检索结果-内蒙古大学图书馆

临床检验杂志 2014年第5期32卷 333-336页

作者：刘旭霞姜腾勇郭俊郑帅王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心血管重塑相关疾病教育部重点实验室首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心内科北京100029

目的通过靶向捕获高通量测序技术初步筛查肥厚型心肌病(HCM)致病基因突变。方法收集1例HCM患者临床信息和外周血,并提取基因组DNA,制备DNA全基因组文库。挑选导致HCM的8个候选基因,用GenCap基因序列捕获技术靶向富集该患者外周血DNA候... 详细信息

目的通过靶向捕获高通量测序技术初步筛查肥厚型心肌病(HCM)致病基因突变。方法收集1例HCM患者临床信息和外周血,并提取基因组DNA,制备DNA全基因组文库。挑选导致HCM的8个候选基因,用GenCap基因序列捕获技术靶向富集该患者外周血DNA候选基因并行高通量测序。通过生物信息学分析筛选致病突变。用Sanger测序来验证相应致病基因突变位点。结果目标基因靶向捕获测序结果经与公共数据库和内部健康人测序数据库对比,发现致病基因突变位点MYBPC3 D770N,该致病基因突变与Sanger测序结果一致。结论用目标基因靶向捕获测序技术可实现对HCM致病基因突变的初步筛查,对HCM的临床基因诊断具有潜在的应用价值。

关键词：肥厚型心肌病突变靶向捕获高通量测序

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小动物活体成像生物发光稳定细胞株的构建

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新乡医学院学报 2014年第6期31卷 417-419页

作者：朴春梅邱淑兰刘飒王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室北京100029

目的构建能用于小动物活体成像系统的、能稳定表达荧光素酶基因的小鼠Panc02胰腺癌细胞株制作动物模型。方法利用表达荧光素酶基因pGL4.20为载体,转染小鼠Panc02胰腺癌细胞株,通过检测荧光素酶活性,检测其表达效果,通过嘌呤霉素筛选稳... 详细信息

目的构建能用于小动物活体成像系统的、能稳定表达荧光素酶基因的小鼠Panc02胰腺癌细胞株制作动物模型。方法利用表达荧光素酶基因pGL4.20为载体,转染小鼠Panc02胰腺癌细胞株,通过检测荧光素酶活性,检测其表达效果,通过嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株,挑选高表达荧光素酶基因的单克隆细胞株,并利用此细胞株在小动物活体成像系统中确认小鼠胰腺癌皮下肿瘤形成。结果构建了表达荧光素酶基因的Panc02稳定转染细胞株,并且在体内形成皮下肿瘤。结论构建了高表达荧光素酶基因的Panc02稳定转染细胞株。

关键词：稳定细胞株活体成像生物发光胰腺癌

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目标基因捕获结合第2代测序技术检测原发性高血压致病基因突变

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新乡医学院学报 2014年第6期31卷 414-416,419页

作者：郭俊蔡伦李小燕王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室北京100029

目的建立目标基因捕获结合第2代测序技术,对原发性高血压（EH）患者的13个已知致病基因进行突变筛查,探讨EH与致病基因突变的关系。方法提取5例EH患者外周血全基因组DNA,利用GenCap目标基因捕获技术,设计内皮素转化酶1（ECE1）、G蛋白... 详细信息

目的建立目标基因捕获结合第2代测序技术,对原发性高血压（EH）患者的13个已知致病基因进行突变筛查,探讨EH与致病基因突变的关系。方法提取5例EH患者外周血全基因组DNA,利用GenCap目标基因捕获技术,设计内皮素转化酶1（ECE1）、G蛋白调节信号5（RGS5）、钠钾三磷腺苷酶通道β1多肽（ATP1β1）、选择素E（SELE）、血管紧张素原（AGT）、血管紧张素受体1（AGTR1）、α-内收蛋白（ADD1）、细胞色素P450 3A亚家族多肽5（CYP3A5）、一氧化氮合酶3（NOS3）、鸟嘌呤核苷酸结合蛋白β3（GNβ3）、一氧化氮合酶2A（NOS2A）、苯基乙醇胺N-甲基转移酶（PNMT）和前列腺素I2合成酶（PTGIS）基因外显子区域特异性捕获探针,与基因组DNA文库进行杂交,将目标基因组区域的DNA片段进行富集后,再利用Illumina HiSeq 2000第2代测序仪进行测序,通过数据分析,确定突变位点,对选定的突变位点用Sanger测序法验证。结果设计合成的目标基因特异性捕获探针可有效捕捉并富集基因组DNA的目标靶片段。目标区域平均测序深度为301.12~431.92,99.30%~99.70%目标区域覆盖度。5例患者中ADD1基因发现3个错义突变;AGT基因发现1个错义突变;SELE基因发现2个错义突变;PNMT基因发现1个剪切位点突变;PTGIS基因发现1个错义突变。结论 GenCap目标基因捕获技术结合Illumina HiSeq 2000第2代测序技术成功发现了EH患者的致病基因突变。该方法快速有效,对深入研究EH的分子病因学有重要意义。

关键词：原发性高血压致病基因目标基因捕获第2代测序

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小动物活体成像技术在结肠癌肝转移研究中的应用

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首都医科大学学报 2014年第4期35卷 468-472页

作者：朴春梅刘旭霞王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室北京100029

目的利用表达荧光素酶基因的稳定细胞株及小动物活体成像平台,观察小鼠SL4结肠癌肝转移及血管新生情况。方法利用表达荧光素酶SL4-luc结肠癌细胞株,通过小动物活体成像系统检测结肠癌肝转移的情况,通过血管新生的近红外线探针观察肝转... 详细信息

目的利用表达荧光素酶基因的稳定细胞株及小动物活体成像平台,观察小鼠SL4结肠癌肝转移及血管新生情况。方法利用表达荧光素酶SL4-luc结肠癌细胞株,通过小动物活体成像系统检测结肠癌肝转移的情况,通过血管新生的近红外线探针观察肝转移灶中血管新生情况。结果利用小动物活体成像系统,生物发光技术确定了结肠癌细胞肝转移,近红外线探针活性确定了肝转移的灶中血管新生。结论在结肠癌肝转移过程中,应用小动物活体成像技术,确定了结肠癌的肝转移及血管新生。

关键词：活体成像生物发光近红外发光结肠癌肝转移

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利用目标基因测序技术发现马方综合征FBN1新突变

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心肺血管病杂志 2014年第4期33卷 596-598,603页

作者：郭俊蔡伦李小燕王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心血管重塑相关疾病教育部重点实验室100029

目的：建立目标基因捕获结合第二代测序技术,对马方综合征（Marfan syndrome,MFS）患者的原纤维蛋白-1（fibrillin-1,FBN1）基因进行突变筛查,探讨MFS与FBN1基因突变的关系.方法：提取5例MFS患者外周血全基因组DNA,利用GenCap目标基因... 详细信息

目的：建立目标基因捕获结合第二代测序技术,对马方综合征（Marfan syndrome,MFS）患者的原纤维蛋白-1（fibrillin-1,FBN1）基因进行突变筛查,探讨MFS与FBN1基因突变的关系.方法：提取5例MFS患者外周血全基因组DNA,利用GenCap目标基因捕获技术（北京迈基诺公司）,设计FBN1的65个外显子区域特异性捕获探针,与基因组DNA文库进行杂交,将目标基因组区域的DNA片段进行富集后,再利用illumina hiseq2000第二代测序仪进行测序,通过数据分析,确定突变位点,用Sanger测序法对突变位点进行验证.结果：设计合成的目标基因特异性捕获探针可有效地捕捉并富集基因组DNA的目标靶片段.5例患者目标区域平均测序深度为173.85 ～ 280.73,97.10％～ 98.00％目标区域＞4×覆盖度.经过数据分析及Sanger测序验证,发现1个新的无义突变c.5968 C＞T（***1990X）.结论：本研究所建立的GenCap目标基因捕获技术结合illumina hiseq2000第二代测序技术成功的发现了FBN1的新突变.该方法快速而有效,可以使我们对MFS分子病因学有更好的认识.

关键词：马方综合征原纤维蛋白-1 目标基因捕获第二代测序

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自噬相关基因5下调抑制血管紧张素Ⅱ介导的巨噬细胞凋亡

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中国分子心脏病学杂志 2014年第1期14卷 807-811页

作者：赵伟李玉琳贾立昕石洪涛张文美杜杰首都医科大学附属北京安贞医院教育部重塑相关心血管疾病重点实验室北京市心肺血管疾病研究所北京市100029

目的探讨自噬相关基因5(autophagy-related gene5,Atg5)在血管紧张素Ⅱ(angiotensionⅡ,AngⅡ)诱导高血压心脏损伤中对巨噬细胞凋亡的影响。方法 40只雄性C57BL/6小鼠及10只Atg5+/-分为对照组,AngⅡ灌泵1d组,AngⅡ灌泵3d组,AngⅡ灌泵7d... 详细信息

目的探讨自噬相关基因5(autophagy-related gene5,Atg5)在血管紧张素Ⅱ(angiotensionⅡ,AngⅡ)诱导高血压心脏损伤中对巨噬细胞凋亡的影响。方法 40只雄性C57BL/6小鼠及10只Atg5+/-分为对照组,AngⅡ灌泵1d组,AngⅡ灌泵3d组,AngⅡ灌泵7d组和Atg5+/-灌泵组,每组10只。给予乙酸溶液(对照组)及AngⅡ(1500ng/kg*min)微量泵灌注。TUNEL染色观察心脏中细胞凋亡,免疫荧光共染明确凋亡细胞类型;qPCR检测Atg5+/-小鼠心脏中Atg5表达;TUNEL染色观察心脏中细胞凋亡,QuantiGenePlex(QGP)检测凋亡因子表达;体外AngⅡ刺激WT和Atg5+/-骨髓巨噬细胞,免疫荧光共染,检测巨噬细胞凋亡。结果 WT小鼠心脏于AngⅡ灌注1-7d后,TUNEL染色阳性细胞数显著增加,荧光共染显示凋亡细胞为巨噬细胞;Atg5+/-小鼠心脏中Atg5表达量较WT小鼠心脏降低53%;AngⅡ灌注7d后,与WT鼠相比,Atg5+/-小鼠心脏TUNEL染色阳性细胞数降低,促凋亡因子Caspase3、Caspase8、Caspase12表达降低。体外AngⅡ刺激下,Atg5+/-骨髓巨噬细胞较WT骨髓巨噬细胞凋亡减少。结论在AngⅡ致高血压心脏损伤中,Atg5下调可导致心脏中巨噬细胞凋亡下降。

关键词：高血压心脏损伤炎症巨噬细胞凋亡 Atg5

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Affymetrix基因芯片研究高血压对小鼠血管基因表达的影响

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心肺血管病杂志 2014年第2期33卷 258-262页

作者：王吉静李玉琳王月丽郑帅王绿娅李汇华杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所省部共建心血管重塑相关疾病教育部重点实验室北京100029

目的:利用基因芯片技术研究高血压早期血管损伤中基因表达变化。方法:30只8周龄雄性C57BL/6J小鼠,分为对照组和Ang II(血管紧张素II)组,采用置入式胶囊渗透压泵分别灌注0.9%氯化钠液和Ang II(1 500 ng·kg-1·min-1),于第3天,第... 详细信息

目的:利用基因芯片技术研究高血压早期血管损伤中基因表达变化。方法:30只8周龄雄性C57BL/6J小鼠,分为对照组和Ang II(血管紧张素II)组,采用置入式胶囊渗透压泵分别灌注0.9%氯化钠液和Ang II(1 500 ng·kg-1·min-1),于第3天,第7天取胸主动脉,提取核糖核酸(RNA),进行基因芯片分析;利用鼠尾套法检测Ang II灌泵3 d及7 d后小鼠尾动脉血压、苏木精伊红染色(HE)染色检测血管结构;实时定量聚合酶链式反应(PCR)验证Ang II灌泵7 d时部分芯片结果。结果:与对照组相比,Ang II组在灌泵7 d时血压升高[(104±4)vs.(146±6)mmHg(1mmHg=0.133kPa),P<0.001];基因芯片结果显示3d时有67个基因表达上调,27个基因表达下调,7d时有31个基因表达上调,没有检测下调基因;PCR验证磷酸分泌蛋白1(SPP1),金属蛋白酶组织抑制因子1(Timp1),4域跨膜超家族A,4C(MS4a4c),胰岛素样生长因子结合蛋白2(Igfbp2),重组激活基因1(Rag1)均表达升高。结论:Ang II导致高血压情况下,血管组织基因表达变化,可能参与高血压血管损伤的过程。

关键词：高血压血管损伤基因芯片炎症反应血管紧张素Ⅱ

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目标基因捕获测序技术鉴定肥厚型心肌病致病突变的研究

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心肺血管病杂志 2014年第4期33卷 599-603页

作者：刘旭霞姜腾勇朴春梅李小燕王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心血管重塑相关疾病教育部重点实验室首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心内科

目的:利用目标基因靶向捕获高通量测序方法鉴定肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)致病突变,并进行基因型-临床表型的分析,以期对临床诊治提供参考依据。方法:连续收集10例HCM患者血液与临床资料。提取全血基因组DNA、文库... 详细信息

目的:利用目标基因靶向捕获高通量测序方法鉴定肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)致病突变,并进行基因型-临床表型的分析,以期对临床诊治提供参考依据。方法:连续收集10例HCM患者血液与临床资料。提取全血基因组DNA、文库制备,靶向富集8个编码肌小节蛋白的HCM的致病基因,并行高通量测序。结果:10例患者[平均年龄为(46±7.9)岁,女性占50%]中,4例患者发现5个基因突变位点。双突变(TNNT2 R286H和MYH7 R663H)携带者具有HCM家族史,发病早,左心室重度肥厚,心电图呈现传导阻滞。MYBPC3 D770N和MYBPC3 S236G突变携带者发病年龄晚,左心室肥厚程度较轻。MYH7 R869C突变携带者年龄大,左心室肥厚程度较重,心电图呈现明显左心室肥大证据。结论:对10例HCM患者利用目标基因捕获测序技术筛选出5个致病突变。携带不同突变的患者其临床表型不一致,这对患者的预后和治疗提供了有利的依据。

关键词：肥厚型心肌病突变目标捕获高通量测序

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双光子激光共聚焦显微镜在检测心肌细胞缝隙连接通讯功能和小鼠心肌细胞培养鉴定中的应用

双光子激光共聚焦显微镜在检测心肌细胞缝隙连接通讯功能和小鼠心...

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第八届北京五洲国际心血管病会议

作者：赵莉敏杜兰平高宇翔董磊崔巍蔺洁首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心血管重塑相关疾病教育部重点实验室

目的心肌细胞，采用荧光漂白后恢复技术(FRAP)检测缝隙连接蛋白的表达水平以评价心肌细胞间缝隙连接通讯功能(GJIC).方法鉴定新生小鼠心肌细胞并分离培养，经抗a-肌动蛋白免疫荧光标记心肌组织细胞，应用激光共聚焦显微镜断层扫描并... 详细信息

目的心肌细胞，采用荧光漂白后恢复技术(FRAP)检测缝隙连接蛋白的表达水平以评价心肌细胞间缝隙连接通讯功能(GJIC).方法鉴定新生小鼠心肌细胞并分离培养，经抗a-肌动蛋白免疫荧光标记心肌组织细胞，应用激光共聚焦显微镜断层扫描并制作三维图像.另取小鼠心脏分别用机械剪切和胰蛋白酶消化法处理，应用6-CFDA荧光探针标记，测定GJIC功能，实时记录动态荧光恢复曲线.结果小鼠心肌组织经抗a-肌动蛋白I抗体免疫荧光染色后双光子激光共聚焦显微镜下观察可见心肌细胞呈阳性反应，肌纤维清晰可见;接种1周后细胞贴壁生长并伸出伪足，细胞形状多样化，胞浆内颗粒丰富，细胞胞体逐渐增大，细胞之间借枝状突起相连接.断层扫描及三维结构重建后可见心肌细胞间有明显的隔膜缝隙，闰盘结构胞膜凹凸相嵌.FRAP结果显示机械处理心肌组织分离的心肌细胞保持较强的活性，消化酶处理的心肌组织细胞活性降低;通过荧光淬灭恢复曲线可观察到酶消化处理的心肌细胞荧光淬灭恢复能力低于机械剪切处理的心肌细胞.结论应用双光子激光共聚焦显微镜可清晰观察到心肌细胞特异性横纹结构;三维成像测量细胞大小及细胞结构，并通过荧光动态恢复曲线可证明心肌细胞间存在缝隙连接通讯功能，其强弱与心肌细胞活性密切相关.

关键词：荧光光漂白恢复技术缝隙连接通讯三维重建心肌细胞

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蛋白激酶SGK1调控巨噬细胞活化在野百合碱诱导肺动脉高压模型中的机制研究

蛋白激酶SGK1调控巨噬细胞活化在野百合碱诱导肺动脉高压模型中的...

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2014北京大学心血管转化医学论坛

作者：习昕杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心血管重塑相关疾病教育部重点实验室北京 100029

血管周围过度的炎性反应是启动和维持肺动脉高压病理过程的重要机制.单核/巨噬细胞作为调节血管周围炎性微环境的重要细胞,在肺动脉高压时肺血管重塑过程中的作用正逐渐被人们所发现.血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)是一种新近... 详细信息

血管周围过度的炎性反应是启动和维持肺动脉高压病理过程的重要机制.单核/巨噬细胞作为调节血管周围炎性微环境的重要细胞,在肺动脉高压时肺血管重塑过程中的作用正逐渐被人们所发现.血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)是一种新近发现的快速诱导型蛋白激酶,在血管重塑中起重要作用,同时也参与炎性微环境的调控.笔者前期发现,SGK1可通过调控巨噬细胞分化,参与心脏的炎症和纤维化过程,但其在肺动脉高压血管重塑中的作用仍不清楚.研究表明，SGK1可通过促进巨噬细胞的浸润、活化及增加巨噬细胞对肺动脉平滑肌细胞的促增殖能力,参与肺动脉高压时肺血管重塑的过程.本研究首次在MCT诱导的肺动脉高压动物模型中研究SGK1的表达,明确了其参与炎症导致肺血管重塑及肺动脉高压的重要作用,为肺动脉高压的治疗提供了新的靶点.

关键词：肺动脉高压野百合碱诱导蛋白激酶1 巨噬细胞调控机制

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