目的:探讨持续缺氧阵发加剧的缺氧形式(PI hypoxia)导致人肺动脉内皮细胞(HPAECs)受损的具体机制,以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮可能的保护作用。方法:将HPAECs置于持续15%供氧并间歇低氧至5%的PI hypoxia环境中培养72 h。PPARγ激动剂治疗组的HPAECs培养基中添加了5μM的罗格列酮并同样接受72 h PI hypoxia处理。通过慢病毒感染HPAECs,得到过表达Smad3的HPAECs并接受同样的缺氧处理。在细胞培养结束后使用免疫印迹技术检测细胞裂解中PPARγ的相对含量;高通流式细胞仪测定HPAECs细胞凋亡;CCK-8法测定细胞活力;β-半乳糖苷酶染色衡量细胞老化程度;定量聚合酶链式反应检测端粒相对长度。结果:经历72 h PI hypoxia的HPAECs细胞裂解液中PPARγ表达显著下降。与正常供氧的HPAECs相比,接受72 h PI hypoxia的HPAECs高表达特异性细胞老化因子β-半乳糖苷酶,细胞凋亡显著增加,HPAECs细胞活性明显降低。与PI hypoxia的细胞相比,接受5μM罗格列酮治疗的HPAECs细胞凋亡减轻,细胞活力改善,但是细胞老化程度并没有变化。PI hypoxia环境中培养的HPAECs细胞较正常供氧的HPAECs细胞端粒显著延长,且与接受罗格列酮治疗的细胞端粒长度没有差异。过表达Smad3能显著降低β-半乳糖苷酶,减少细胞凋亡,改善HPAECs细胞活性,但是并没有改变缺氧细胞PPARγ的表达水平。结论:PPARγ激动剂治疗能减轻PI hypoxia诱导的HPAECs细胞凋亡和细胞活力下降,但是并不能改善细胞老化水平。
目的:为探讨Orai1基因在动脉粥样硬化进展中的作用,通过重组腺病毒载体建立ApoE-/-小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)Orai1基因的敲低模型,为深入相关研究奠定基础。方法:构建针对小鼠Orai1基因的重组腺病毒载体。高脂饲养ApoE-/-小鼠至16周龄后处死。取胸主动脉原代VSMCs改为体外培养,细胞分为三组,分别为shOrai1组、shNC组和对照组。转染后通过实时定量聚合酶链式反应(qPCR), Western blot检测Orai1表达水平,同时对转染模型进行验证。结果:qPCR示,重组腺病毒在ApoE-/-小鼠VSMCs中Orai1基因的干扰效率达57%,Western blot结果示,Ad-GFP-Orial-shRNA转染组Orai1蛋白表达水平显著降低。结论:通过成功建立ApoE-/-小鼠VSMCs中Orai1基因敲低模型,从而为阐明钙库操纵性钙通道在动脉粥样硬化进程中的作用,尤其关于斑块延展和不稳定的相关性研究奠定了基础。
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