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13价肺炎链球菌结合疫苗中的6A和6B诱导对新发现血清型6C和6D的交叉保护抗体

中华微生物学和免疫学杂志 2018年第5期38卷 366-371页

作者：吴君兰邱远涛张晓雪雷永红薛晨宝韩东洺王新立高强林纪胜北京科兴生物制品有限公司 100085 北京科兴中维生物技术有限公司 100085 北京市新型人用预防性疫苗工程技术研究中心 100085

目的血清型6C和6D是近些年新发现的肺炎链球菌血清型。本研究的目的是考察肺炎链球菌13价结合疫苗PCV13（1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F）里的6A和6B能否诱导对新血清型6C和6D的交叉保护抗体，以及它们对交叉保... 详细信息

目的血清型6C和6D是近些年新发现的肺炎链球菌血清型。本研究的目的是考察肺炎链球菌13价结合疫苗PCV13（1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F）里的6A和6B能否诱导对新血清型6C和6D的交叉保护抗体，以及它们对交叉保护抗体的贡献。方法PCV13、6A和6B荚膜多糖分别与CRM197的结合物PCV6A和PCV6B分别于第0天、第14天和第28天以等剂量肌肉注射免疫新西兰兔。免疫前和第35天采血分离血清。采用世界卫生组织（WHO）推荐的定量酶联免疫吸附试验（ELISA）检测兔血清中针对6A、6B、6C和6D荚膜多糖的抗体浓度，并采用WHO肺炎链球菌血清学参考实验室的调理吞噬试验（OPA）检测兔血清抗体针对6A、6B、6C和6D的杀菌功能。结果PCV13能够诱导兔产生针对6A和6B荚膜多糖的抗体，该抗体不仅能够与6C和6D荚膜多糖产生交叉反应，而且能够识别靶细菌6A、6B、6C和6D并激活补体，在激活补体的调理下，靶细菌被分化的HL60细胞吞噬，它们对靶细菌6A、6B、6C的杀菌滴度大致相当，但略高于对6D。PCV6A能够诱导兔产生针对6A荚膜多糖的抗体，该抗体能够与6B、6C和6D荚膜多糖产生交叉反应，它对靶细菌6A、6B和6C的调理吞噬滴度高于对6D。PCV6B能够诱导兔产生针对6B荚膜多糖的抗体，该抗体能够与6A、6C和6D荚膜多糖产生交叉反应，它对靶细菌6A、6B和6C的调理吞噬滴度高于对6D。PCV13、PCV6A和PCV6B免疫后针对6A、6B、6C和6D的荚膜多糖特异性抗体浓度和杀菌滴度均较免疫前有显著性升高（P〈0.01）。结论PCV13能够诱导兔产生针对6A和6B的抗体，它们不仅能够与6C和6D的荚膜多糖产生交叉反应，而且能够交叉保护6C和6D。PCV13中的6A和6B均对产生6C和6D的交叉保护抗体有贡献，其中对6C的贡献多于对6D。

关键词： 13价肺炎链球菌结合疫苗(PCVl3) 血清型6C 血清型6D 酶联免疫吸附试验 (ELISA) 调理吞噬试验(OPA) 交叉保护抗体

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评价肺炎球菌结合疫苗免疫原性的兔模型的建立

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第5期37卷 386-392页

作者：雷永红张晓雪薛晨宝张玉龙王新立许凯项争高强林纪胜北京科兴中维生物技术有限公司 100085 北京科兴生物制品有限公司 100085 北京科兴生物制品有限公司、北京市新型人用预防性疫苗工程技术研究中心 100085

目的建立一种适用于评价肺炎球菌结合疫苗免疫原性的动物模型.方法以13价肺炎球菌结合疫苗（PCV13）肌肉注射新西兰兔,3针剂,间隔2周;在不同的时间点采集血清.采用世界卫生组织（WHO）标准定量酶联免疫吸附试验方法（ELISA）检测兔血... 详细信息

目的建立一种适用于评价肺炎球菌结合疫苗免疫原性的动物模型.方法以13价肺炎球菌结合疫苗（PCV13）肌肉注射新西兰兔,3针剂,间隔2周;在不同的时间点采集血清.采用世界卫生组织（WHO）标准定量酶联免疫吸附试验方法（ELISA）检测兔血清中的血清型特异性抗体浓度,采用WHO肺炎链球菌血清学参考实验室的调理吞噬试验方法（OPA）检测兔血清中血清型特异性抗体杀菌功能.结果兔血清中特异性抗体浓度高低和抗体杀菌功能强弱吻合,并且二者随着时间的消长趋势具有非常好的一致性.结论兔可用于肺炎球菌结合疫苗PCV13免疫, 并以定量ELISA和OPA检测血清抗体浓度和功能,是评价肺炎球菌结合疫苗免疫原性的合适动物模型.

关键词：兔模型酶联免疫吸附试验(ELISA) 调理吞噬试验(OPA) 免疫原性 13价肺炎球菌结合疫苗(PCV13)

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b型流感嗜血杆菌结合疫苗质量控制过程中D-核糖检测干扰因素的分析

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中国生物制品学杂志 2019年第9期32卷 947-949,957页

作者：邱远涛雷永红杨帆王治伟党晓燕高强林纪胜北京科兴中维生物技术有限公司北京100085 北京科兴生物制品有限公司北京100085 北京市新型人用预防性疫苗工程技术研究中心北京100085

目的分析b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗质量控制过程中十六烷基三甲基溴化铵(etyltrimethylmmonium ammonium bromide,CTAB)、乙醇和氯化钠对Hib多糖D-核糖检测方法的干扰。方法模拟Hib结合疫苗生产过程... 详细信息

目的分析b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗质量控制过程中十六烷基三甲基溴化铵(etyltrimethylmmonium ammonium bromide,CTAB)、乙醇和氯化钠对Hib多糖D-核糖检测方法的干扰。方法模拟Hib结合疫苗生产过程中CTAB、乙醇和氯化钠的浓度,分别制备含不同终浓度CTAB(0. 03%、0. 06%、0. 13%、0. 25%、0. 50%、1. 00%)、乙醇(10%、20%、30%、40%、45%、50%)、氯化钠(0. 06、0. 13、0. 25、0. 50和1. 00 mol/L)的D-核糖样品,检测样品的D-核糖含量,并计算回收率。结果 CTAB终浓度为0. 25%和1. 00%时,D-核糖回收率分别为92. 0%和53. 6%,乙醇终浓度为40%(V/V)和50%(V/V)时,D-核糖回收率分别为93. 6%和88. 0%,随着CTAB和乙醇浓度的增加,D-核糖的回收率降低。氯化钠浓度为0. 00~1. 00 mol/L时,D-核糖回收率为97. 6%~100. 8%,随着氯化钠浓度增加,D-核糖的回收率趋于平稳。结论高浓度CTAB和乙醇对D-核糖含量检测有干扰,氯化钠不影响D-核糖检测结果。

关键词： b型流感嗜血杆菌 D-核糖十六烷基三甲基溴化铵乙醇氯化钠

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b型流感嗜血杆菌疫苗及新型疫苗或联合疫苗的免疫原性评价方法

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中国生物制品学杂志 2015年第10期28卷 1097-1104页

作者：朱朗刘一非陆玮林纪胜高强蔡芳北京科兴生物制品有限公司北京100085 美国阿拉巴马大学伯明翰分校病理学系NIH呼吸道病原参考实验室美国阿拉巴马州伯明翰35294 北京科兴中维生物技术有限公司北京100085 北京市新型人用预防性疫苗工程技术研究中心北京100085

b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type b,Hib)是全球范围内引起3个月到5岁龄儿童肺炎、脑膜炎和败血症等严重疾病的重要病原菌。接种疫苗是唯一有效的预防和控制Hib引起疾病的公共卫生措施,将Hib结合疫苗纳入儿童常规免疫程序的... 详细信息

b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type b,Hib)是全球范围内引起3个月到5岁龄儿童肺炎、脑膜炎和败血症等严重疾病的重要病原菌。接种疫苗是唯一有效的预防和控制Hib引起疾病的公共卫生措施,将Hib结合疫苗纳入儿童常规免疫程序的国家,Hib发病率和携带率均明显降低。本文现对Hib疫苗种类、免疫学特性、临床效力以及Hib新型疫苗或联合疫苗的免疫原性评价方法作一综述。

关键词： b型流感嗜血杆菌疫苗免疫原性

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CHO细胞法检测百日咳毒素毒性的影响因素

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微生物学免疫学进展 2019年第2期47卷 29-35页

作者：王巍巍刘波王治伟程会欣马国涛徐树利董高峰薛晨宝许丽高强张立志北京科兴生物制品有限公司研发中心北京100085 北京科兴中维生物技术有限公司研发中心北京100085 北京新型人用预防性疫苗工程技术研究中心北京100085

目的考察不同培养基、不同牛血清、血清灭活与否及生产过程中添加的各外源物质对百日咳毒素(pertussis toxin, PT)在中华仓鼠卵巢细胞(chinese hamster ovary cell, CHO)簇集试验中的影响。方法分别使用3种培养基F-12K、DMEM/F12和1640... 详细信息

目的考察不同培养基、不同牛血清、血清灭活与否及生产过程中添加的各外源物质对百日咳毒素(pertussis toxin, PT)在中华仓鼠卵巢细胞(chinese hamster ovary cell, CHO)簇集试验中的影响。方法分别使用3种培养基F-12K、DMEM/F12和1640培养CHO细胞,并进行CHO细胞簇集试验,观察细胞生长状态及PT引起细胞簇集的敏感性;分别选取2个厂家的牛血清(对2种血清进行灭活和不灭活处理)培养CHO细胞,观察4种牛血清对细胞生长及簇集的影响;选用生产过程中添加的物质进行CHO细胞簇集试验,观察细胞生长状态及是否出现簇集,确定不影响细胞生长的最高浓度,同时使用不影响细胞生长的各添加物质最高浓度进行小鼠组胺致敏试验,观察与CHO细胞簇集试验结果是否一致。结果 3种培养基对CHO细胞生长及CHO细胞簇集存在明显差异,F-12K培养基培养的细胞形态规则、典型,其他2种培养基培养的细胞生长缓慢,且对PT的敏感性均低于F-12K培养基;4种牛血清中胎牛血清培养的细胞生长最快且形态规则,簇集试验敏感性优于其他3组血清;添加的各外源物质均会导致细胞生长缓慢或死亡,在稀释至一定浓度后可以排除添加物质对CHO细胞簇集试验的影响,同时在小鼠组胺致敏试验中不会引起动物死亡。结论 F-12K培养基最适宜实验室CHO细胞生长,不同血清对细胞生长和簇集的敏感度有一定差异,添加的外源物质残留量应进行控制以保证试验结果的稳定可靠。

关键词：中华仓鼠卵巢细胞簇集试验百日咳毒素牛血清组胺致敏试验

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百日咳毒素抗原检测系统的建立及其应用

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微生物学免疫学进展 2018年第6期46卷 20-28页

作者：程会欣王丽婵张立志卫辰骆鹏徐树利薛晨宝王巍巍马国涛刘波高强王治伟北京科兴生物制品有限公司研发中心北京100085 中国食品药品检定研究院百白破室北京102629 北京科兴中维生物技术有限公司北京100085 北京新型人用预防性疫苗工程技术研究中心北京100085

目的建立吸附无细胞百白破联合疫苗中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)的ELISA测定方法,并进行验证及应用。方法以PT作为检测抗原,用高效价鼠单抗和相应的兔多抗建立双抗体夹心ELISA,确定方法的线性范围、重复性、准确性、专属性等,并进... 详细信息

目的建立吸附无细胞百白破联合疫苗中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)的ELISA测定方法,并进行验证及应用。方法以PT作为检测抗原,用高效价鼠单抗和相应的兔多抗建立双抗体夹心ELISA,确定方法的线性范围、重复性、准确性、专属性等,并进行初步应用。结果 PT质量浓度在2.5～80.0 ng/m L时线性良好,决定系数R2>0.98。该方法与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒原液、甲肝疫苗原液、乙肝疫苗原液、白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)、破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)、百日咳丝状血凝素(filamantous hemagglutinin,FHA)、黏着素(pertactin,PRN)均无明显交叉反应,重复性好,专属性较强,其他均符合常规质控要求。该抗原检测系统对生产具有指导意义,并可以正确反映原液及成品中PT的稳定性。结论建立了PT双抗体夹心ELISA检测方法,为吸附无细胞百白破联合疫苗生产过程中PT含量的质量控制提供有效的技术手段。

关键词：百日咳毒素酶联免疫吸附试验吸附无细胞百白破联合疫苗

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单克隆抗体在肺炎球菌多糖疫苗多糖含量检测中的应用

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国际生物制品学杂志 2015年第1期38卷 6-9页

作者：雷永红庞鉴勇童钦王欣陈磊蔡芳朱朗王新立高强北京科兴中维生物技术有限公司 100085 北京科兴生物制品有限公司流感事业部 100085 北京科兴生物制品有限公司研发中心质检平台 100085 北京市新型人用预防性疫苗工程技术研究中心 100085

目的考察能否用单克隆抗体（单抗）替代多克隆抗体（多抗）血清检测23价肺炎球菌多糖疫苗中各型多糖的含量.方法使用8个血清型（2、3、4、6B、9N、17F、18C、23F）的小鼠抗肺炎球菌荚膜多糖单抗和丹麦国家血清研究所（Statens Serum I... 详细信息

目的考察能否用单克隆抗体（单抗）替代多克隆抗体（多抗）血清检测23价肺炎球菌多糖疫苗中各型多糖的含量.方法使用8个血清型（2、3、4、6B、9N、17F、18C、23F）的小鼠抗肺炎球菌荚膜多糖单抗和丹麦国家血清研究所（Statens Serum Institut,SSI）的兔血清多抗,以速率散射免疫浊度法测定23价肺炎球菌多糖疫苗中相应血清型的多糖含量.通过重复性和专属性试验确定单抗的可用性.采用t检验对单抗和多抗测定结果进行比较.结果各型单抗与多糖标准品反应标准曲线的相关系数均＞0.985 0.用单抗重复检测疫苗多糖3次,质量浓度为40.8～62.1 μg/ml,3次检测结果变异系数均＜8.00％.各型多糖回收率为81.6％～124.2％.分别用8个血清型单抗检测其余各型多糖含量,结果均低于或接近于检测下限.单抗与SSI多抗血清的检测结果差异均无统计学意义,t值为0.210 3～1.926 0,P值均＞0.05.结论单抗检测重复性好、特异性高,与多抗血清检测结果相仿,因此,单抗可以替代SSI多抗血清用于测定23价肺炎球菌多糖疫苗中的多糖含量.

关键词：肺炎球菌菌苗多糖类,细菌抗体,单克隆散射测浊法和比浊法

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23价肺炎链球菌多糖疫苗和13价肺炎链球菌结合疫苗在成年人中的应用

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国际生物制品学杂志 2015年第5期38卷 239-245页

作者：朱朗陈磊林纪胜高强王见冬王新立蔡芳北京科兴生物制品有限公司研发中心 100085 北京科兴生物制品有限公司研发中心肺炎事业部 100085 美国阿拉巴马大学伯明翰分校病理学系NIH细菌性呼吸道病原参考实验室 35294 北京科兴中维生物技术有限公司 100085 北京市新型人用预防性疫苗工程技术研究中心 100085

肺炎链球菌是引起全球不同年龄人群,尤其是幼儿和老年人肺炎、败血症和脑膜炎等严重疾病的重要病原菌,由肺炎链球菌导致的这些疾病可以通过疫苗进行预防.在将肺炎链球菌疫苗纳入国家免疫计划的国家,儿童肺炎链球菌病的发病率以及疫苗型... 详细信息

肺炎链球菌是引起全球不同年龄人群,尤其是幼儿和老年人肺炎、败血症和脑膜炎等严重疾病的重要病原菌,由肺炎链球菌导致的这些疾病可以通过疫苗进行预防.在将肺炎链球菌疫苗纳入国家免疫计划的国家,儿童肺炎链球菌病的发病率以及疫苗型肺炎链球菌的携带率大大降低,且可在未免疫人群中产生间接保护作用.此文对23价肺炎链球菌多糖疫苗和1 3价肺炎链球菌结合疫苗在成年人中的应用进行探讨.

关键词：肺炎球菌菌苗多糖类,细菌疫苗,结合接种

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