检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2006年第4期46卷 635-638,I0003页

作者：朱虹何君荆红波王争强端青姜永强苏裕心军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

对四川资阳地区病猪标本、尸检肝标本和血清标本进行病原菌分离,得到10株分离菌。经菌落形态和菌体形态观察、生化鉴定,证明其中3株为猪链球菌2型(SS2)。通过对3株SS2胞外因子基因、溶菌酶释放蛋白基因、荚膜多糖基因和16S rRNA基因进行... 详细信息

对四川资阳地区病猪标本、尸检肝标本和血清标本进行病原菌分离,得到10株分离菌。经菌落形态和菌体形态观察、生化鉴定,证明其中3株为猪链球菌2型(SS2)。通过对3株SS2胞外因子基因、溶菌酶释放蛋白基因、荚膜多糖基因和16S rRNA基因进行PCR扩增,结果分别在626bp8、85bp4、87bp和297bp处出现目的条带。为进一步了解分离的SS2菌株的特性,使用VITEK GPS-107药敏卡进行药敏试验,结果表明分离菌对青霉素-G、红霉素、万古霉素等多种抗生素敏感。分离菌感染Balb/c小鼠可引起动物死亡,并出现胃肠肿胀、嘴部青紫以及皮下紫斑等症状,与患者症状相似,小鼠脏器压片经革兰氏染色镜下观察可见阳性球菌。

关键词：猪链球菌2型生化鉴定 PCR扩增药敏试验动物试验

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LFn-MAGE3融合蛋白表达及生物学功能初步研究

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第2期22卷 181-184页

作者：孔毅荣付玲郭强于婷于长明陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:表达融合蛋白LFn-MAGE3,探讨无毒炭疽毒素用于治疗肿瘤的可能性。方法:将LFn的编码序列导入PET21a表达载体中,构建LFn融合表达载体PET21a-LFn。将全长MAGE-3基因插LFn融合表达载体中,构建了PET21a-LFn-MAGE3融合蛋白表达载体。将... 详细信息

目的:表达融合蛋白LFn-MAGE3,探讨无毒炭疽毒素用于治疗肿瘤的可能性。方法:将LFn的编码序列导入PET21a表达载体中,构建LFn融合表达载体PET21a-LFn。将全长MAGE-3基因插LFn融合表达载体中,构建了PET21a-LFn-MAGE3融合蛋白表达载体。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达LFn-MAGE3融合蛋白。表达产物用QsepharoseFF离子交换柱和PheHP疏水柱进行纯化。LF毒性抑制实验和细胞免疫荧光实验检测融合蛋白的生物学活性。结果:融合蛋白LFn-MAGE3在大肠杆菌BL21a获得胞内可溶性表达,经纯化后,获得一定纯度的LFn-MAGE3融合蛋白。细胞免疫荧光实验显示LFn-MAGE3能在PA(炭疽保护性抗原)协同下高效进入巨噬细胞。结论:表达纯化获得的LFn-MAGE3融合蛋白能在PA协助高效进入细胞,可以用于下一步的肿瘤免疫治疗的动物实验中。

关键词： MAGE3 炭疽毒素融合表达肿瘤免疫治疗

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布鲁杆菌基因工程疫苗免疫保护效率的初步观察

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中国地方病学杂志 2006年第1期25卷 46-49页

作者：高永辉张松乐曾政罗德炎张良艳董梅王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室北京100071

目的比较布鲁杆菌6种抗原表位所获得的基因工程疫苗的免疫保护效率。方法布鲁杆菌核糖体蛋白L7/L12、胞质蛋白P39、细胞表面蛋白BCSP31、二氧四氢喋啶合成酶BLS、16.5×103的外膜蛋白PAL和翻译起始因子IF3的基因片段与真核表达载体p... 详细信息

目的比较布鲁杆菌6种抗原表位所获得的基因工程疫苗的免疫保护效率。方法布鲁杆菌核糖体蛋白L7/L12、胞质蛋白P39、细胞表面蛋白BCSP31、二氧四氢喋啶合成酶BLS、16.5×103的外膜蛋白PAL和翻译起始因子IF3的基因片段与真核表达载体pcDNA3.1(+)构建的核酸疫苗及上述6条片段转入pET32a(+)后诱导表达的的重组蛋白免疫小鼠,3次免疫后进行攻毒实验,对其免疫保护效率进行初步观察。结果L7/L12和BLS的重组蛋白疫苗和核酸疫苗都产生了非常显著的保护作用,P39的核酸疫苗、IF3和BCSP31的重组蛋白疫苗也产生了非常显著的保护作用,其中L7/L12核酸疫苗的保护效率最高。结论初步认为布鲁杆菌的优势抗原表位所获得的基因工程疫苗可产生一定的抗布鲁杆菌作用,可作为未来布鲁杆菌新型疫苗的候选者,有进一步研究的价值。

关键词：布鲁杆菌菌苗基因疫苗,DNA 核酸

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应用凝血反应检测杀鼠灵抗药性褐家鼠的可行性研究

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兽类学报 2006年第2期26卷 176-182页

作者：孙毅郭天宇董天义赵彤言 100071 北京军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室2004DAV00214 军事医学科学院微生物流行病研究所

为探讨凝血反应在鼠类抗药性检测中的应用前景,以褐家鼠为对象,在摄食实验基础上筛选抗药性褐家鼠,并在区分剂量12mg/kg作用下分析抗药性和敏感性褐家鼠的凝血能力的变化情况。结果显示,抗药性个体在区分剂量作用下,凝血酶活动度虽有所... 详细信息

为探讨凝血反应在鼠类抗药性检测中的应用前景,以褐家鼠为对象,在摄食实验基础上筛选抗药性褐家鼠,并在区分剂量12mg/kg作用下分析抗药性和敏感性褐家鼠的凝血能力的变化情况。结果显示,抗药性个体在区分剂量作用下,凝血酶活动度虽有所下降,下降幅度可达正常水平的17%,但在2～3d内可恢复到正常凝血水平;而敏感性褐家鼠的凝血酶下降到很低,且在随后不能恢复。另外,对褐家鼠凝血酶活动度的分布及其存活的关系研究也提示,区分剂量可促使凝血酶活动度的种群分布从单峰型向双峰型分化,其中敏感个体的凝血酶活动度在0～3.16之间,而抗药性个体则在17～100之间。并发现用药4d后的凝血酶活动度基本上可代表其未来的存活率,这提示了凝血反应与摄食实验结果的一致性。因此,以施药后4d凝血酶活动度PCA=17或INR=5.0作为阈值来区分抗药性和敏感性个体的凝血反应状况,进行家栖鼠抗药性测定是可行的。

关键词：凝血反应褐家鼠抗药性杀鼠灵检测

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褐家鼠不同脏器中汉坦病毒自然感染的差异

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中国病毒学 2006年第2期21卷 136-141页

作者：江佳富吴晓明左曙青张泮河郭天宇曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为了解野外褐家鼠不同脏器中自然感染汉坦病毒状况和带毒量的差异,选取经检测鼠肺组织中HV-RNA并呈阳性的鼠个体20只,采用巢式RT-PCR检测这些个体心、肝、肺、脾和肾5种共85份脏器中的HV,对阳性标本重复扩增后直接测序,用DNASTAR软件对... 详细信息

为了解野外褐家鼠不同脏器中自然感染汉坦病毒状况和带毒量的差异,选取经检测鼠肺组织中HV-RNA并呈阳性的鼠个体20只,采用巢式RT-PCR检测这些个体心、肝、肺、脾和肾5种共85份脏器中的HV,对阳性标本重复扩增后直接测序,用DNASTAR软件对获得序列进行比较分析。另外,针对汉城型汉坦病毒株Z37-M片段全序列设计定量PCR特异性引物,采用SYBRGreen实时定量PCR法,检测上述85份不同脏器中HV带毒量情况与相对差异。结果显示:RT-PCR对除肺脏之外的其它脏器中HV-RNA的检出率较低(11/65),不同个体肺组织来源的HV-M片段变异较多,其中A→G碱基变异类型占1/3强。从11份除肺之外的脏器中扩增到的HV-M基因序列和其对应同一褐家鼠个体肺脏HV-M片段相比,其碱基差异不大;一肺脏来源的与该个体其他脏器来源的HV-M片段两个位点存在A→G差异,并分别导致两位置氨基酸差异。定量检测结果显示:褐家鼠不同脏器中HV-RNA检出率差异有统计学意义(χ2=16.10,P=0.003),总体阳性率大小为肺>肝>肾>心>脾;肺脏中病毒的分布比其他脏器更为普遍。带毒量也以肺脏中最高,其它脏器之间HV带毒量没有显著性差异(χ2=8.79,P=0.088)。这些结果说明:褐家鼠肺脏是HV侵犯与贮存的主要靶器官,HV基因在该器官中可能更易发生变异。这对进一步了解HV在宿主体内的贮存规律、传播及其在流行病学上的意义将有所裨益。

关键词：汉坦病毒褐家鼠实时定量PCR RT-PCR

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利用重组工程技术标记鼠疫菌rpoS基因

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中国生物工程杂志 2006年第5期26卷 27-32页

作者：张建山陈泽良宋亚军郭兆彪王津王红霞翟俊辉杨瑞馥军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:为便于研究鼠疫菌基因及其产物的功能,利用重组工程技术,建立一种表位标记细菌染色体基因的方法,以分析基因的表达规律。方法:将标签序列合成于引物中,通过融合PCR法将标签序列与抗性筛选基因连接,克隆到pBluescript载体,获得模板... 详细信息

目的:为便于研究鼠疫菌基因及其产物的功能,利用重组工程技术,建立一种表位标记细菌染色体基因的方法,以分析基因的表达规律。方法:将标签序列合成于引物中,通过融合PCR法将标签序列与抗性筛选基因连接,克隆到pBluescript载体,获得模板载体pBSMH。设计与待标记基因末端及其下游同源的引物,从模板载体上扩增标签与抗性基因的融合模块,获得两端带同源区的PCR产物,电击转化鼠疫菌感受态细胞。在λRed重组系统的辅助下,标签和抗性基因重组到目的基因的下游,得到表位标签与目的基因C末端融合的重组子。利用针对表位标签的单克隆抗体进行Westernblot分析,验证C末端标记目的蛋白的表达。结果:成功构建了组氨酸标签与抗性基因融合的质粒,以该质粒作为模板,扩增标记标签盒,对鼠疫菌的rpoS基因进行了标记,利用针对组氨酸标签的抗体能够检测到rpoS基因的表达。结论:基于重组工程的基因标记技术可以为基因功能研究提供一个有价值的研究手段。

关键词：融合PCR λRed重组系统基因标记 Western blot

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登革2型病毒中国分离株感染性全长cDNA克隆的构建与鉴定

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军事医学科学院院刊 2006年第2期30卷 116-121页

作者：朱武洋陈水平秦成峰于曼姜涛邓永强秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:构建登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的感染性全长cDNA克隆。方法:根据我室测定的DEN2-43株病毒全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR技术扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pW SK29中构建该病毒株的全长cDNA... 详细信息

目的:构建登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的感染性全长cDNA克隆。方法:根据我室测定的DEN2-43株病毒全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR技术扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pW SK29中构建该病毒株的全长cDNA克隆。将此克隆体外转录后,通过电穿孔导入宿主细胞获得恢复病毒。结果与结论:构建的DEN2-43基因组全长cDNA克隆具有感染性,所获得的恢复病毒具有与原型病毒类似的生物学性质及小鼠乳鼠神经毒力,且可稳定传代。该感染性克隆的构建为深入探讨登革病毒的致病机制及研制新型登革疫苗奠定了基础。

关键词：登革病毒感染性全长cDNA克隆恢复病毒

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中国登革2型病毒反向遗传系统的构建与鉴定

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科学通报 2006年第15期51卷 1764-1770页

作者：朱武洋陈水平秦成峰于曼姜涛邓永强秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为构建登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的反向遗传系统,根据已测定的DEN2-43全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pWSK29中构建该病毒株的全长cDNA克隆.将此克隆体外转录后,经电... 详细信息

为构建登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的反向遗传系统,根据已测定的DEN2-43全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pWSK29中构建该病毒株的全长cDNA克隆.将此克隆体外转录后,经电穿孔导入宿主细胞获得恢复病毒.结果表明,获得的基因组全长cDNA克隆具有感染性,所获得的恢复病毒具有与原型病毒类似的生物学性质及乳鼠神经毒力,且可稳定传代.该反向遗传系统的构建为深入探讨登革病毒的致病机理及新型疫苗的研制奠定了基础.

关键词：登革病毒反向遗传系统恢复病毒

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mCD1.1分子的真核表达及其对NKT细胞的刺激作用

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第5期22卷 579-581页

作者：易绍琼彭虹王华王岚陈洁赵光宇高杰英军事医学科学院微生物流行病研究所病源微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:获得稳定表达mCD1.1分子的细胞系,研究其对肝脏和肠系膜淋巴结淋巴细胞的刺激作用。方法:分离C57小鼠的小肠上皮细胞,制备总RNA,通过RTPCR扩增mCD1.1编码区基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1。将所得重组质粒pcDNA3.1mCD1.1通... 详细信息

目的:获得稳定表达mCD1.1分子的细胞系,研究其对肝脏和肠系膜淋巴结淋巴细胞的刺激作用。方法:分离C57小鼠的小肠上皮细胞,制备总RNA,通过RTPCR扩增mCD1.1编码区基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1。将所得重组质粒pcDNA3.1mCD1.1通过电穿孔法转至CHO细胞中,在含G418的的选择性培养基中筛选抗性克隆,利用RTPCR和流式细胞术对挑取的克隆进行mCD1.1表达的鉴定。将表达mCD1.1的细胞与新分离的肝脏和肠系膜淋巴结(MLN)的淋巴细胞进行共培养,并用丝裂霉素C抑制CHO细胞的增殖,然后利用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况;另外将表达mCD1.1的CHO细胞与淋巴细胞共培养后,分离淋巴细胞,然后用PEantiNK1.1和CychromeantiCD3对其进行标记,利用流式细胞术检测CD3细胞中NK1.1阳性细胞的比例。结果:通过RTPCR,得到mCD1.1的编码区基因,序列与预期相符;通过多次鉴定,证明筛选得到的细胞克隆可稳定表达mCD1.1;CHOmCD1.1细胞与新分离的淋巴细胞共培养,在有无LPS存在的情况下,均能刺激淋巴细胞发生增殖,并使CD3+细胞中NK1.1阳性细胞的比例增加。结论:表达mCD1.1的CHO细胞能够刺激NKT细胞增殖。

关键词： mCD1.1 NKT细胞细胞增殖

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HIV-1拉米夫定(3TC)耐药毒株的体外诱导培育和鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第3期26卷 220-223页

作者：李珏鲍作义刘思扬庄道民李韩平刘永健李林杨坤李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的通过体外传代培养,将我国HIV1药物敏感毒株诱导为拉米夫定耐药毒株。方法在MT4细胞中国HIV1B′亚型CNHN24毒株培养系统中加入0.008μmolL拉米夫定,逐渐增加药物浓度进行传代和培养,每隔3～5代测定半数抑制浓度(IC50),并用RTPCR法扩... 详细信息

目的通过体外传代培养,将我国HIV1药物敏感毒株诱导为拉米夫定耐药毒株。方法在MT4细胞中国HIV1B′亚型CNHN24毒株培养系统中加入0.008μmolL拉米夫定,逐渐增加药物浓度进行传代和培养,每隔3～5代测定半数抑制浓度(IC50),并用RTPCR法扩增pol区基因,进行基因型耐药性分析。将表型和基因型耐药结果与敏感株进行比较。结果培养6代后,IC50由野生毒株的0.018μmolL逐渐提高到0.15μmolL;第7代时,IC50突然增加到大于2048μmolL;pol区的184位氨基酸由甲硫氨酸(M)突变为异亮氨酸(I)。去除药物继续培养5代,IC50仍维持>2048μmolL,pol区184位氨基酸仍为异亮氨酸,没有发生回复突变。结论在国内首次用中国HIV1毒株诱导培育出可能稳定传代的3TC耐药株,可用于HIV1耐药性的研究和HIV1药物的药效学评价。该耐药株已申请国家专利。

关键词：体外诱导 HIV-1 CNI-IN2A-毒株拉米夫定耐药株

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