与细胞过程、生物调节、代谢过程等生物学过程,执行受体结合、酶催化、分子调节等功能,集中于内吞作用、病毒感染、细胞衰老等通路。研究表明,aMPV/C感染使Vero细胞外泌体蛋白质组分发生明显变化,差异表达蛋白主要集中于细胞膜信号传导通路、病毒感染相关信号通路、细胞增殖相关信号通路,被aMPV/C感染的Vero细胞能以外泌体形式向未感染细胞进行物质或信息传递。

关键词：禽偏肺病毒 Vero细胞蛋白质组学

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