检索结果-内蒙古大学图书馆

黑龙江畜牧兽医 2015年第1期 118-120,216页

作者：路明华王宏俊路迎迎李桂萍孙惠玲北京市农林科学院畜牧兽医研究所/畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 河北工程大学农学院河北邯郸056021

为了从北京市周边郊区某猪场发病仔猪的脑组织中分离到伪狂犬病病毒，试验采用细胞培养、空斑纯化、PCR鉴定、动物感染试验、电镜观察的方法进行分离。结果表明：家兔接种病毒后可引起典型的伪狂犬病症状，继而死亡；PK-15细胞接种病毒... 详细信息

为了从北京市周边郊区某猪场发病仔猪的脑组织中分离到伪狂犬病病毒，试验采用细胞培养、空斑纯化、PCR鉴定、动物感染试验、电镜观察的方法进行分离。结果表明：家兔接种病毒后可引起典型的伪狂犬病症状，继而死亡；PK-15细胞接种病毒出现典型细胞病变，毒价为1×10^8TCID50／mL；电镜观察可见圆形、有囊膜、直径为150～180nm大小的病毒颗粒；PCR反应可扩增出特异性长为I783bp的DNA片段。说明该分离株为猪伪狂犬病病毒野毒株。

关键词：伪狂犬病病毒分离鉴定细胞电镜病变

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伪狂犬病病毒载体疫苗研究进展

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动物医学进展 2013年第6期34卷 136-140页

作者：路明华路迎迎王宏俊北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 河北工程大学农学院河北邯郸056021

随着分子生物技术的快速发展,伪狂犬病病毒作为疫苗载体的研究也更加深入。以伪狂犬病病毒部分基因缺失株为载体,与其他病原体的抗原编码基因共同构建重组病毒,进而研制重组疫苗,可达到一针多防,安全高效的目的,在实际生产中也有重要意... 详细信息

随着分子生物技术的快速发展,伪狂犬病病毒作为疫苗载体的研究也更加深入。以伪狂犬病病毒部分基因缺失株为载体,与其他病原体的抗原编码基因共同构建重组病毒,进而研制重组疫苗,可达到一针多防,安全高效的目的,在实际生产中也有重要意义。论文对以伪狂犬病病毒作为疫苗载体的研究进行了综述。

关键词：伪狂犬病病毒疫苗载体

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IHNV核衣壳蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定

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华北农学报 2014年第3期29卷 36-40页

作者：谢三磊王雯慧孙惠玲甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

采用RT-PCR方法从传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)中扩增RNA获得1 176 bp的核衣壳蛋白(N)基因,将其插入于pFB-LIC-Bse杆状病毒载体中,构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-N,转化至感受态细胞DH10Bac中,获得重组杆粒rBacmid-N。再将其转染至Sf9... 详细信息

采用RT-PCR方法从传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)中扩增RNA获得1 176 bp的核衣壳蛋白(N)基因,将其插入于pFB-LIC-Bse杆状病毒载体中,构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-N,转化至感受态细胞DH10Bac中,获得重组杆粒rBacmid-N。再将其转染至Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。IFA和Western Blot分析表明,重组N蛋白可以被辣根过氧化物酶(HRP)标记的组氨酸单抗(anti-His)识别,表明,IHNV N基因在昆虫细胞Sf9中获得了正确表达。为深入研究N蛋白的功能和免疫学特性奠定了基础。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒核衣壳蛋白基因重组杆状病毒

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鸡传染性贫血病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医 2015年第4期42卷 859-864页

作者：杨丽聪苏霞朱瑞豪周宏专徐福州杨兵孙继国河北农业大学动物医学院保定071000 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

为建立鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus,CIAV)的实时荧光定量PCR检测方法,本试验通过CIAV基因组保守区域设计1对扩增片段大小为180bp的特异性引物,构建pGM-T-CIAV重组质粒,制备阳性标准品,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定... 详细信息

为建立鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus,CIAV)的实时荧光定量PCR检测方法,本试验通过CIAV基因组保守区域设计1对扩增片段大小为180bp的特异性引物,构建pGM-T-CIAV重组质粒,制备阳性标准品,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性试验、特异性试验和重复性试验。结果显示,CIAV的Ct阈值与标准品浓度在5.33×108至5.33×103拷贝/μL间呈良好的线性关系,相关系数R2=0.998,斜率为-3.443,产物Tm值在86℃左右。该方法与网状内皮组织增生病病毒(REV)、禽白血病病毒(ALV)J亚型、马立克氏病病毒(MDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组均无交叉反应,敏感性为5.33拷贝/μL,比普通PCR高1 000倍,批内和批间重复试验变异系数均小于3%。结果表明,本试验建立的CIAV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法可实现对鸡传染性贫血病的早期诊断及感染程度的定量分析的检测。

关键词：鸡传染性贫血病毒实时荧光定量 PCR SYBR Green I 定量分析

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沙门菌鞭毛蛋白增强禽流感灭活疫苗的免疫效力研究

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动物医学进展 2014年第9期35卷 6-10页

作者：黄秀芬章振华王天坤孙惠玲陈小玲李永清畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100097 昌平区动物预防疫病控制中心北京102200

为研制沙门菌鞭毛蛋白佐剂禽流感疫苗,以盐酸裂解法制备和纯化鸡肠炎沙门菌鞭毛蛋白,将其作为佐剂,包裹灭活的禽流感病毒(H9N2亚型),制备禽流感灭活疫苗并进行动物试验。结果表明,该疫苗分别经滴鼻和肌肉注射接种后,虽然没有明显提高免... 详细信息

为研制沙门菌鞭毛蛋白佐剂禽流感疫苗,以盐酸裂解法制备和纯化鸡肠炎沙门菌鞭毛蛋白,将其作为佐剂,包裹灭活的禽流感病毒(H9N2亚型),制备禽流感灭活疫苗并进行动物试验。结果表明,该疫苗分别经滴鼻和肌肉注射接种后,虽然没有明显提高免疫鸡的血凝抑制(HI)抗体水平,但显著提高了血清中和呼吸道黏膜分泌液中抗禽流感病毒特异性IgA水平;攻毒试验结果表明,经滴鼻接种后,单独使用灭活的AIV没有产生免疫保护作用(0/15),而鞭毛蛋白佐剂灭活苗免疫组保护率达53.3%(8/15);经肌肉注射接种后,单独免疫灭活的AIV组的保护率为30%(3/10),而鞭毛蛋白佐剂灭活苗免疫组保护率达60%(6/10)。表明沙门菌鞭毛蛋白能够有效促进禽流感灭活疫苗的免疫保护效果。

关键词：沙门菌鞭毛禽流感免疫佐剂保护效力

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不同宿主源弯曲菌黏附侵袭肠上皮细胞及在鸡肠道内定殖的比较

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微生物学通报 2022年第12期49卷 5150-5158页

作者：郭家卉崔一芳李鹏祥申学阳曹晓亚马洪海郭芳芳丁保安徐福洲青海大学农牧学院青海西宁810016 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 北京农学院动物科学技术学院北京102206

【背景】弯曲菌(Campylobacter)是重要的人畜共患病原菌,可在多种动物肠道定殖,但不同宿主源弯曲菌对肠上皮细胞的黏附侵袭特征及在鸡肠道内的定殖能力并不明确。【目的】探究不同宿主源弯曲菌对不同宿主肠上皮细胞黏附侵袭及在鸡肠道... 详细信息

【背景】弯曲菌(Campylobacter)是重要的人畜共患病原菌,可在多种动物肠道定殖,但不同宿主源弯曲菌对肠上皮细胞的黏附侵袭特征及在鸡肠道内的定殖能力并不明确。【目的】探究不同宿主源弯曲菌对不同宿主肠上皮细胞黏附侵袭及在鸡肠道内定殖能力的差异性。【方法】利用5株来自不同宿主源弯曲菌,包括人源、鸡源、鸭源和牛源空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)及猪源结肠弯曲菌(Campylobacter coli),在对菌株PCR鉴定、运动力及生物膜形成能力测定的基础上,分别测定各菌株对人源肠上皮细胞Caco-2、猪源肠上皮细胞IPEC-J2和大鼠源肠上皮细胞IEC-6的黏附能力,通过庆大霉素保护试验测定菌株对肠上皮细胞的侵袭能力,比较黏附量和侵袭量的差异;将5株弯曲菌分别口服攻毒鸡,于攻毒后不同日龄(different days post inoculation,DPI)采集肠道样品测定弯曲菌的菌落数,比较不同弯曲菌在鸡肠道内定殖的差异。【结果】人源弯曲菌运动力显著高于其他4株动物源弯曲菌,而牛源和猪源弯曲菌生物膜形成能力显著高于其他菌株。黏附侵袭测定结果显示,人源弯曲菌对Caco-2细胞的黏附能力显著高于动物源弯曲菌,但侵袭能力显著低于动物源弯曲菌;鸭源和牛源弯曲菌对IPEC-J2细胞的黏附能力显著低于其他菌株,而且鸭源弯曲菌的侵袭能力显著低于其他菌株;不同菌株对IEC-6细胞的黏附能力无显著差异,但鸡源弯曲菌侵袭能力显著低于其他菌株。不同弯曲菌口服攻毒鸡后1、3和6 d动物源弯曲菌定殖水平显著高于人源,在攻毒后10 d和15 d仅牛源弯曲菌显著高于人源,于攻毒后15 d所有菌株达到约8-10 Log10(CFU/g)的稳定定殖水平。【结论】来源于不同宿主的弯曲菌对不同宿主肠上皮细胞均具有黏附侵袭能力,同时可在鸡肠道内稳定定殖,提示弯曲菌在不同动物间传播和适应性定殖的特征,对开展弯曲菌针对性防控措施具有一定的借鉴意义。

关键词：弯曲菌宿主肠上皮细胞黏附侵袭定殖

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抗牛传染性鼻气管炎病毒囊膜gD糖蛋白的单链抗体在昆虫细胞中表达及活性检测

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中国畜牧兽医 2017年第8期44卷 2475-2482页

作者：吴靖许健黄秀芬沈俊俊何后军李永清江西农业大学动物科学技术学院南昌330045 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

为了获得具有生物学活性的牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gD蛋白特异性单链抗体,试验采用PCR方法扩增杂交瘤细胞的cDNA单链抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,通过重叠延伸PCR及Linker序列... 详细信息

为了获得具有生物学活性的牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gD蛋白特异性单链抗体,试验采用PCR方法扩增杂交瘤细胞的cDNA单链抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,通过重叠延伸PCR及Linker序列获得完整的单链抗体基因,将单链抗体基因克隆至杆状病毒载体pFB-LICBse中,构建重组转移载体pFB-VH-VL,将其转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中制备重组杆粒rBacmid-VHVL,将重组杆粒rBacmid-VH-VL转染至Sf9细胞中获得携带单链抗体基因的重组杆状病毒。该重组杆状病毒在Sf9细胞中表达了分子质量约为30ku的单链抗体蛋白。Western blotting结果显示,重组单链抗体蛋白能被His标签抗体特异性结合,也能特异性结合gD蛋白。间接免疫荧光试验结果显示,该单链抗体蛋白能够识别感染牛肾细胞MDBK中的IBRV。本研究在昆虫细胞中成功表达了具有识别IBRV的gD蛋白特异性单链抗体,为牛传染性鼻气管炎的诊断与治疗奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒囊膜糖蛋白gD 单链抗体杆状病毒表达系统

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猪博卡病毒研究概述

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动物医学进展 2014年第8期35卷 103-107页

作者：周宏专北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所矿物元素营养研究室北京100193

2009年瑞典学者在患断奶仔猪多系统衰竭综合征的猪体内首次检测到猪博卡病毒,近年来对该病毒的研究已从分子病原学向流行病学、致病性等逐渐深入,对揭示该病原的致病机理将具有重要意义。论文基于国内外的相关研究,对该病毒的发现、基... 详细信息

2009年瑞典学者在患断奶仔猪多系统衰竭综合征的猪体内首次检测到猪博卡病毒,近年来对该病毒的研究已从分子病原学向流行病学、致病性等逐渐深入,对揭示该病原的致病机理将具有重要意义。论文基于国内外的相关研究,对该病毒的发现、基因组结构特征、病毒分型、流行现状及检测诊断方法等方面进行概述。

关键词：猪博卡病毒基因组结构流行病学检测

来源：评论

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共表达鸡传染性法氏囊病病毒LX株VP2基因及鸡新城疫病毒PX02/3株F基因的重组火鸡疱疹病毒的构建

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中国兽医杂志 2020年第11期56卷 26-30,I0004,I0005页

作者：王子书王萍许健杨大为李永清江波江西农业大学动物科学技术学院江西南昌330045 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京海淀100097 北京市农林科学院畜禽疫病研究中心北京海淀100097

为构建表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP 2基因和鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组火鸡疱疹病毒(HVT)。本研究利用基因重组技术,在HVT基因组的非必需区UL45-46插入CMV启动子调控下的IBDV LX株的VP 2基因表达盒,然后在HVT基因组的非必需区US1... 详细信息

为构建表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP 2基因和鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组火鸡疱疹病毒(HVT)。本研究利用基因重组技术,在HVT基因组的非必需区UL45-46插入CMV启动子调控下的IBDV LX株的VP 2基因表达盒,然后在HVT基因组的非必需区US1-10插入pec启动子调控下的NDV PX02/3株的F基因表达盒,成功构建并拯救出同时表达IBDV和NDV保护性抗原基因的重组HVT病毒(rHVT-VP2-F)。经PCR、Western Blot、IFA鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的VP2蛋白和F蛋白。本研究为研制rHVT-VP2-F活载体疫苗提供了科学依据。

关键词：新城疫病毒传染性法氏囊病病毒重组火鸡疱疹病毒 F基因 VP 2基因

来源：评论

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猪博卡病毒不同基因型三重PCR检测方法的建立及初步应用

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华北农学报 2016年第2期31卷 12-16页

作者：宏春慧杨兵覃湘婕周宏专徐福洲苏霞薛静张晓东王金洛北京农学院动物科学技术学院北京102206 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 北京农业生物技术研究中心北京100097

为鉴别猪博卡病毒1型、2型和3型3种基因型,根据猪博卡病毒基因序列分别设计3对针对保守区域的引物进行PCR扩增,扩增目的片段大小分别为645 bp(PBoV1型)、352 bp(PBoV2型)和259 bp(PBoV3型)。通过引物浓度和退火温度等条件优化,首次建立... 详细信息

为鉴别猪博卡病毒1型、2型和3型3种基因型,根据猪博卡病毒基因序列分别设计3对针对保守区域的引物进行PCR扩增,扩增目的片段大小分别为645 bp(PBoV1型)、352 bp(PBoV2型)和259 bp(PBoV3型)。通过引物浓度和退火温度等条件优化,首次建立了同时检测猪博卡病毒3种基因型的三重PCR方法。所建立的三重PCR方法扩增其他猪病病毒结果均为阴性,最低检测限为8×10-7ng/μL。结果表明,该方法具有较好的特异性和敏感性。对临床样品进行三重PCR和单项PCR检测,对比结果显示符合率为100%。该方法的建立为猪博卡病毒3种不同基因型的鉴别检测提供了有效手段。

关键词：猪博卡病毒基因型三重PCR 检测

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