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鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联灭活疫苗对不同日龄雏鸡的免疫效力研究

中国畜牧兽医 2019年第3期46卷 898-904页

作者：沈佳史爱华章振华李林景小冬张建伟郑小兰姜北宇北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

为评估鸡新城疫(ND)-传染性支气管炎(IB)-传染性法氏囊病(IBD)三联灭活疫苗对不同日龄和不同水平母源抗体雏鸡的免疫效力和持续期,本试验用该疫苗免疫7、14、21日龄SPF雏鸡和有母源抗体的普通雏鸡,免疫后采血测定ND血凝抑制抗体(HI Ab)... 详细信息

为评估鸡新城疫(ND)-传染性支气管炎(IB)-传染性法氏囊病(IBD)三联灭活疫苗对不同日龄和不同水平母源抗体雏鸡的免疫效力和持续期,本试验用该疫苗免疫7、14、21日龄SPF雏鸡和有母源抗体的普通雏鸡,免疫后采血测定ND血凝抑制抗体(HI Ab)、IB血凝抑制抗体(HI Ab)及IBD中和抗体(NA),并用传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒攻击。结果显示,7日龄SPF雏鸡免疫后21 d ND HI抗体、IB HI抗体及IBD中和抗体效价分别为7.9log2、6.9log2和14.1log2,SPF鸡日龄越大,抗体水平越高;28日龄SPF鸡免疫后3个月,0.3 mL免疫剂量组试验鸡ND HI、IB HI及IBD中和抗体效价分别达6.5log2、6.1log2和13.6log2,IBDV攻毒保护率均为100%(10/10);不同日龄普通雏鸡免疫效果与SPF鸡试验一致,抗体水平随鸡日龄增大而升高,IBD攻毒保护率也都达到100%(10/10)。试验结果证实,鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联灭活疫苗可使7、14及21日龄SPF雏鸡和普通雏鸡产生良好的免疫力,对雏鸡的免疫期至少为3个月。

关键词：新城疫(ND) 传染性支气管炎(IB) 传染性法氏囊病(IBD) 三联灭活疫苗免疫效力免疫持续期

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利用实时荧光定量方法进行副猪嗜血杆菌分子血清分型的研究

利用实时荧光定量方法进行副猪嗜血杆菌分子血清分型的研究

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会暨中国畜牧兽医学会生物制品学分会2021年学术论坛

作者：崔一芳郭芳芳蔡旭旺曹晓亚王宏俊杨兵周宏专苏霞徐福洲畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京市农林科学院畜牧兽医研究所农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

副猪嗜血杆菌（Glaesserella parasuis,GPS）是引起猪格拉泽氏病（Gl?sser's disease）的细菌性病原,可感染猪出现多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎及败血症等多种临床表现和病理变化,是当前我国养猪业最重要的细菌性疫病之一。GPS目... 详细信息

副猪嗜血杆菌（Glaesserella parasuis,GPS）是引起猪格拉泽氏病（Gl?sser's disease）的细菌性病原,可感染猪出现多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎及败血症等多种临床表现和病理变化,是当前我国养猪业最重要的细菌性疫病之一。GPS目前至少鉴定出15个血清型,不同血清型菌株存在高毒力、中等毒力和无毒力等显著差异,因而鉴定GPS血清型对该病的诊断、防治以及流行病学调查具有重要意义。通过对GPS 15个血清型荚膜多糖合成编码基因座的基因结构进行分析发现,不同血清型菌株之间存在显著差异,基于不同血清型的特异性基因进行多重PCR的分子血清分型方法已有报道,此种分子血清分型方法比传统的血清分型方法具有高效、准确、快速等显著优势。为克服多重PCR方法中需要跑胶、通过条带判断时不易区分大小等缺点,本试验建立了一种简便、快速的基于实时荧光定量（qPCR）检测方法中Ct值大小进行GPS血清型判定的检测方法,即利用报道的GPS不同血清型特异性基因片段,设计不同血清型的特异性qPCR引物,建立基于Sybr Green荧光染色的qPCR检测方法。通过对GPS15种血清型国际参考菌株检测结果显示,对应血清型菌株的Ct值均小于12,而其它血清型菌株均大于19,扩增效率介于85.5%至110.4%之间,相关系数R>0.98。通过对83个临床分离株检测结果显示,本试验建立的qPCR与多重PCR检测方法符合率为98.8%（82/83）,其中经琼脂扩散试验（GID）鉴定的43株血清型菌株中41株与qPCR检测结果相符,2株血清12型菌株被鉴定为血清5型。本试验结果显示,基于Ct值的实时荧光定量检测方法应用于GPS分子血清分型具有简便、快速、准确等显著优点,对临床上GPS流行病学调查、快速诊断和防控具有重要的应用价值。

关键词：副猪嗜血杆菌分子血清分型实时荧光定量方法

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鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗与活疫苗免疫鸡病毒载量和免疫效果的比较研究

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中国预防兽医学报 2019年第4期41卷 391-395页

作者：叶丽娜李林沈佳张建伟史爱华郑小兰章振华北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室

为比较鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗与活疫苗免疫鸡法氏囊及外周血淋巴细胞(PBMC)中的病毒载量及免疫效果,本研究采用IBD免疫复合物疫苗和鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)BX株活疫苗免疫1日龄SPF鸡,于免疫后7d、14d、21d、28d、35d、... 详细信息

为比较鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗与活疫苗免疫鸡法氏囊及外周血淋巴细胞(PBMC)中的病毒载量及免疫效果,本研究采用IBD免疫复合物疫苗和鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)BX株活疫苗免疫1日龄SPF鸡,于免疫后7d、14d、21d、28d、35d、42d采用SYBRGreenI荧光定量PCR、ELISA方法及中和试验检测免疫鸡法氏囊和PBMC中IBDV载量和免疫鸡血清中IBDV抗体滴度,并攻毒,计算两种疫苗的保护率。结果显示,活疫苗免疫7d时IBDV在法氏囊和PBMC中的载量均比其它时间点的高,在14d时到达到最高,之后逐渐下降;两种疫苗刺激产生的IBDV抗体滴度随免疫时间的延长呈升高趋势;在免疫后7d攻毒两种疫苗的保护率均为0,其它时间的攻毒保护率均为100%。本研究结果表明,IBD免疫复合物疫苗与活疫苗免疫后病毒在鸡体内开始大量复制的时间并不相同,但免疫效果基本相同。本实验为IBD免疫复合物疫苗的研发提供实验依据。

关键词： IBD免疫复合物疫苗活疫苗病毒载量免疫效果

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副鸡禽杆菌外膜蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医杂志 2019年第6期55卷 22-25,31页

作者：梅晨李淑芳黄明明孙爱华龚玉梅王宏俊北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室

副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum,Apg)是鸡传染性鼻炎的致病菌,可以引起急性呼吸道病,可导致蛋鸡产蛋率下降、从而造成严重的经济损失。副鸡禽杆菌引起的症状与鸡毒支原体等病原引起的其他上呼吸道传染病非常相似,本试验利用副... 详细信息

副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum,Apg)是鸡传染性鼻炎的致病菌,可以引起急性呼吸道病,可导致蛋鸡产蛋率下降、从而造成严重的经济损失。副鸡禽杆菌引起的症状与鸡毒支原体等病原引起的其他上呼吸道传染病非常相似,本试验利用副鸡禽杆菌外膜蛋白,建立间接 ELISA 抗体检测方法,用于血清抗体的检测。通过分析副鸡禽杆菌外膜蛋白HMTp210中较为保守的P9片段,将其进行原核表达并纯化,纯化的P9蛋白免疫鸡制备了抗血清。结果显示,P9蛋白分子量62Ku,纯度80%以上。以纯化的蛋白P9作为包被抗原,采用棋盘滴定法确定了抗原最佳包被浓度为1μg/Ml、血清样品最佳稀释度为1∶100,作用时间为 60min;酶标二抗的最佳稀释浓度为1∶10000,最佳作用时间为 30min;底物显色时间为15 min;阴、阳性的判定值为0.3。按上述条件建立的间接ELISA方法可以检测出P9蛋白免疫后的鸡血清及三种血清型副鸡禽杆菌的阳性鸡血清,与其他禽病病原体抗血清无交叉反应,本研究为检测副鸡禽杆菌血清抗体提供了一种新的方法。

关键词：副鸡禽杆菌抗原蛋白 P9 间接 ELISA

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Ⅰ群4型禽腺病毒DC株灭活苗对流行毒株的保护力试验

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动物医学进展 2019年第9期40卷 34-37页

作者：赵蕾张建伟李林史爱华习硕沈佳姜北宇章振华北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室

为了检验Ⅰ群4型禽腺病毒(FAdV-4)DC株对几个流行毒株的保护力,使用含有DC株的鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、传染性法氏囊病、禽腺病毒病(Ⅰ群4型)(La Sota株+BX13株+BJQ902株+DC株)四联灭活疫苗免疫SPF鸡,免疫接种后21 d采血测定FAdV-4... 详细信息

为了检验Ⅰ群4型禽腺病毒(FAdV-4)DC株对几个流行毒株的保护力,使用含有DC株的鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、传染性法氏囊病、禽腺病毒病(Ⅰ群4型)(La Sota株+BX13株+BJQ902株+DC株)四联灭活疫苗免疫SPF鸡,免疫接种后21 d采血测定FAdV-4中和抗体,然后分别用DC株和2015年-2017年分离的5个FAdV-4分离株(ZB2016株、ZD2015株、SC2016株、DT1-2017株和DT2-2017株)进行攻击,观察新流法腺四联苗对FAdV-4流行毒株的保护效果。结果显示,免疫组鸡FAdV-4中和抗体效价达到9.6 log2~10.1 log2,而对照组鸡中和抗体为0;免疫鸡用DC株、ZB2016株、ZD2015株、SC2016株、DT1-2017株和DT2-2017株攻毒后,免疫组鸡得到100%(10/10)保护,对照组鸡90%(9/10)~100%(10/10)发病。试验证明,用含DC株制备出的新流法腺四联苗对腺病毒的流行毒株具有较好的保护效力。

关键词： Ⅰ群4型禽腺病毒流行毒株免疫保护力

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鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感(HH9亚型)-传染性法氏囊病四联灭活疫苗的研究

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中国家禽 2019年第7期41卷 15-19页

作者：史爱华李林章振华张建伟沈佳习硕姜北宇赵蕾北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

为研制鸡新城疫(ND)-传染性支气管炎(IB)-禽流感(AI,H9亚型)-传染性法氏囊病(IBD)四联灭活疫苗,用易感鸡胚增殖NDV La Sota株、IBV M41株及AIV H9亚型WD株,用DF-1细胞增殖IBDV BJQ902株,收获病毒液,经浓缩、灭活后,制成3批油乳剂灭活疫... 详细信息

为研制鸡新城疫(ND)-传染性支气管炎(IB)-禽流感(AI,H9亚型)-传染性法氏囊病(IBD)四联灭活疫苗,用易感鸡胚增殖NDV La Sota株、IBV M41株及AIV H9亚型WD株,用DF-1细胞增殖IBDV BJQ902株,收获病毒液,经浓缩、灭活后,制成3批油乳剂灭活疫苗。按照《中国兽药典》对疫苗进行检验。结果显示:3批疫苗的性状检验、装量检验、无菌检验、甲醛、汞类防腐剂残留量测定和安全性检验均合格。效力检验显示:NDV血凝抑制(HI)效价为6.0～6.2 log2;IBV HI效价二免是首免的8.00～13.92倍;AIV(H9)HI效价8.8～9.1 log2;IBDV中和抗体效价15.7～16.1 log2。攻毒后免疫鸡均100%保护(10/10),对照鸡全部发病(5/5)。研究结果表明制备的四联苗安全有效、免疫效力高,为该疫苗的产业化开发提供了依据。

关键词：新城疫传染性支气管炎 H9亚型禽流感传染性法氏囊病灭活疫苗

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鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗和活疫苗对免疫鸡NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达的影响

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中国家禽 2019年第6期41卷 16-20页

作者：叶丽娜李林沈佳张建伟史爱华郑小兰章振华北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

为研究鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗和活疫苗免疫对鸡外周血淋巴细胞中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ等5种免疫因子mRNA表达的影响,试验用IBD免疫复合物疫苗和BX株活疫苗免疫1日龄SPF鸡,并设立空白对照组,于免疫后7 d、14 ... 详细信息

为研究鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗和活疫苗免疫对鸡外周血淋巴细胞中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ等5种免疫因子mRNA表达的影响,试验用IBD免疫复合物疫苗和BX株活疫苗免疫1日龄SPF鸡,并设立空白对照组,于免疫后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d取外周血,分离淋巴细胞,用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法测淋巴细胞中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达水平。结果表明:免疫后7～42 d,活疫苗组NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达均呈现上调,且上调时间主要在免疫后7～14 d;免疫复合物疫苗对NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达基本无影响。提示IBD活疫苗免疫对鸡外周血淋巴细胞免疫功能影响大于免疫复合物疫苗。

关键词： IBD免疫复合物疫苗活疫苗外周血淋巴细胞免疫因子

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Toll样受体3激动剂在疫苗佐剂中的应用进展

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生物技术进展 2020年第2期10卷 144-151页

作者：曹晓亚徐福洲郭杰温彤苏霞周宏专杨兵崔一芳郭芳芳北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 包头师范学院生物科学与技术学院内蒙古包头014030

模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)在先天免疫系统中起着至关重要的作用,是重要的宿主传感器,可识别入侵病原体所显示的病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP)。PAMP是独立的免疫调节剂,且具... 详细信息

模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)在先天免疫系统中起着至关重要的作用,是重要的宿主传感器,可识别入侵病原体所显示的病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP)。PAMP是独立的免疫调节剂,且具有多种生化成分和特殊结构,逐渐被认为是许多现代疫苗的关键成分。Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)3激动剂是一种合成的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),能够以与病毒感染相似的模式激活宿主免疫防御的多种通路。当与抗原适当混合时,TLR3激动剂可以用作PAMP-佐剂,以调节和优化抗原特异性免疫应答。基于此,主要讨论了TLR3及其激动剂的作用机制以及TLR3激动剂在疫苗佐剂中的应用进展,以期为动物疫苗的研究提供新的思路。

关键词：适应性免疫佐剂先天免疫 poly IC Toll样受体3

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抗牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白中和活性单克隆抗体的制备及鉴定

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中国兽医科学 2019年第12期49卷 1514-1519页

作者：洪家兵刘文晓王萍李永清江西农业大学动物科学技术学院江西南昌330045 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

为了制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD蛋白的单克隆抗体,本研究用纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,然后以纯化的昆虫细胞表达的gD蛋白作为ELISA包被抗原筛选杂交瘤细胞株。结果获得3株能够稳定分泌抗gD蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B4、3E8... 详细信息

为了制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD蛋白的单克隆抗体,本研究用纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,然后以纯化的昆虫细胞表达的gD蛋白作为ELISA包被抗原筛选杂交瘤细胞株。结果获得3株能够稳定分泌抗gD蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B4、3E8和4F12。采用夹心ELISA鉴定单克隆抗体的Ig亚类,结果显示,1B4、3E8为IgG2b,4F12为IgG1。免疫印迹试验与间接免疫荧光试验表明,3株单克隆抗体均能与IBRV发生特异性反应。微量中和试验结果显示,1B4和3E8单克隆抗体具有中和IBRV的活性,中和效价均为1∶320。本研究成功制备了具备中和作用的抗牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体,为建立特异性的IBRV诊断方法及致病机理的研究提供了工具。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白单克隆抗体

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表达副鸡禽杆菌外膜蛋白的重组乳酸乳球菌的构建及其免疫原性研究

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中国兽医科学 2018年第11期48卷 1388-1393页

作者：梅晨李淑芳孙爱华龚玉梅王宏俊北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室

为构建表达副鸡禽杆菌外膜蛋白的重组乳酸乳球菌,本试验按照乳酸乳球菌表达的偏好性,优化合成副鸡禽杆菌外膜蛋白p9的编码碱基序列,将其接入表达载体pNZ8149的多克隆位点并导入食品级乳酸乳球菌NZ3900。将重组乳酸乳球菌灭活后经肌肉注... 详细信息

为构建表达副鸡禽杆菌外膜蛋白的重组乳酸乳球菌,本试验按照乳酸乳球菌表达的偏好性,优化合成副鸡禽杆菌外膜蛋白p9的编码碱基序列,将其接入表达载体pNZ8149的多克隆位点并导入食品级乳酸乳球菌NZ3900。将重组乳酸乳球菌灭活后经肌肉注射免疫SPF鸡,免疫后攻毒测定乳酸乳球菌的保护效果,检测血清中IgG抗体和鼻黏膜sIgA抗体水平并检验免疫效果。PCR结果显示,成功构建了含p9片段的重组乳酸乳球菌,Western-blot检测显示,p9片段可在重组乳酸乳球菌内表达。重组菌最佳诱导表达条件：Nisin浓度为20 ng/mL、诱导时间为4 h。鸡肌肉注射免疫后可产生p9蛋白特异性的血清Ig G和鼻黏膜sIgA抗体。乳酸乳球菌重组疫苗免疫鸡对副鸡禽杆菌攻毒的保护率为60%-80%。结果表明,本研究成功构建了重组乳酸乳球菌pNZ8149-p9/NZ3900,该重组菌作为免疫原免疫鸡,对副鸡禽杆菌攻毒具有较好的免疫保护作用。

关键词：副鸡禽杆菌重组乳酸乳球菌 IgG sIgA

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