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中国防痨杂志 2025年第4期47卷 460-470页

作者：王颖超刘唯夷姬秀秀尚雪恬贾红彦张蓝月孙琦杜博平朱传智潘丽萍张宗德分子生物学实验室/耐药结核病研究北京市重点实验室/首都医科大学附属北京胸科医院/北京市结核病胸部肿瘤研究所北京101149

目的:揭示结核病患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)内环状RNA(circular RNA,circRNA)表达谱,并验证获得具有结核病诊断价值的潜在circRNAs,评估其诊断性能。方法:通过微阵列芯片检测,获得结核病患者及健... 详细信息

目的:揭示结核病患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)内环状RNA(circular RNA,circRNA)表达谱,并验证获得具有结核病诊断价值的潜在circRNAs,评估其诊断性能。方法:通过微阵列芯片检测,获得结核病患者及健康人PBMCs内circRNAs表达谱。使用加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)筛选出结核病相关的关键模块。通过基因本体论(gene ontology,GO)、京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)及免疫浸润分析,探索关键模块中基因的功能。再通过验证集对关键模块中的部分circRNAs进行实时荧光定量PCR检测以验证芯片结果,并进行受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析,评估候选circRNAs的诊断效能,同时对候选circRNAs与临床特征进行Pearson相关性分析。结果:通过WGCNA分析,共确定16个模块,其中棕色模块是结核病最强相关模块。功能富集分析显示,棕色模块中基因主要富集于T细胞受体信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路、动物细胞线粒体自噬、铁死亡、泛素介导的蛋白水解等功能途径。基于棕色模块基因的免疫浸润分析提示,CD8^(+)T细胞(P<0.001)、静息记忆CD4^(+)T细胞(P<0.0001)、单核细胞(P<0.001)等细胞比例在两组间差异均有统计学意义。在棕色模块中,以P<0.05,差异倍数(fold change,fc)>4或<0.25,同时至少一组平均表达量均值>10为标准,筛选组间差异基因,共得到9个结核病特异性circRNAs,其中hsa_circ_0052124在结核病患者样本中明显低表达(Z=―6.328,P<0.0001),ROC曲线下面积为0.976(95%CI:0.940~1.000,P<0.0001),敏感度为90.0%(95%CI:73.5%~97.9%),特异度为100.0%(95%CI:88.4%~100.0%),可以有效区分结核病患者和健康对照。经Pearson相关性分析,结核病患者外周血载脂蛋白B(r=0.715)、脂蛋白(a)(r=0.598)、血糖(r=0.575)水平与hsa_circ_0052124水平均呈正相关(P值均<0.01)。结论:通过对结核病患者circRNAs表达谱进行解析,确定了一个与结核病显著相关的关键基因模块,并鉴定出在结核病患者和健康人之间存在明显差异的circRNA——hsa_circ_0052124。

关键词：结核核糖核酸分枝杆菌感染基因表达免疫

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脆性组胺酸三联体基因对人肺腺癌A549细胞恶性表型的影响

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中华结核和呼吸杂志 2005年第5期28卷 333-336页

作者：张立群汪蕙赖百塘岳文涛湛秀萍杨学惠张春燕张同梅北京市结核病胸部肿瘤研究所细胞生物学实验室 101149

目的研究外源性脆性组胺酸三联体(FHIT)基因在体内外对人肺腺癌A549细胞恶性表型的影响。方法用脂质体介导外源FHIT基因转染A549细胞,建立单克隆细胞系FHITA-549和PEGFP-A549。逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫组化方法检测外源FHIT基因... 详细信息

目的研究外源性脆性组胺酸三联体(FHIT)基因在体内外对人肺腺癌A549细胞恶性表型的影响。方法用脂质体介导外源FHIT基因转染A549细胞,建立单克隆细胞系FHITA-549和PEGFP-A549。逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫组化方法检测外源FHIT基因在A549细胞的表达状况。采用细胞生长曲线、集落形成试验、流式细胞仪及裸鼠移植瘤试验研究外源FHIT基因对A549细胞体外增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤性的影响。结果RTPCR试验证实FHIT-A549中有FHITmRNA表达,免疫组织化学染色显示FHIT-A549细胞FHIT蛋白表达强阳性,而A549细胞和转空载体的PEGFPA549细胞FHIT基因和蛋白表达均阴性。FHIT-A549细胞的集落形成率为2.6%,显著低于A549细胞的50.1%和转染空载体PEGFPA549细胞的53.6%,三者相比差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪分析显示FHIT-A549细胞95.8%阻滞在G2期。FHITA549细胞移植瘤的瘤重为(0.04±0.03)g,显著低于A549细胞的(0.24±0.11)g和转染空载体PEGFPA549细胞的(0.25±0.07)g,三者差异有统计学意义(P<0.01)。结论A549细胞内外源FHIT基因的转导并表达能显著抑制其恶性增殖和分裂,诱导其凋亡,调节其细胞周期、抑制成瘤性。

关键词：脆性组胺酸三联体细胞恶性表型人肺腺癌逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) A549细胞 FHIT基因免疫组织化学染色流式细胞仪分析免疫组化方法细胞生长曲线集落形成试验细胞体外增殖 mRNA表达细胞周期蛋白表达脂质体介导

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Ⅰ、Ⅱ相药物代谢酶遗传多态性与晚期非小细胞肺癌化疗疗效的关系

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中国肺癌杂志 2011年第11期14卷 858-864页

作者：李伟英岳文涛杨学惠张春彦王玥北京市结核病胸部肿瘤研究所细胞生物学研究室北京101149

背景与目的目前药物代谢酶遗传多态性与化疗疗效关系的研究结果多不一致,本研究旨在探讨细胞色素P4501A1(cytochrome P450 1A1,CYP1A1)、2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1)、2D6(cytochrome P450 2D6,CYP2D6)和谷胱甘肽硫转移酶M1(glutathione S-transferase M1,GSTM1)基因多态性与晚期非小细胞肺癌化疗疗效以及与肺癌患者预后的关系。方法采用PCR和PCR-RFLP技术对肺癌患者4种药物代谢酶基因分型,并对他们进行5年跟踪随访。结果携带B型CYP1A1和缺陷性GSTM1肺癌患者比其它基因型患者化疗疗效好(P<0.001)。携带A型CYP1A1肺癌患者接受非铂类化疗药物治疗比B型和C型患者疗效好(P=0.041);携带缺陷性GSTM1肺癌患者接受铂类化疗药物治疗疗效比功能型患者疗效好(P=0.011)。4种酶对晚期非小细胞肺癌患者总生存期(overall survival,OS)没有明显影响(P>0.05)。结论 A型CYP1A1肺癌患者接受非铂类化疗药物治疗比B型和C型患者疗效好;缺陷性GSTM1肺癌患者接受铂类化疗药物治疗比功能型患者疗效好。4种酶基因多态对晚期非小细胞肺癌患者OS影响没有明显统计学差异。

关键词：肺肿瘤药物代谢酶化疗效果预后

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非小细胞肺癌T7噬菌体展示文库的构建

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中国肺癌杂志 2008年第5期11卷 686-690页

作者：岳文涛王子彤王钥张丽娜北京市结核病胸部肿瘤研究所细胞生物学研究室北京101146 北京市结核病胸部肿瘤研究所胸外科北京101146

背景与目的SEREX(Serological analysis of recombinant expression libraries)是近年来发展起来的一种寻找肿瘤相关抗原的方法,通过与噬菌体展示技术结合,可以有效和快速的筛选肿瘤相关抗原。本研究拟构建人肺鳞癌和肺腺癌T7噬菌体展示... 详细信息

背景与目的SEREX(Serological analysis of recombinant expression libraries)是近年来发展起来的一种寻找肿瘤相关抗原的方法,通过与噬菌体展示技术结合,可以有效和快速的筛选肿瘤相关抗原。本研究拟构建人肺鳞癌和肺腺癌T7噬菌体展示cDNA文库,为进一步筛选和鉴定非小细胞肺癌相关抗原打下基础。方法诊断明确的肺鳞癌和腺癌患者手术标本各5例,Trizol试剂提取总RNA,Straight A's系统分离鳞癌和腺癌mRNA,逆转录合成双链cDNA后,与T7Select 10-3载体连接,体外包装并扩增得到人肺鳞癌和腺癌T7噬菌体展示cDNA文库。结果构建肺鳞癌和肺腺癌T7噬菌体展示cDNA文库各一个,原始文库重组克隆数分别为鳞癌1.8×106pfu,腺癌5×106pfu。扩增后滴度为3.2×1010pfu/mL和2.5×1010pfu/mL。随机从2个文库中各抽取24个克隆PCR扩增插入片断,电泳结果显示肺腺癌文库所有克隆均有插入片段,肺鳞癌文库插入率超过95%(23/24)。两个文库插入片断大小均在(300-1500)bp之间。结论成功构建了人肺鳞癌和腺癌T7噬菌体展示cDNA文库,为下一步筛选和鉴定非小细胞肺癌相关基因奠定基础。

关键词：噬菌体展示 cDNA文库肺肿瘤 SEREX

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非小细胞肺癌患者中Survivin抗体的临床意义及诊断价值

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中国肺癌杂志 2010年第7期13卷 706-712页

作者：马丽岳文涛张丽娜王玥张春彦杨学惠北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市肿瘤分子生物学实验室肺癌分室(细胞生物学研究室)北京101149

背景与目的在世界范围内,恶性肿瘤已经成为威胁人类健康的主要原因,且其发病率和死亡率居高不下。随着人们对肿瘤标志物研究的不断深入,肿瘤相关的自身抗体成为了研究热点。肺癌患者血清中Survivin自身抗体的临床意义目前还存在争议。... 详细信息

背景与目的在世界范围内,恶性肿瘤已经成为威胁人类健康的主要原因,且其发病率和死亡率居高不下。随着人们对肿瘤标志物研究的不断深入,肿瘤相关的自身抗体成为了研究热点。肺癌患者血清中Survivin自身抗体的临床意义目前还存在争议。本研究旨在探讨Survivin自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中可能的临床应用价值。方法采用RT-PCR方法获得Survivin cDNA,构建原核表达载体pET30a(+)/Survivin,亲和层析方法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定,建立基于Survivin融合蛋白的间接ELISA方法,对89例健康志愿者、215例非小细胞肺癌患者以及20例肺部良性疾病患者的血清样本进行检测。结果重组Survivin融合蛋白在BL21(DE3)中以包涵体形式高效表达,间接ELISA方法检测Survivin自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中的阳性率为19.5%,特异性为88.9%,Survivin自身抗体与非小细胞肺癌患者的肿瘤大小、远处转移间存在相关性(P<0.05),Survivin自身抗体与CEA在非小细胞肺癌患者中联合检测的阳性率明显高于CEA与NSE、SCC、CYFRA、ProGRP联合检测的阳性率,这大大提高了非小细胞肺癌检测的敏感性。结论本研究成功构建原核表达载体pET30a(+)/Survivin,并建立检测Sur-vivin自身抗体的间接ELISA方法,Survivin自身抗体与肺癌肿瘤大小、远处转移间的相关性及在非小细胞肺癌患者联合检测中的重要作用,为Survivin自身抗体在肺癌中的临床应用提供了线索和依据。

关键词：原核表达 Survivin自身抗体肺肿瘤间接ELISA 联合检测

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抗人肺癌噬菌体展示可溶性ScFv的筛选与鉴定及其序列测定

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中华肿瘤防治杂志 2009年第19期16卷 1458-1462页

作者：岳文涛赖百塘张春燕湛秀萍北京市结核病胸部肿瘤研究所北京肿瘤分子生物学实验室肺癌分室(细胞生物学实验室) 北京101149

目的:制备抗人肺癌单链抗体(single chain Fvferment antibody,ScFv),并对抗体生物学特性进行初步研究。方法:以人肺腺癌细胞系A2为抗原,对5F-11杂交瘤细胞噬菌体抗体库进行富集和筛选。以人肺腺癌细胞系A2和正常人淋巴细胞为抗原,进行... 详细信息

目的:制备抗人肺癌单链抗体(single chain Fvferment antibody,ScFv),并对抗体生物学特性进行初步研究。方法:以人肺腺癌细胞系A2为抗原,对5F-11杂交瘤细胞噬菌体抗体库进行富集和筛选。以人肺腺癌细胞系A2和正常人淋巴细胞为抗原,进行酶联免疫吸附试验,从富集后的噬菌体抗体库中筛选出只与A2细胞结合的阳性克隆。筛选的噬菌体克隆转染大肠埃希菌HB2151,得到可溶性单链抗体分泌克隆。可溶性抗体分泌克隆测序。应用ELISA、竞争性ELISA、SDS-PAGE及蛋白质印迹法对其中的2A7-1克隆进行初步鉴定。结果:以肺腺癌细胞A2为抗原进行了4轮富集。进一步筛选得到18个仅识别A2细胞而与人淋巴细胞无反应的融合抗体分泌克隆。转染大肠埃希菌HB2151后筛选到能与A2细胞特异结合的可溶性抗体分泌克隆2A7-1。竞争性ELISA结果显示,5F-11能强烈抑制2A7-1与A2细胞的结合。SDS-PAGE蛋白质印迹法显示得到大小约为30×103的单链抗体。结论:通过噬菌体抗体技术成功分离到了鼠单抗5F-11的可溶性ScFv分泌克隆,为进一步的抗体应用研究奠定了基础。

关键词：细菌噬菌体抗体单克隆肺肿瘤腺癌

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应用SEREX技术筛选和鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原

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中国肺癌杂志 2009年第4期12卷 289-293页

作者：岳文涛张丽娜郑华王玥孙颖焦振峰北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市肿瘤分子生物学实验室肺癌分室(细胞生物学研究室)北京101149

背景与目的目前用于非小细胞肺癌诊断的标志物为数不多,为寻找更多的早期诊断和靶向治疗相关的标志物,本研究应用SEREX技术筛选与鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原。方法使用非小细胞肺癌患者血清对人肺鳞癌和腺癌噬菌体展示文库进行生物... 详细信息

背景与目的目前用于非小细胞肺癌诊断的标志物为数不多,为寻找更多的早期诊断和靶向治疗相关的标志物,本研究应用SEREX技术筛选与鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原。方法使用非小细胞肺癌患者血清对人肺鳞癌和腺癌噬菌体展示文库进行生物淘选和SEREX筛选。PCR扩增阳性克隆插入片段后测序,结果与GeneBank数据库中已知基因进行同源性比较,分析其生物学特性。结果用非小细胞肺癌血清对噬菌体展示文库进行筛选,共获得31个阳性克隆,测序后发现其代表15个基因,其中12个与已知cDNA序列同源,与肺癌或其它肿瘤的发生、发展关系密切;另外3个未发现有同源基因,可能是新基因。结论应用SEREX技术发现15个肺癌相关抗原和3个肺癌相关抗原的候选基因,为进一步的深入研究打下良好的基础。

关键词：肺肿瘤 SEREX 噬菌体展示基因文库

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PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌的关系

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中国肺癌杂志 2009年第4期12卷 312-315页

作者：岳文涛王小敏王玥北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市肿瘤分子生物学实验室肺癌分室(细胞生物学研究室)北京101149

背景与目的PI3K/Akt/mTOR通路失调对肺癌形成可能具有重要作用,本研究通过分析非小细胞肺癌组织中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平,探讨PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌之间的关系。方法外科... 详细信息

背景与目的PI3K/Akt/mTOR通路失调对肺癌形成可能具有重要作用,本研究通过分析非小细胞肺癌组织中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平,探讨PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌之间的关系。方法外科手术中获取40例非小细胞肺癌组织及30例癌旁组织,应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测癌及癌旁组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平。结果非小细胞肺癌组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平分别为(40±59)%、(61±23)%、(77±32)%、(43±21)%,癌旁组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平分别为(16±40)%、(23±16)%、(10±12)%、(20±17)%,非小细胞肺癌组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平均高于癌旁组织(P<0.01)。联合应用4个基因表达作为NSCLC诊断标志,诊断的敏感性达到87.5%,特异性为90%。结论非小细胞肺癌中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径相关基因表达水平明显上调,说明该通路在非小细胞肺癌中被激活。联合检测VEGF、PI3K、Akt、mTOR的表达水平改变可能作为NSCLC的诊断标志。

关键词：肺肿瘤 VEGF P13K Akt mTOR

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c-Met/ErbB3/PI3K信号通路在肺癌EGFR-TKI获得性耐药中的研究进展

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肿瘤防治研究 2011年第6期38卷 721-723页

作者：贾文韫李宝兰岳文涛北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市肿瘤分子生物学实验室肺癌分室(细胞生物学研究室) 北京101149 北京市结核病胸部肿瘤研究所综合科北京101149

0引言目前小分子酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）包括吉非替尼（Gefitinib）和厄洛替尼（Erlotinb）,作为二线药物在非小细胞肺癌的临床治疗中取得了明显疗效。但在临床使用中,EG-FR-TKI敏感病人在用药6~8月后部分... 详细信息

0引言目前小分子酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）包括吉非替尼（Gefitinib）和厄洛替尼（Erlotinb）,作为二线药物在非小细胞肺癌的临床治疗中取得了明显疗效。但在临床使用中,EG-FR-TKI敏感病人在用药6~8月后部分出现了疾病进展即获得性耐药,获得性耐药的发生使小分子酪氨酸激酶抑制剂的应用受到了极大的限制[1]。

关键词： c-Met ErbB3 PI3K 肺癌获得性耐药

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p53调控的肺癌细胞顺铂敏感性相关基因片段的分离和克隆

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中国肺癌杂志 2003年第3期6卷 172-175页

作者：张洪涛汪惠赖百塘张春燕杨学惠北京市结核病胸部肿瘤研究所细胞生物学研究室北京市肿瘤分子生物学重点实验室肺癌分室 101149

目的　克隆野生型 p5 3 (wtp5 3 )影响人大细胞肺癌 80 1 D细胞系顺铂敏感性相关基因片段。方法　采用转基因方法补偿 80 1 D细胞p5 3功能 ,分别提取经IC50 浓度顺铂刺激的转染wtp5 3细胞、空载细胞和未经顺铂作用的转wtp5 3细胞RNA ,... 详细信息

目的　克隆野生型 p5 3 (wtp5 3 )影响人大细胞肺癌 80 1 D细胞系顺铂敏感性相关基因片段。方法　采用转基因方法补偿 80 1 D细胞p5 3功能 ,分别提取经IC50 浓度顺铂刺激的转染wtp5 3细胞、空载细胞和未经顺铂作用的转wtp5 3细胞RNA ,用银染mRNA差异显示方法分离差异表达基因 ,反转录点杂交和巢式PCR进行确证。阳性片段进行克隆及序列分析。结果　获得 6条阳性片段 ,2条含有开放阅读框架(ORF) ,其中 1条片段部分与核糖核苷还原酶α链有 5 6%同源性 ,另一片段D1含有一个长ORF ,与已知cDNA序列同源率低。结论　p5 3对 80 1 D细胞顺铂敏感性的影响有明显的基因水平改变 ,可能诱导了相关基因表达。

关键词：肺肿瘤 p53基因顺铂药物敏感性基因片段克隆肺癌

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