检索结果-内蒙古大学图书馆

心肺血管病杂志 2016年第7期35卷 563-568页

作者：刘燕任卫红王绿娅张晓萍高诗娟武威李凤娟杜杰北京市心肺血管疾病研究所-首都医科大学附属北京安贞医院心血管重塑相关疾病教育部重点实验室科研基地建设-心血管重大疾病协同创新中心 100029

目的:比较CRISPR/Cas9系统中gRNA活性检测的两种方法,即利用Surveyor/T7E1核酸酶检测方法或利用Cas9蛋白的体外检测方法。方法:一方面构建表达Cas9和特异gRNA的质粒,转染NIH3T3细胞,然后提取DNA,利用T7E1核酸内切酶检测gRNA介导Cas9切割... 详细信息

目的:比较CRISPR/Cas9系统中gRNA活性检测的两种方法,即利用Surveyor/T7E1核酸酶检测方法或利用Cas9蛋白的体外检测方法。方法:一方面构建表达Cas9和特异gRNA的质粒,转染NIH3T3细胞,然后提取DNA,利用T7E1核酸内切酶检测gRNA介导Cas9切割靶DNA并产生indel突变的效率;另一方面,设计引物并利用PCR扩增出gRNA的DNA模板片段,通过体外转录获得gRNA,利用Cas9蛋白及gRNA进行体外反应检测切割效率。结果:利用Cas9蛋白体外酶切可以检测到较高的gRNA活性,然而通过T7E1核酸酶方法检测gRNA在细胞中活性整体偏低,且在不同基因之间差异较大。结论:细胞Surveyor/T7E1法与Cas9蛋白体外酶切法检测到的gRNA活性不完全一致,体外活性检测法不能替代。

关键词： CRISPR/Cas9 gRNA活性 Surveyor/T7E1检测体外检测

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小鼠急性心肌梗死后巨噬细胞吞噬心肌细胞碎片对MAPK信号通路的实验研究

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心肺血管病杂志 2016年第5期35卷 401-405页

作者：屈超张晶李涛涛张文美孟帅贾若飞李红金泽宁杜杰首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病科研基地建设-心血管重大疾病协同创新中心重点实验室 100029

目的:探讨小鼠急性心肌梗死模型巨噬细胞的吞噬功能及丝裂原始化蛋白激酶(MAPK)信号激活情况。方法:对野生型C57BL/6J小鼠进行急性心肌梗死模型,3d时,收取心脏组织进行冰冻切片和免疫荧光F4/80(巨噬细胞标志物)染色检测巨噬细胞的浸润情... 详细信息

目的:探讨小鼠急性心肌梗死模型巨噬细胞的吞噬功能及丝裂原始化蛋白激酶(MAPK)信号激活情况。方法:对野生型C57BL/6J小鼠进行急性心肌梗死模型,3d时,收取心脏组织进行冰冻切片和免疫荧光F4/80(巨噬细胞标志物)染色检测巨噬细胞的浸润情况;体外分离骨髓来源的巨噬细胞和小鼠心肌细胞,用荧光染料对心肌细胞进行标记之后诱导心肌细胞坏死,用坏死心肌细胞碎片刺激巨噬细胞,免疫荧光和流式细胞术检测巨噬细胞对坏死心肌细胞碎片的吞噬能力;利用western检测巨噬细胞吞噬坏死心肌细胞碎片之后MAPK信号通路激活情况。结果:心肌梗死手术后3d,小鼠心脏部位的巨噬细胞浸润明显增加;利用坏死心肌细胞碎片刺激巨噬细胞1h后,免疫荧光confocal检测发现,巨噬细胞对坏死心肌细胞碎片有吞噬能力。流式细胞术检测显示,相比对照组(77.1±1.3)%的巨噬细胞吞噬了坏死心肌细胞碎片(P<0.01)。western检测结果显示,巨噬细胞吞噬坏死心肌细胞碎片之后MAPK信号通路中的p38,Erk,JNK均发生磷酸化。结论:急性心肌梗死早期,心脏组织部位有巨噬细胞的浸润。巨噬细胞可能通过吞噬坏死心肌细胞碎片,促进MAPK信号通路激活,从而介导心肌梗死后的炎症反应。

关键词：急性心肌梗死巨噬细胞吞噬作用 MAPK

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急性主动脉夹层患者补体活化及补体C3a受体表达的临床意义

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心肺血管病杂志 2016年第3期35卷 166-169,174页

作者：任卫红刘燕王雪蕊王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室科研基地建设-心血管重大疾病防治协同创新中心 100029

目的:揭示急性主动脉夹层发生中,是否存在补体系统活化及补体活化产物C3a受体的表达变化。方法:收集2015年1月至2015年7月,在北京安贞医院接受体检的正常人、腹主动脉瘤手术以及急性主动脉夹层手术患者血液各5例,进行微量样本多指标流... 详细信息

目的:揭示急性主动脉夹层发生中,是否存在补体系统活化及补体活化产物C3a受体的表达变化。方法:收集2015年1月至2015年7月,在北京安贞医院接受体检的正常人、腹主动脉瘤手术以及急性主动脉夹层手术患者血液各5例,进行微量样本多指标流式蛋白定量试验,测定其补体系统活化产物过敏毒素C3a、C4a和C5a的水平;收集2015年1月至2015年7月,在北京安贞医院接受主动脉弓部替换术患者的升主动脉组织5例及心脏移植供受体正常的升主动脉组织5例,进行免疫组化组织染色,并提取蛋白,检测C3a受体的表达。结果:微量样本多指标流式蛋白定量试验结果显示,腹主动脉瘤和急性主动脉夹层患者血浆中补体活化产物C3a、C4a和C5a含量显著高于正常对照组(P<0.01),这说明补体活化不仅在腹主动脉瘤,急性主动夹层患者循环系统也存在。免疫印迹结果显示急性主动脉夹层患者标本中C3a受体蛋白表达量显著高于正常对照组(P<0.05)。免疫组化染色发现,与正常升主动脉壁相比较,急性主动脉夹层标本的C3a受体表达显著增高(P<0.01)。结论:急性主动脉夹层患者体内存在补体系统活化C3a-C3a受体信号通路,可能参与主动脉夹层的发生发展。

关键词：补体系统 C3a受体急性主动脉夹层

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多巴胺受体5活化对内毒素介导的急性肾脏炎症的影响

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中国医药 2016年第3期11卷 381-385页

作者：武栗妃李玉琳阚晓玉孙颉王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心血管重塑相关疾病教育部重点实验室科研基地建设-心血管重大疾病防治协同创新中心(2011协同创新中心) 100029

目的探讨多巴胺受体5（D5R）激动剂非诺多泮对内毒素介导的急性肾脏炎症的影响.方法提取C57BL/6J小鼠骨髓单核巨噬细胞,蛋白质印迹法检测细胞中D1R ～ D5R蛋白水平,免疫荧光方法观察D5R在骨髓单核巨噬细胞中的表达.21只雄性C57BL/6J... 详细信息

目的探讨多巴胺受体5（D5R）激动剂非诺多泮对内毒素介导的急性肾脏炎症的影响.方法提取C57BL/6J小鼠骨髓单核巨噬细胞,蛋白质印迹法检测细胞中D1R ～ D5R蛋白水平,免疫荧光方法观察D5R在骨髓单核巨噬细胞中的表达.21只雄性C57BL/6J小鼠完全随机分为盐水组、盐水联合脂多糖组、非诺多泮联合脂多糖组,每组7只,采用腹腔注射的方法相应组别分别给予0.9％氯化钠注射液和非诺多泮;30 min后分别给予脂多糖和0.9％氯化钠注射液腹腔注射.于注射后6h采用实时荧光定量-聚合酶链反应（qRT-PCR）的方法检测肾脏D5R,肿瘤坏死因子（TNF）-α,干扰素-γ mRNA的水平;免疫组织化学染色观察肾脏单核巨噬细胞的浸润;检测血清中TNF-α,干扰素-y的水平.分离骨髓细胞,以巨噬细胞集落刺激因子诱导制备骨髓单核巨噬细胞.分别给予磷酸盐缓冲液和非诺多泮预处理巨噬细胞,5 min后给予脂多糖刺激12 h,酶联免疫吸附试验的方法检测巨噬细胞内环磷酸腺苷水平,qRT-PCR方法检测单核巨噬细胞中TNF-α,干扰素-γ mRNA水平.结果核细胞中以D5R表达为主.与盐水组比较,盐水联合脂多糖组小鼠肾脏D5R mRNA水平明显高[（110.5±3.7）比（1.2±1.0）,P＜0.001].与盐水联合脂多糖组比较,非诺多泮联合脂多糖组可以明显抑制脂多糖介导的肾脏炎症因子TNF-α、干扰素-γmRNA水平的升高[（0.089 ±0.007）比（0.231 ±0.019）、（0.363 ±0.102）比（0.920±0.007）,P＜0.01],骨髓单核细胞在肾脏的浸润以及血清炎症因子TNF-α及干扰素-γ的水平[（22±5）比（236 ±20）、（18±6）比（76±10）,P＜0.01或P＜0.05].体外培养骨髓单核巨噬细胞给予非诺多泮后环磷酸腺苷的产生明显增多[（8.726±0.909）nmol/L比（0.348 ±0.024） nmol/L,P＜0.01]、同时明显抑制TNF-α、干扰素-γ的产生[（0.669 ±0.010）比（1.362 ±0.199）、（0.896±0.071）比（2.854±0.270）,P＜0.05].结论 D5R在骨髓单核巨噬细胞上有表达,D5R活化可以明显抑制内毒素介导的急性肾脏炎性反应.

关键词：多巴胺受体5 肾脏炎症

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利用小动物活体成像技术检测心肌梗死后炎症的进程

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心肺血管病杂志 2015年第6期34卷 501-504,507页

作者：马友才刘燕朴春梅王绿娅杜杰北京首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病科研基地建设-心血管重大疾病协同创新中心重点实验室 100029

目的:利用小动物活体成像技术连续动态评估,同一只鼠心肌梗死后心脏炎症进程的方法。方法:40只成年雄性用荧光素酶标记转录因子NF-κB(NFκB-RE-luc)小鼠,按随机数字表分为对照组和心肌梗死组,每组各20只;心肌梗死组开胸结扎小鼠冠状动... 详细信息

目的:利用小动物活体成像技术连续动态评估,同一只鼠心肌梗死后心脏炎症进程的方法。方法:40只成年雄性用荧光素酶标记转录因子NF-κB(NFκB-RE-luc)小鼠,按随机数字表分为对照组和心肌梗死组,每组各20只;心肌梗死组开胸结扎小鼠冠状动脉前降支,对照组只给予开胸处理。分别于术前及术后1天、3天、5天、7天、14天及28天检测NF-κB的转录活性。于3天时,收10只对照组小鼠,CBA检测外周血清中炎症因子MCP-1、TNF-α及IL-6的表达,荧光定量PCR检测心肌梗死后心脏组织中的炎症因子MCP-1、TNF-α及IL-6的表达。手术后28天,超声心动检测小鼠心功能;心脏组织病理切片,Masson三原色法检测心肌梗死后28天心脏胶原沉积。结果:28天心肌梗死组的病理切片染色和超声心动结果均证明心肌梗死模型造模成功。利用小动物活体成像检测到NF-κB转录活性的动态变化:心肌梗死后1天、3天、5天及7天后NF-κB表达水平与心肌梗死前相比明显升高[(255 400 000±31 280 000),(459 300 000±64 210 000),(461 000 000±73 830 000),(380 000 000±41 000 000)vs.(77 280 000±10 750 000)p/s,P<0.005)。心肌梗死术后3天心脏组织炎症因子MCP-1、TNF-α及IL-6的mRNA表达和血浆中的炎症因子MCP-1、TNF-α及IL-6的水平均明显升高。结论:利用小动物活体成像技术可以活体检测小鼠心肌梗死后心脏炎症过程。

关键词：小动物活体成像心肌梗死炎症

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基于小鼠横向主动脉缩窄模型建立及超声影像的动态观察

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心肺血管病杂志 2015年第7期34卷 575-579页

作者：刘婷婷王月丽李平刘旭霞王绿娅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所教育部心血管重塑相关疾病重点实验室科研基地建设-心血管重大疾病防治协同创新中心 100029

目的:超声影像动态观察小鼠横向主动脉缩窄模型的心功能变化过程,探讨此模型法能否模拟临床早期心力衰竭病理过程。方法:100只,C57/B6L,雄性小鼠,体质量(22±3)g,随机分成假手术组(15只)和模型组(85只)。分别于手术后第1周分析结扎... 详细信息

目的:超声影像动态观察小鼠横向主动脉缩窄模型的心功能变化过程,探讨此模型法能否模拟临床早期心力衰竭病理过程。方法:100只,C57/B6L,雄性小鼠,体质量(22±3)g,随机分成假手术组(15只)和模型组(85只)。分别于手术后第1周分析结扎处血流速度峰值,第1,2,3,4,5,6及第8周使用小动物超声影像分析左心室心肌收缩功能和室腔变化。结果:术前小鼠主动脉弓内径为(1.161±0.025)mm,手术缩窄后主动脉弓横截面积为缩窄前横截面积的(19±1)%。模型第1周,超声检测缩窄处的血流峰值为(2279±54)mm/s,为假手术组血流峰值的2.85倍(P<0.01)。第4周,模型组左心室质量/体质量比值显著增加,超声影像学分析显示,左心室前壁舒张末厚度增加42.1%,左心室后壁舒张末厚度增加31.1%,左心室重量增加56.0%,与假手术组相比(分别P<0.01);组织切片WGA染色结果显示模型组心肌细胞横截面积明显增大,与假手术组相比(P<0.05);第8周,模型组小鼠左心室射血分数降低32.3%,短轴缩短率降低38.6%,与假手术组相比(分别P<0.01)。结论:横向主动脉缩窄第4周特征为左心室肥厚、心肌肥大,模拟了临床上心力衰竭早期的病理生理过程。

关键词：横向主动脉缩窄心肌肥大心脏重塑

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