检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学科学院院刊 2007年第4期31卷 338-342页

作者：安小平朱晓峰张昕陈锦辉陈士华周育森童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:探索一种针对慢性乙型肝炎的特异性长效基因治疗手段。方法:改造乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)为基因治疗载体,敲除其所有的开放阅读框(open reading frames,ORFs),同时保留包装信号序列,并且插入增强绿色荧光蛋白(enhanced ... 详细信息

目的:探索一种针对慢性乙型肝炎的特异性长效基因治疗手段。方法:改造乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)为基因治疗载体,敲除其所有的开放阅读框(open reading frames,ORFs),同时保留包装信号序列,并且插入增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)作为报告基因。同时构建辅助细胞系,为上述病毒载体(假病毒)提供包装所需要的病毒蛋白。以该假病毒载体转染辅助细胞系,以酶联免疫方法检测细胞培养上清中乙型肝炎病毒抗原,并在荧光显微镜下观察EGFP的表达,用透射电镜观察培养上清中的病毒颗粒,同时用实时定量PCR的方法对分泌到细胞培养上清中的假病毒进行了定量检测。结果与结论:以假病毒载体转染辅助细胞后,电镜观察到培养上清中乙肝病毒的丹氏粒(Dane particle)。实时定量PCR分析结果显示,细胞分泌到培养上清的假病毒含量达103拷贝/μl。ELISA结果显示该上清中同时表达了HBV表面抗原和e抗原,通过荧光显微镜观察发现外源基因绿色荧光蛋白获得有效表达。

关键词：肝特异性病毒载体乙型肝炎病毒基因转运

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特异性等位基因PCR扩增技术检测家蝇击倒抗性相关钠通道的基因突变

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中国媒介生物学及控制杂志 2007年第3期18卷 255-256页

作者：李春晓张晓龙曹晓梅董言德赵彤言军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

城市家蝇(Musca domestica)的化学防制多以混配或复配拟除虫菊酯类杀虫剂为主,近10年来国内各城市均有家蝇对拟除虫菊酯产生抗药性的报道。昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性主要是击倒抗性(knockdown resistance,kdr),Farnham发现kdr在... 详细信息

城市家蝇(Musca domestica)的化学防制多以混配或复配拟除虫菊酯类杀虫剂为主,近10年来国内各城市均有家蝇对拟除虫菊酯产生抗药性的报道。昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性主要是击倒抗性(knockdown resistance,kdr),Farnham发现kdr在家蝇对拟除虫菊酯的抗性中具有重要作用。[第一段]

关键词：击倒抗性 PCR扩增拟除虫菊酯类杀虫剂家蝇基因突变技术检测等位基因钠通道

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实时荧光定量PCR检测莫氏立克次体

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解放军医学杂志 2007年第10期32卷 1054-1056页

作者：杨晓陈梅玲温博海牛东升孙长俭李青凤军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的采用TaqMan-MGB探针建立检测莫氏立克次体的实时荧光定量PCR。方法依据莫氏立克次体外膜蛋白B基因(ompB)设计引物和探针,以克隆的ompB作模板建立实时荧光定量PCR方法。结果建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线... 详细信息

目的采用TaqMan-MGB探针建立检测莫氏立克次体的实时荧光定量PCR。方法依据莫氏立克次体外膜蛋白B基因(ompB)设计引物和探针,以克隆的ompB作模板建立实时荧光定量PCR方法。结果建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.995);该方法能检出<10拷贝的莫氏立克次体DNA,敏感性为普通PCR的1000倍。用该方法检测莫氏立克次体DNA,结果为阳性,但是检测其他相关细菌DNA的结果均为阴性。用该方法检测莫氏立克次体感染豚鼠血标本,50%样本检测为阳性,而普通PCR检测结果均为阴性。结论该实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性,适合于快速检测样本中微量莫氏立克次体DNA,可用于临床实验室快速确诊地方性斑疹伤寒。

关键词：莫氏立克次体实时定量PCR 外膜蛋白B基因地方性斑疹伤寒

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基于N蛋白稳定表达细胞株的SARS-CoV间接免疫荧光检测方法的建立

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军事医学科学院院刊 2007年第2期31卷 166-169页

作者：赵海龙姜涛陈水平赵慧邓永强于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

目的:建立基于SARS-CoVN蛋白稳定表达细胞系的间接免疫荧光法,以在普通实验室对SARS-CoV特异抗体进行检测。方法:将含有SARS-CoVN基因的重组质粒通过脂质体转染BHK-21细胞,筛选稳定表达细胞系并制备间接免疫荧光抗原片,以鼠抗SARS血清... 详细信息

目的:建立基于SARS-CoVN蛋白稳定表达细胞系的间接免疫荧光法,以在普通实验室对SARS-CoV特异抗体进行检测。方法:将含有SARS-CoVN基因的重组质粒通过脂质体转染BHK-21细胞,筛选稳定表达细胞系并制备间接免疫荧光抗原片,以鼠抗SARS血清进行检测,并以其他呼吸道病毒抗体评估其特异性。结果与结论:建立了可检测SARS-CoV抗体的基于SARS-CoVN蛋白稳定表达重组细胞系的间接免疫荧光法,检测其他呼吸道病毒抗体为阴性,特异性良好。该间接免疫荧光法为SARS-CoV抗体的普通实验室检测提供了快速安全的诊断方法。

关键词： SARS冠状病毒 N蛋白重组细胞株免疫荧光

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口服鼠疫F1-V重组融合蛋白活菌疫苗的构建及免疫效果的初步研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第3期27卷 251-253页

作者：郭习勤王栋邢丽崔萍董梅王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京 100071

鼠疫耶尔森菌能产生很多由染色体或质粒编码的毒力因子，包括pgm、pst、Yops、F1抗原、V抗原等。F1和V抗原已被证实为主要保护性抗原，且存在属间保守性，F1-V融合抗原分子在免疫原性和免疫保护性上具有叠加效应，将两者联合接种可保护... 详细信息

鼠疫耶尔森菌能产生很多由染色体或质粒编码的毒力因子，包括pgm、pst、Yops、F1抗原、V抗原等。F1和V抗原已被证实为主要保护性抗原，且存在属间保守性，F1-V融合抗原分子在免疫原性和免疫保护性上具有叠加效应，将两者联合接种可保护小鼠抵抗109峨强度攻击。在鼠疫杆菌基因组、蛋白组和功能基因组研究的基础上，F1和V是鼠疫新型疫苗研究首选的保护性抗原分子的靶标。现有鼠疫死菌苗和鼠疫活菌苗在剂型和接种方式没有黏膜保护作用，可能会因此影响疫苗的保护效果。沙门菌可有效提呈抗原到肠道的免疫系统，在肠道组织、肝脏中增殖，可持续诱导机体细胞、体液免疫和黏膜免疫。本实验通过含有asd基因的重组质粒与缺失asd基因的减毒沙门菌构成的宿主-载体平衡致死系统，在无抗生素选择压力的条件下在载体菌株中稳定表达鼠疫F1-V融合抗原蛋白，以重组菌灌胃法黏膜途径免疫小鼠检测其免疫原性，尝试研究预防肺鼠疫的口服活载体疫苗。

关键词：鼠疫耶尔森菌活菌疫苗重组融合蛋白宿主-载体平衡致死系统免疫效果口服保护性抗原功能基因组

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淡色库蚊对残杀威抗性与酯酶和乙酰胆碱酯酶的关系研究

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中国媒介生物学及控制杂志 2007年第1期18卷 9-11页

作者：李春晓董言德赵彤言军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究淡色库蚊对残杀威抗性与酯酶和乙酰胆碱酯酶的关系。方法WHO浸渍法检测蚊虫抗性指数;分光光度法检测羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活性。结果使用残杀威对淡色库蚊野外品系进行筛选,筛选8代后抗性指数由原来的4.77倍上升至12.07倍。... 详细信息

目的研究淡色库蚊对残杀威抗性与酯酶和乙酰胆碱酯酶的关系。方法WHO浸渍法检测蚊虫抗性指数;分光光度法检测羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活性。结果使用残杀威对淡色库蚊野外品系进行筛选,筛选8代后抗性指数由原来的4.77倍上升至12.07倍。对敏感品系和抗性品系分别进行羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活性测定,二者的羧酸酯酶活性差异无统计学意义(P>0.05),而二者的乙酰胆碱酯酶活性在高浓度残杀威抑制浓度(100×10-6、10×10-6、1×10-6)下,抑制率敏感品系分别为(93.92±0.65)%、(91.69±0.54)%和(87.03±1.14)%,抗性品系分别为(89.81±0.92)%、(87.41±1.66)%和(83.84±0.36)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论羧酸酯酶在对残杀威的抗性形成中作用较小,而乙酰胆碱酯酶的敏感性降低与抗性品系的抗性形成有关。

关键词：淡色库蚊残杀威羧酸酯酶乙酰胆碱酯酶

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新型重组人源抗狂犬病毒糖蛋白单链抗体的制备及活性分析

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军事医学科学院院刊 2007年第6期31卷 505-508页

作者：蔡昆王慧史晶包士中侯晓军荫俊军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:利用大肠杆菌表达新型人源抗狂犬病毒糖蛋白单链抗体ScFv,并验证其活性。方法:采用基因融合获得ScFv基因,构建重组表达质粒pET-22b(+)-ScFv,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导获得高效表达。结果:Western印迹显示目的蛋白表达正确... 详细信息

目的:利用大肠杆菌表达新型人源抗狂犬病毒糖蛋白单链抗体ScFv,并验证其活性。方法:采用基因融合获得ScFv基因,构建重组表达质粒pET-22b(+)-ScFv,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导获得高效表达。结果:Western印迹显示目的蛋白表达正确,表达产物以包涵体形式存在,经Ni-NTA柱纯化和体外复性,获得纯度达90%的ScFv蛋白。ELISA结果显示在PBS及人血清中ScFv的结合稳定性有所提高,流式细胞术证明目的蛋白能靶向结合狂犬病毒,通过中和效价测定实验测得ScFv的中和效价为40 U/mg。结论:成功利用原核表达系统实现了对人源抗GPRV ScFv的表达,并且具有一定的中和活性。

关键词：单链抗体狂犬病毒活性原核表达

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肉毒毒素蛋白受体sytIIN端片段基因的合成及其在大肠杆菌中的融合表达

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中国生物工程杂志 2007年第7期27卷 17-20页

作者：史晶王慧包士中侯晓军荫俊军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

旨在构建肉毒毒素蛋白受体sytIIN端片段的原核表达载体,并在大肠杆菌pMAL-c2x系统中表达MBP-Syt融合蛋白。根据GenBank中已报道的人sytII基因序列,截取N端氨基酸序列,依据大肠杆菌的偏爱密码子,设计引物人工合成全基因,将全长基因克隆... 详细信息

旨在构建肉毒毒素蛋白受体sytIIN端片段的原核表达载体,并在大肠杆菌pMAL-c2x系统中表达MBP-Syt融合蛋白。根据GenBank中已报道的人sytII基因序列,截取N端氨基酸序列,依据大肠杆菌的偏爱密码子,设计引物人工合成全基因,将全长基因克隆至原核表达载体pMAL-c2x中,重组质粒转化大肠杆菌*** ER2566,IPTG诱导表达。表达产物经Amylose Resin亲和层析进行纯化,SDS-PAGE和免疫印记对其进行鉴定,并对该蛋白进行活性的初步分析,为进一步研究毒素与受体相互作用的机制奠定基础。

关键词：肉毒毒素受体 MBP融合蛋白原核表达

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鼠源抗B型肉毒毒素单链抗体噬菌体文库的构建筛选及抗体免疫学活性的初步研究

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微生物学通报 2007年第6期34卷 1037-1041页

作者：杨秀清王慧史晶蔡昆侯晓军包士中荫俊军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

B型肉毒毒素重链C-端片段(BoNTB/Hc)经金属螯和层析法纯化后免疫Balb/c小鼠,从其脾淋巴细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,用抗体可变区混合引物进行全套抗体重、轻链可变区基因的扩增,体外随机装配成单链抗体(scFv)。将其克隆至pCANTAB5E中... 详细信息

B型肉毒毒素重链C-端片段(BoNTB/Hc)经金属螯和层析法纯化后免疫Balb/c小鼠,从其脾淋巴细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,用抗体可变区混合引物进行全套抗体重、轻链可变区基因的扩增,体外随机装配成单链抗体(scFv)。将其克隆至pCANTAB5E中,构建单链抗体噬菌体抗体库。结果表明经过4轮"吸附-洗脱-扩增"的富集过程,筛选获得高亲和力的克隆。序列测定符合抗体可变区结构特点。

关键词： B型肉毒毒素 scFv 噬菌体抗体库

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CT抗原NY-ESO-1基因克隆、表达及纯化

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军事医学科学院院刊 2007年第2期31卷 122-125页

作者：江华郑玉玲姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:利用大肠杆菌表达人CT抗原NY-ESO-1,对表达产物进行Western印迹鉴定和纯化,为今后利用其进行肿瘤疫苗的研究奠定基础。方法:通过全基因拼接获得NY-ESO-1基因,构建重组表达载体NY-ESO-1-pET28a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中利用IPTG诱... 详细信息

目的:利用大肠杆菌表达人CT抗原NY-ESO-1,对表达产物进行Western印迹鉴定和纯化,为今后利用其进行肿瘤疫苗的研究奠定基础。方法:通过全基因拼接获得NY-ESO-1基因,构建重组表达载体NY-ESO-1-pET28a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中利用IPTG诱导获得表达,利用单克隆抗体进行Western印迹鉴定,通过Ni柱亲和纯化获得纯化蛋白。结果与结论:拼接的NY-ESO-1全基因经测序证明与GenBank中人的NY-ESO-1全基因完全相符;构建的原核表达载体NY-ESO-1-pET28a(+)可稳定地可溶性表达NY-ESO-1蛋白;经Ni柱亲和纯化获得较好的纯化结果;利用鼠抗人单克隆抗体对表达的蛋白进行验证,结果显示阳性。本研究成功利用原核表达系统实现了对CT抗原NY-ESO-1的可溶性表达。

关键词： NY-ESO-1 克隆与表达亲和纯化 Western印迹

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