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解剖学报 2001年第3期32卷 255-259页

作者：孙晓冬马静葛烨华王永潮薛社普韩代书中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞生物学研究室北京100005 北京师范大学生物系细胞增殖与调控开放实验室北京100875

目的　研究中心体蛋白centrin在大鼠生精细胞中的表达情况 ,以深入了解centrin在精子发生过程中的作用。　方法　通过重力沉降法分离大鼠不同发育阶段的生精细胞 ,用免疫荧光和蛋白印迹实验检测各级生精细胞中centrin蛋白的表达 ,用定量... 详细信息

目的　研究中心体蛋白centrin在大鼠生精细胞中的表达情况 ,以深入了解centrin在精子发生过程中的作用。　方法　通过重力沉降法分离大鼠不同发育阶段的生精细胞 ,用免疫荧光和蛋白印迹实验检测各级生精细胞中centrin蛋白的表达 ,用定量RT PCR检测centrin同源基因centrin1和centrin2mRNA的表达水平。　结果　间接免疫荧光和蛋白印迹显示精母细胞、圆形、长形精子细胞均有centrin蛋白存在 ,位于中心粒上 ,而在附睾的成熟精子中centrin则消失。RT PCR研究发现 ,centrin1在睾丸组织中特异性表达 ,centrin2在多种组织中均有表达。在睾丸中 ,centrin1仅在生精细胞进入减数分裂后转录 ,其mRNA水平在圆形精子细胞中最高 ,而centrin2在精原细胞中即有表达 ,减数分裂后其mRNA难以检测到。　结论　centrin蛋白在大鼠雄性配子的发育过程中最终丢失 ;该基因家族中同源基因centrin1和centrin2表达呈现组织特异性和发育阶段特异性 ,在精子发生过程中发挥不同功能 ,centrin1蛋白可能与减数分裂及鞭毛生成相关。

关键词： centrin 精子发生中心体大鼠

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三尖杉酯碱诱导HeLa细胞凋亡的研究

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北京师范大学学报（自然科学版） 2000年第3期36卷 394-399页

作者：宋长城邢录洲宋晓元彭安王永潮北京师范大学教育部细胞增殖及调控生物学开放实验室北京100875

报道了三尖杉酯碱 (harringtonine ,HT)可以诱导HeLa细胞凋亡 .采用Heochst33342荧光染色、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞光度术 (FCM)的方法 ,研究了HT对HeLa细胞凋亡的影响 .利用细胞同步化技术和斑点杂交法研究发现 ,HT影响了HeLa细胞c ... 详细信息

报道了三尖杉酯碱 (harringtonine ,HT)可以诱导HeLa细胞凋亡 .采用Heochst33342荧光染色、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞光度术 (FCM)的方法 ,研究了HT对HeLa细胞凋亡的影响 .利用细胞同步化技术和斑点杂交法研究发现 ,HT影响了HeLa细胞c myc和bcl 2基因的表达并且与细胞周期密切相关 .初步探讨其凋亡诱导的机制 ,认为HT通过在G1和G2 期下调细胞凋亡抑制基因bcl 2的诱导凋亡 ,以及下调c myc癌基因阻滞细胞增殖 ,并延迟凋亡发生 .这些结果对于了解HT的药物作用机制和提高临床化疗疗效具有重要意义 .

关键词： HeLa细胞三尖杉酯碱细胞凋亡抗瘤药物

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TGF-β信号通路中Smad蛋白与基因转录调节研究进展

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解剖学报 2000年第z1期31卷 13-17页

作者：汪娟柳惠图北京师范大学生命科学学院细胞增殖及凋控生物学教育部重点实验室北京100875

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G蛋白βγ亚基介导的磷脂酶A_2激活与β-AR失敏的关系

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北京师范大学学报（自然科学版） 2000年第6期36卷 830-834页

作者：肖雪媛葛学铭安明榜吕宝璋北京师范大学教育部细胞增殖及调控生物学开放实验室北京100875 军事医学科学院基础医学研究所北京100850

研究异丙基肾上腺素 (ISO)所致的体外培养大鼠肺 β 肾上腺素受体 ( β AR)失敏的机理 ,首先观察了不同浓度和不同作用时间的ISO对大鼠肺 β AR失敏的影响 ,可见ISO所致 β AR失敏呈良好的量效和时效关系 ;ISO对磷脂酶A2 (PLA2 )激... 详细信息

研究异丙基肾上腺素 (ISO)所致的体外培养大鼠肺 β 肾上腺素受体 ( β AR)失敏的机理 ,首先观察了不同浓度和不同作用时间的ISO对大鼠肺 β AR失敏的影响 ,可见ISO所致 β AR失敏呈良好的量效和时效关系 ;ISO对磷脂酶A2 (PLA2 )激活也呈时间和剂量依赖性 ,且PLA2 激活比 β AR失敏所需的ISO剂量低 .上述现象可分别被PLA2 特异性抑制剂对溴乙酰酚 (PBA)、地塞米松 (Dex)、Gi蛋白灭活剂百日咳毒素 (PTX)、抗Giα血清和抗Gβγ血清所抑制 ;而 5′ O 3 硫代三磷酸鸟甘 (GTP γ S)则能加重ISO所致β AR失敏和PLA2 激活 .以上结果提示 :体外培养的大鼠肺 β AR在激动剂长时期作用下 ,受体发生的失敏与G蛋白介导的PLA2 激活有关 ,此时β AR的信号转导途径由原来腺苷酸环化酶正偶联转变为G蛋白 βγ亚基介导的PLA2

关键词： β-肾上腺素能受体磷脂酶A 对溴乙酰酚失酶机理

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无微管稳定剂条件下植物微管蛋白的体外聚合

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科学通报 2000年第11期45卷 1158-1163页

作者：黄善金任海云袁明中国农业大学生物学院植物科学系农业部植物生理生化重点开放实验室北京100094 北京师范大学生命科学学院教育部细胞增殖及调控生物学重点开放实验室北京100875

从百合花粉中提取高纯度的植物微管蛋白, 建立了无微管稳定剂和微管组织中心的植物微管的体外聚合体系, 并对植物微管蛋白在体外条件下的聚合特性进行了分析. 结果表明, 纯化的微管蛋白在体外能够很好地进行聚合, 电子显微镜下可以观察... 详细信息

从百合花粉中提取高纯度的植物微管蛋白, 建立了无微管稳定剂和微管组织中心的植物微管的体外聚合体系, 并对植物微管蛋白在体外条件下的聚合特性进行了分析. 结果表明, 纯化的微管蛋白在体外能够很好地进行聚合, 电子显微镜下可以观察到典型的微管结构, 微管蛋白聚合的动力学曲线呈现出典型的'抛物线'曲线. 紫杉醇的存在改变了百合花粉微管蛋白的聚合特性: 非正常微管聚合增加, 体外聚合的临界浓度从无紫杉醇存在条件下的2.8 mg/mL降低到0.043 mg/mL. 实验结果为进一步研究植物微管的组构和动态调节提供了重要的数据.

关键词：百合花粉微管蛋白微管微管蛋白聚合

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抑制cyclinD1表达对乳腺癌细胞增殖及cyclinE、CDK2和p21^(cip1)转录的影响

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解剖学报 2000年第3期31卷 221-225页

作者：桑建利叶颖江王永潮北京师范大学生命科学学院细胞增殖及调控生物学开放实验室北京100875 北京医科大学第二附属医院普外科北京100044

目的　分析探讨人乳腺癌细胞中 cyclin D1的表达受到反义 RNA抑制后 ,细胞增殖能力的变化以及cyclin E,CDK2和 p2 1cip1 (cip1/ waf1/ sdi1)基因表达受到的影响。　方法　将表达 cyclin D1反义 RNA的重组质粒转入人乳腺癌细胞 ,由此抑... 详细信息

目的　分析探讨人乳腺癌细胞中 cyclin D1的表达受到反义 RNA抑制后 ,细胞增殖能力的变化以及cyclin E,CDK2和 p2 1cip1 (cip1/ waf1/ sdi1)基因表达受到的影响。　方法　将表达 cyclin D1反义 RNA的重组质粒转入人乳腺癌细胞 ,由此抑制细胞中 cyclin D1的表达 ,然后分析细胞生长速率和各时相细胞分布比例的变化 ,并通过Northern blot分析有关基因的表达水平。　结果　 cyclin D1表达受到抑制的细胞与对照相比 ,细胞增殖速率明显下降 ,培养至第 6 d时 ,生长抑制率为 5 4%。细胞周期各时相的分布比例也有较大的变化 ,G1期细胞比例上升 ,而 S期及 G2 / M期细胞比例下降。cyclin E和 CDK2的 m RNA水平显示出有不同程度的下降 ,而 p2 1cip1的表达无明显变化。　结论　 cyclin D1表达的抑制可明显减弱人乳腺癌细胞的异常增殖 ,同时表明同为细胞周期调控基因的 cyclin E和CDK2的表达与 cyclin D1的表达密切相关 ,而 p2 1cip1的表达不受 cyclin

关键词：乳腺癌细胞增殖 cyclinD1 CDK2 p21^cip1

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PKC_γ过表达诱导C_3H_(10)T_(1/2)细胞生长失控的初探

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生物化学与生物物理进展 1999年第6期26卷 569-573页

作者：赵霞柳惠图北京师范大学生物系细胞增殖及调控生物学开放实验室北京100875

通过ＤＮＡ重组构建蛋白激酶Ｃγ（ＰＫＣγ）亚类的重组质粒并经基因转染技术和ＤＮＡ印迹、蛋白质印迹与ＰＫＣ活性分析，获得了过表达ＰＫＣγ的Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２细胞———ＮＣＰ４．ＮＣＰ４细胞生长速率提高，流式... 详细信息

通过ＤＮＡ重组构建蛋白激酶Ｃγ（ＰＫＣγ）亚类的重组质粒并经基因转染技术和ＤＮＡ印迹、蛋白质印迹与ＰＫＣ活性分析，获得了过表达ＰＫＣγ的Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２细胞———ＮＣＰ４．ＮＣＰ４细胞生长速率提高，流式细胞光度术检测表明，ＮＣＰ４细胞Ｇ１期百分率下降，Ｓ期和Ｇ２＋Ｍ期百分率升高，与对照组细胞相比，血清依赖性明显下降，贴壁依赖性降低，在软琼脂中形成小集落，出现部分转化表型．进一步检测，首次观察到ＮＣＰ４细胞中癌基因ｃｓｉｓ表达明显增强，这可能是ＮＣＰ４细胞血清依赖性下降的分子机理之一．实验表明，在正常Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２细胞中ＰＫＣγ的过表达可直接导致细胞增殖加速并可诱导出现部分转化特征．

关键词：细胞增殖细胞转化 PKCγ C3H10T1/2 调控

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新抑癌基因p1^(5MTS2/INK4B)的研究进展

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科学通报 1999年第8期44卷 793-799页

作者：童迎凯柳惠图北京师范大学生物系细胞增殖及调控生物学开放实验室北京100875

近年来发现 ,细胞中抑制肿瘤发生、发展的机制除了有Rb ,p5 3等抑癌基因发挥作用外 ,一类CKI分子 (cyclin dependentkinaseinhibitor,细胞周期引擎分子的抑制剂 )也具有非常重要的作用 .在已知的CKIp2 1和p1 6两大家族中 ,p1 5是与p1 6... 详细信息

近年来发现 ,细胞中抑制肿瘤发生、发展的机制除了有Rb ,p5 3等抑癌基因发挥作用外 ,一类CKI分子 (cyclin dependentkinaseinhibitor,细胞周期引擎分子的抑制剂 )也具有非常重要的作用 .在已知的CKIp2 1和p1 6两大家族中 ,p1 5是与p1 6同源性很高的一个CKI分子 ,大量肿瘤以及多种癌细胞系中的调查表明 ,p1 5基因的异常表达 (如缺失、突变和重排等 )在许多肿瘤及癌细胞系中存在 ,并与其中一些肿瘤的发展密切相关 ,这为确定p1 5作为一个新的抑癌基因提供了证据 .在此基础上 ,进一步对p1 5在细胞周期中调控细胞增殖和分化机理的研究发现 :p1 5能抑制一些肿瘤细胞的增殖 ,并可作为细胞生长抑制因子TGF β发挥作用的中介者 ,另外在某些类型细胞的分化过程中 ,p1 5水平的上升与细胞分化表型的出现具有相关性 .这些关于p1 5的研究进展为进一步阐明细胞周期调控及细胞癌变的分子机制提供了线索 ,并可能为p1

关键词： CKI 抑癌基因细胞周期诱导分化癌治疗

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抑制PKCα对乳腺癌细胞特性及cyclin E和CDK2基因表达的影响

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实验生物学报 1999年第4期32卷 367-371页

作者：桑建利王永潮北京师范大学生物系细胞增殖及调控生物学开放实验室北京100875

将构建的表达PKC_α反义RNA的质粒,转入人乳腺癌细胞Bcap-37中,通过筛选与检测获得PKC_α表达受到抑制的细胞。随后分析了细胞生长的血清依赖性、软琼脂成集落和致瘤性的变化,以及cyclin E和CDK2基因表达所受到的影响。结果显示PKC_α... 详细信息

将构建的表达PKC_α反义RNA的质粒,转入人乳腺癌细胞Bcap-37中,通过筛选与检测获得PKC_α表达受到抑制的细胞。随后分析了细胞生长的血清依赖性、软琼脂成集落和致瘤性的变化,以及cyclin E和CDK2基因表达所受到的影响。结果显示PKC_α表达受到抑制后,乳腺癌细胞生长的血清依赖性增加,软琼脂成集落能力下降,细胞致瘤性被强烈抑制,说明PKC_α表达下降或活性降低伴随着乳腺肿瘤细胞恶性程度的减弱。同时,结果还表明PKC_α表达受到抑制后,导致细胞周期调控系统中的cyclin E及CDK2表达水平下降,说明PKC_α参与的信号转导系统与cyclin/CDK参与的细胞周期调控系统在功能上有着较为密切的联系。

关键词： PKCα cylinE CDK2 基因表达乳腺癌协间作用

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植物肌动蛋白的纯化及荧光标记

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Acta Botanica Sinica 1999年第10期41卷 1099-1103页

作者：任海云北京师范大学生命科学学院教育部细胞增殖与调控生物学开放实验室北京100875

以植物花粉为材料,利用肌动蛋白可以与其单体结合蛋白———profilin特异性结合的特性及profilin的多聚脯氨酸亲和柱层析法,获得较大量、高纯度,具有活性的植物肌动蛋白,并用羧酸俄勒冈绿对所获纯化肌动蛋白进行了荧光标记。结果显示,从... 详细信息

以植物花粉为材料,利用肌动蛋白可以与其单体结合蛋白———profilin特异性结合的特性及profilin的多聚脯氨酸亲和柱层析法,获得较大量、高纯度,具有活性的植物肌动蛋白,并用羧酸俄勒冈绿对所获纯化肌动蛋白进行了荧光标记。结果显示,从10g玉米(ZeamaysL.)花粉中可得到1.2mg具有绿色荧光的肌动蛋白,标记率为60%。体外实验结果表明,所得荧光肌动蛋白在适宜条件下可聚合成绿色荧光微丝。

关键词：植物肌动蛋白 Profilin 纯化荧光标记

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