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微生物学通报 2025年第2期52卷 654-667页

作者：张浩南崔一芳郭芳芳丁保安徐福洲青海大学农牧学院青海西宁810016 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

【背景】弯曲菌(Campylobacter)是一种重要的食源性病原细菌,在鸡肠道内高水平定殖,鸡天然免疫在该菌定殖中的作用机制尚未解析。【目的】探究鸡天然免疫相关的细胞外脂肪酸结合蛋白(extracellular fatty acid-binding protein,Ex-FABP... 详细信息

【背景】弯曲菌(Campylobacter)是一种重要的食源性病原细菌,在鸡肠道内高水平定殖,鸡天然免疫在该菌定殖中的作用机制尚未解析。【目的】探究鸡天然免疫相关的细胞外脂肪酸结合蛋白(extracellular fatty acid-binding protein,Ex-FABP)通过特异性结合肠杆菌素抑制弯曲菌生长的活性,为宿主发挥天然免疫功能提供理论基础。【方法】通过敲除大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)的entB基因构建不分泌肠杆菌素的表达宿主菌,原核表达纯化鸡Ex-FABP蛋白和人源脂钙蛋白2(lipocalin-2,Lcn2),Western blotting鉴定表达蛋白与肠杆菌素特异性结合,分别在富铁和限铁培养条件下,验证Ex-FABP和Lcn2对大肠杆菌、沙门氏菌(Salmonella)及entB基因突变株的抑菌活性,继而通过外源添加肠杆菌素鉴定Ex-FABP和Lcn2对不同宿主源弯曲菌的抑菌活性。【结果】利用构建的宿主菌BL21(DE3)的entB基因突变株,成功表达和纯化Ex-FABP和Lcn2蛋白,体外结合试验证实表达蛋白可与肠杆菌素特异性结合。在限铁培养条件下,Ex-FABP和Lcn2对仅分泌肠杆菌素的大肠杆菌AN102具有显著抑制生长的作用,而对大肠杆菌ATCC 25922、沙门氏菌CVCC 1806、CVCC 1800及对应的entB缺失株均无抑制作用。最后证实Ex-FABP和Lcn2通过特异性结合肠杆菌素对5株不同宿主来源的弯曲菌均有显著抑制生长的作用。【结论】鸡Ex-FABP蛋白具有与Lcn2类似的功能,即在限铁环境下可特异性结合肠杆菌素,通过阻断细菌利用肠杆菌素摄取铁的途径来抑制其生长,发挥宿主天然免疫功能,为开发新型弯曲菌防控策略提供了理论依据。

关键词：细胞外脂肪酸结合蛋白脂钙蛋白2 肠杆菌素 entB基因弯曲菌

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空肠弯曲菌Cia效应蛋白参与黏附侵袭细胞和激活炎性细胞因子的研究

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微生物学通报 2025年第2期52卷 679-689页

作者：武金亮崔一芳郭芳芳胡格徐福洲北京农学院动物科学技术学院北京102206 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

【背景】空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是世界范围内最重要的食源性病原菌之一,在家禽盲肠内通常共生定殖,成为感染人的主要来源,目前该菌在家禽肠道内的定殖机制尚未阐明。【目的】探究空肠弯曲菌不同效应蛋白在参与黏附侵袭肠上... 详细信息

【背景】空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是世界范围内最重要的食源性病原菌之一,在家禽盲肠内通常共生定殖,成为感染人的主要来源,目前该菌在家禽肠道内的定殖机制尚未阐明。【目的】探究空肠弯曲菌不同效应蛋白在参与黏附侵袭肠上皮细胞、免疫细胞及激活炎性细胞因子中的作用,解析该菌在鸡肠道内定殖的机制,为其防控提供潜在的作用靶标。【方法】首先利用同源重组技术构建空肠弯曲菌NCTC11168菌株不同效应蛋白CiaB、CiaC、CiaD和CiaI的基因缺失突变株,测定突变株对细菌生物膜形成和自身凝集能力的影响,进而测定突变株对肠上皮细胞Caco-2的黏附和侵袭能力,以及对鸡巨噬细胞系HD11的侵袭能力,最后利用RT-qPCR鉴定突变株感染HD11细胞对炎性细胞因子表达的影响。【结果】构建空肠弯曲菌不同效应蛋白CiaB、CiaC、CiaD和CiaI的基因缺失突变株;△ciaD突变株生物膜形成能力降低,△ciaC、△ciaD和△ciaI突变株自身凝集能力增强;△ciaB突变株黏附侵袭Caco-2细胞能力增强,而△ciaC、△ciaD和△ciaI突变株黏附侵袭Caco-2以及侵袭HD11细胞能力均显著降低;空肠弯曲菌感染HD11显著提高不同炎性细胞因子表达水平,△cia B、△ciaC和△ciaD突变株显著降低不同炎性因子表达水平,而△ciaI突变株显著增强不同炎性因子表达水平。【结论】空肠弯曲菌不同Cia效应蛋白在黏附侵袭肠上皮细胞、免疫细胞及激活炎性细胞因子表达中发挥不同的作用,本研究为解析空肠弯曲菌与宿主肠道上皮相互作用机制提供了理论依据,并为该菌的防控提供了潜在靶标。

关键词：空肠弯曲菌 Cia效应蛋白黏附侵袭炎性细胞因子

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空肠弯曲菌鞭毛Ⅲ型分泌系统及其效应蛋白的研究进展

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微生物学通报 2025年第2期52卷 501-509页

作者：武金亮崔一芳郭芳芳胡格徐福洲北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 北京农学院动物科学技术学院北京102206

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是最常见的食源性病原细菌之一,在世界范围内广泛流行,感染人和动物表现不同的临床症状和病理变化,特别是家禽感染后不表现任何临床症状,成为人感染的主要来源,解析该菌在宿主体内的感染和定殖机制对... 详细信息

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是最常见的食源性病原细菌之一,在世界范围内广泛流行,感染人和动物表现不同的临床症状和病理变化,特别是家禽感染后不表现任何临床症状,成为人感染的主要来源,解析该菌在宿主体内的感染和定殖机制对其防控具有关键作用。空肠弯曲菌通过鞭毛Ⅲ型分泌系统分泌效应蛋白,注入宿主细胞内,与细胞内蛋白结合,调控宿主细胞信号通路,改变宿主细胞防御机制,在空肠弯曲菌感染和定殖宿主过程中发挥重要作用。本文就空肠弯曲菌鞭毛Ⅲ型分泌系统分泌效应蛋白的种类及作用机制,以及在解析该菌致病和定殖方面的作用进行综述,对深入理解空肠弯曲菌的致病机制具有重要意义。

关键词：空肠弯曲菌鞭毛Ⅲ型分泌系统细菌效应蛋白弯曲菌入侵抗原

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鸡源和猪源乳杆菌胆盐水解酶的表达及酶学性质比较

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微生物学通报 2017年第12期44卷 2871-2877页

作者：郭芳芳王雅蕾李忍吴晓敏黄建国杨兵徐福洲北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

【目的】随着抗生素生长促进剂(AGPs)在动物饲料中逐步禁止使用,AGPs替代物的研究成为热点。由于胆盐水解酶(BSH)在脂类代谢中的关键作用,成为AGPs替代物研究的一个重要方向。在原核表达和纯化的基础上鉴定鸡源和猪源乳杆菌BSH在酶学性... 详细信息

【目的】随着抗生素生长促进剂(AGPs)在动物饲料中逐步禁止使用,AGPs替代物的研究成为热点。由于胆盐水解酶(BSH)在脂类代谢中的关键作用,成为AGPs替代物研究的一个重要方向。在原核表达和纯化的基础上鉴定鸡源和猪源乳杆菌BSH在酶学性质方面的差异性。【方法】分别对鸡源胆盐水解酶(BSHc)和猪源胆盐水解酶(BSHp)基因进行原核表达和蛋白纯化,通过测定对6种甘氨结合胆盐和牛磺结合胆盐的水解效率获得两种酶的酶学动力学性质,进而测定了温度、pH和金属离子对酶活力的影响。【结果】BSHc和BSHp对甘氨结合胆盐的水解效率高于牛磺结合胆盐,BSHc对甘氨结合胆盐的水解效率较BSHp稍高;BSHc和BSHp的最适酶解温度分别为45°C和42°C;BSHc和BSHp的最适反应pH分别为6.0和5.4;含有Cu^(2+)、Fe^(3+)、Mn^(2+)和Zn^(2+)的金属盐对BSHc和BSHp的酶活力均具有不同程度的抑制作用,特别是Cu^(2+)和Fe^(3+)抑制作用比较强;含有Na^+、K^+、Mg^(2+)和Ca2+的金属盐对BSHc和BSHp酶活力的抑制作用相对较弱或无抑制作用,但KIO3对BSHc和BSHp酶活力具有强抑制作用,KI和CaCl_2对BSHp酶活力也具有较强的抑制作用。【结论】原核表达和纯化的BSHc和BSHp对甘氨结合胆盐的水解效率高于牛磺结合胆盐,BSHc的最适酶解温度和pH稍高于BSHp,Cu^(2+)、Fe^(3+)、Mn^(2+)和Zn^(2+)等金属离子对BSHc和BSHp酶活力具有明显抑制作用,试验结果为鉴定BSH抑制物进而研制AGPs替代物奠定了基础。

关键词：胆盐水解酶酶活力温度 pH 金属离子

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鸡传染性贫血病毒、网状内皮增生症病毒与禽白血病病毒基因芯片检测方法的建立

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华北农学报 2015年第6期30卷 91-96页

作者：苏霞朱瑞豪陈小玲杨丽聪周宏专徐福洲杨兵北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

基于多重PCR技术,建立鸡传染性贫血病病毒(CAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)、禽白血病病毒禽(ALV)A、C、D亚群的基因芯检测方法。根据NCBI收录的鸡传染性贫血病毒(CIAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)与禽白血病病毒(ALV)A、C、D亚群参... 详细信息

基于多重PCR技术,建立鸡传染性贫血病病毒(CAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)、禽白血病病毒禽(ALV)A、C、D亚群的基因芯检测方法。根据NCBI收录的鸡传染性贫血病毒(CIAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)与禽白血病病毒(ALV)A、C、D亚群参考毒株的序列,设计合成特异性扩增引物及探针,将下游引物进行Cy3荧光标记,制备基因芯片;分别提取几种病毒的基因组DNA,进行PCR扩增后与探针进行杂交,荧光检测仪扫描并分析结果。结果表明:制备的芯片能够同时检测CIAV、REV与ALV A、C、D亚群,该方法对病毒的最低检测限为106copies/m L,特异性试验结果表明,该方法与NDV、MDV和IBDV均无交叉反应,可快速鉴别ALV、REV、CIAV。为今后在临床应用中快速鉴别诊断CIAV、REV与ALV A、C、D亚群提供了可行性。

关键词：鸡传染性贫血病毒禽网状内皮增生症病毒禽白血病病毒基因芯片

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益生蜡样芽孢杆菌可转移四环素耐药基因tet(45)特征分析

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科学通报 2020年第32期65卷 3619-3625页

作者：崔一芳徐福洲丁双阳朱奎北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 中国农业大学动物医学院国家兽药安全评价中心北京100193

蜡样芽孢杆菌作为益生菌常用菌种之一被广泛应用于人类医疗保健、畜禽养殖、作物促生长和生物防控、环境水质净化等多个领域.益生菌携带的可转移性耐药基因对公共卫生构成潜在威胁.本团队前期发现1株分离自动物源微生态制剂的蜡样芽孢杆... 详细信息

蜡样芽孢杆菌作为益生菌常用菌种之一被广泛应用于人类医疗保健、畜禽养殖、作物促生长和生物防控、环境水质净化等多个领域.益生菌携带的可转移性耐药基因对公共卫生构成潜在威胁.本团队前期发现1株分离自动物源微生态制剂的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus 9i,BC 9i)携带可转移的四环素耐药基因.通过生物信息学分析发现,BC 9i携带的四环素耐药基因为tet(45)基因变体,同属于膜转运蛋白超家族基因.BC 9i表达的Tet(45)变体蛋白结构与原Tet(45)蛋白结构类似,均由14个跨膜螺旋核心构成,但在环状区域和α-螺旋中表现出细微差异.通过克隆tet(45)基因变体,研究表明其功能是通过四环素外排泵介导耐药性产生,外排泵抑制剂可以有效抑制该作用.本研究从基因、蛋白和功能等方面揭示可转移tet(45)基因变体的特征,为探究益生菌耐药基因来源以及益生菌候选菌株的筛选和合理使用提供科学依据.

关键词：益生菌蜡样芽孢杆菌细菌耐药性可转移耐药基因四环素

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空肠弯曲菌环介导等温扩增检测方法的建立和优化

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华北农学报 2013年第3期28卷 222-226页

作者：许紫建杨兵苏霞周宏专史爱华徐福洲北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

首先根据空肠弯曲菌mapA基因序列设计LAMP引物,建立检测空肠弯曲菌的LAMP检测方法。继而对LAMP方法中不同反应组分的浓度分别进行筛选,结果显示,当内外引物浓度分别为1.6,0.2μmol/L、Mg2+浓度为8mmol/L、dNTP浓度为1.4 mmol/L、Betain... 详细信息

首先根据空肠弯曲菌mapA基因序列设计LAMP引物,建立检测空肠弯曲菌的LAMP检测方法。继而对LAMP方法中不同反应组分的浓度分别进行筛选,结果显示,当内外引物浓度分别为1.6,0.2μmol/L、Mg2+浓度为8mmol/L、dNTP浓度为1.4 mmol/L、Betaine浓度为0.8 mol/L时获得最佳的反应结果。最后对LAMP反应的特异性和敏感性进行检测,特异性检测结果显示,对其他13种革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌扩增结果均为阴性;敏感性检测结果显示,对空肠弯曲菌基因组DNA的检测限为每个反应管100 fg,对空肠弯曲菌培养菌液检测限为每个反应管7.5cfu。试验建立的LAMP方法为快速简便地自动物源性产品中检测空肠弯曲菌奠定了基础。

关键词：空肠弯曲菌环介导等温扩增方法检测优化

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犬细小病毒研究进展

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动物医学进展 2019年第12期40卷 79-84页

作者：周宏专苏霞徐福洲杨兵北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室

犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)是犬急性胃肠炎的主要致病因子之一,典型的临床症状包括呕吐、发热和腹泻,通常6周龄~6月龄的幼犬更易感染。20世纪70年代后期出现CPV-2后目前已在世界范围内流行。病原学研究显示CPV基因组替代率与RN... 详细信息

犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)是犬急性胃肠炎的主要致病因子之一,典型的临床症状包括呕吐、发热和腹泻,通常6周龄~6月龄的幼犬更易感染。20世纪70年代后期出现CPV-2后目前已在世界范围内流行。病原学研究显示CPV基因组替代率与RNA病毒相似,基因组中多个位点出现了新的变异,与病毒致病机制密切相关,引起了科研人员的广泛关注。在检测方面目前开展了多重聚合酶链反应(multiple PCR),聚合酶链式扩增阻碍突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS-PCR),隔热式恒温PCR(insulated isothermal PCR,iiPCR),高分辨率熔解曲线PCR(high-resolution melting PCR,PCR-HRM),横向流动试纸条技术(immunocapture-loop mediated isothermal amplification-lateral flow dipstick,IC-LAMP-LFD),聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR),重组聚合酶扩增方法(recombinase polymerise amplification,RPA),Luminex液态悬浮芯片系统(Luminex xTAG)和免疫层析(immunochromatography,IC)等方法,在防控方面开展了核酸疫苗、重组亚单位苗、病毒样颗粒等新型疫苗以及治疗性药物研究。论文对CPV的流行病学、病原学、检测方法及防控措施等进行了综述。

关键词：犬细小病毒流行病学致病机理检测方法疫苗

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表达副鸡禽杆菌外膜蛋白的重组乳酸乳球菌的构建及其免疫原性研究

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中国兽医科学 2018年第11期48卷 1388-1393页

作者：梅晨李淑芳孙爱华龚玉梅王宏俊北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室

为构建表达副鸡禽杆菌外膜蛋白的重组乳酸乳球菌,本试验按照乳酸乳球菌表达的偏好性,优化合成副鸡禽杆菌外膜蛋白p9的编码碱基序列,将其接入表达载体pNZ8149的多克隆位点并导入食品级乳酸乳球菌NZ3900。将重组乳酸乳球菌灭活后经肌肉注... 详细信息

为构建表达副鸡禽杆菌外膜蛋白的重组乳酸乳球菌,本试验按照乳酸乳球菌表达的偏好性,优化合成副鸡禽杆菌外膜蛋白p9的编码碱基序列,将其接入表达载体pNZ8149的多克隆位点并导入食品级乳酸乳球菌NZ3900。将重组乳酸乳球菌灭活后经肌肉注射免疫SPF鸡,免疫后攻毒测定乳酸乳球菌的保护效果,检测血清中IgG抗体和鼻黏膜sIgA抗体水平并检验免疫效果。PCR结果显示,成功构建了含p9片段的重组乳酸乳球菌,Western-blot检测显示,p9片段可在重组乳酸乳球菌内表达。重组菌最佳诱导表达条件：Nisin浓度为20 ng/mL、诱导时间为4 h。鸡肌肉注射免疫后可产生p9蛋白特异性的血清Ig G和鼻黏膜sIgA抗体。乳酸乳球菌重组疫苗免疫鸡对副鸡禽杆菌攻毒的保护率为60%-80%。结果表明,本研究成功构建了重组乳酸乳球菌pNZ8149-p9/NZ3900,该重组菌作为免疫原免疫鸡,对副鸡禽杆菌攻毒具有较好的免疫保护作用。

关键词：副鸡禽杆菌重组乳酸乳球菌 IgG sIgA

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5种常见犬腹泻病毒基因芯片检测方法的建立

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中国畜牧兽医 2019年第8期46卷 2211-2219页

作者：苏霞周宏专常彦嫣齐颀林路路张进徐福洲杨兵北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室

为建立一种简便、快速、高效的可同时区分犬腺病毒1型(canine adenovirus type 1,CAV-1)、犬腺病毒2型(canine adenovirus type 2,CAV-2)、犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)、犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)、犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)5种常见犬腹泻病毒的基因芯片诊断方法,本研究以CAV-1、CAV-2、CCV、CDV、CPV 5种犬腹泻病毒为靶病毒,根据NCBI上收录的病毒基因序列在其保守区域内设计引物,在此基础上根据变异区域设计针对每种病毒的探针2~3条,优化检测体系的各反应条件,确定该检测方法的特异性与敏感性,建立可同时区分5种病毒的基因芯片检测方法。结果显示,建立的基因芯片检测方法可同时检测以上述5种犬腹泻病毒,其中PCR的退火温度为55℃、延伸时间为1 min 15 s;探针与PCR产物的杂交温度40℃、杂交时间2.5 h时,该方法对CAV-1、CAV-2、CCV、CDV和CPV 5种病毒标准品的检测限分别为0.2 fg/μL、2 fg/μL、2 fg/μL、20 pg/μL和0.02 fg/μL,具有较高的灵敏性;同时对犬副流感病毒进行特异性试验,发现无阳性信号出现,具有较强的特异性;对14份临床腹泻样品检测结果显示,基因芯片方法对CAV-1、CAV-2、CCV、CDV和CPV 5种病毒的阳性检出率分别为28.57%、50.00%、64.28%、14.28%和85.71%,并且基因芯片检测方法的敏感性较PCR要高10~100倍。以上结果表明,本研究建立的基因芯片检测方法具有特异、敏感等特点,对临床中犬类混合感染病毒检测具有一定的诊断意义。

关键词：犬腹泻病毒基因芯片诊断

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