检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学科学院院刊 2006年第6期30卷 534-536页

作者：杨慧盈王慧包士中史晶荫俊军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：建立梭菌属神经毒素基因快速鉴定和分型的PCR方法。方法：根据GenBank提供的肉毒毒素及破伤风毒素基因序列，综合应用多种生物学软件与在线分析平台，设计特异性及通用检测引物，对各型梭菌属毒素基因进行PCR扩增，验证扩增反应... 详细信息

目的：建立梭菌属神经毒素基因快速鉴定和分型的PCR方法。方法：根据GenBank提供的肉毒毒素及破伤风毒素基因序列，综合应用多种生物学软件与在线分析平台，设计特异性及通用检测引物，对各型梭菌属毒素基因进行PCR扩增，验证扩增反应的特异性、通用性、灵敏度及重复性。结果与结论：设计了针对A，B，E，F型肉毒毒素、破伤风毒素基因轻链毒性活性区的5对特异引物，以及重链跨膜区和结合区的一对通用引物（BonAB—P01／P02，BonB-P01／P02，BonE-P01／P02，BonF-P01／P02，TET-P01／P02，TY-P01／P02）。对各型神经毒素进行特异性扩增并在型间进行交叉实验，检测特异性良好，没有交叉反应；通用扩增结果显示均得到1100bp大小的条带。目前此检测方法灵敏度可达到（1～3）×10^3个菌。该检测方法特异性强，灵敏度高，可以用于梭菌属神经毒素基因的快速筛查与鉴定分型。

关键词：梭菌属神经毒素 PCR检测特异性灵敏度

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实时RT-PCR法检测感染小鼠不同组织标本中的委内瑞拉马脑炎病毒

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中国人兽共患病学报 2006年第11期22卷 1035-1038页

作者：邓永强姜涛于曼陈水平秦成峰刘伯华祝庆余秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的为委内瑞拉马脑炎病毒所致疾病的早期诊断和流行病学研究提供技术支持。方法建立了委内瑞拉马脑炎病毒特异、敏感和快速的实时RT-PCR法,并对委内瑞拉马脑炎病毒感染昆明小鼠的不同组织标本中的病毒载量进行了定量检测。结果本研究... 详细信息

目的为委内瑞拉马脑炎病毒所致疾病的早期诊断和流行病学研究提供技术支持。方法建立了委内瑞拉马脑炎病毒特异、敏感和快速的实时RT-PCR法,并对委内瑞拉马脑炎病毒感染昆明小鼠的不同组织标本中的病毒载量进行了定量检测。结果本研究建立的实时RT-PCR法敏感(10TCID50/ml)、特异(对其它甲病毒成员,如东部马脑炎病毒和西部马脑炎病毒检测为阴性)。该方法可从委内瑞拉马脑炎病毒感染小鼠后第1d的血液、脾脏、脑组织中检测到不同含量的病毒核酸,而在感染后第3d仅从脾脏和脑组织中检测到病毒核酸。结论实时RT-PCR法不仅是一种敏感、准确的检测方法,可用来了解病毒感染量与疾病严重程度的关系和评价病毒病疫苗的免疫效果,而且也为VEEV疾病的临床诊断和流行病学监测提供工具。

关键词：委内瑞拉马脑炎病毒实时RT—PCR

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两种Q热疫苗的脂肪酸分析

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中国人兽共患病学报 2006年第11期22卷 1009-1012页

作者：孙长俭陈梅玲温博海刘海洪杨晓牛东升军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的比较分析灭活贝氏柯克斯体全细胞(WC)和氯仿-甲醇提取WC的残存组分(CMR)Q热疫苗的脂肪酸种类及含量差异。方法制备WC和CMR,采用高压气相色谱检测WC和CMR脂肪酸种类及相对含量。结果WC经氯仿-甲醇回馏处理后得到的不溶性组分CMR。气... 详细信息

目的比较分析灭活贝氏柯克斯体全细胞(WC)和氯仿-甲醇提取WC的残存组分(CMR)Q热疫苗的脂肪酸种类及含量差异。方法制备WC和CMR,采用高压气相色谱检测WC和CMR脂肪酸种类及相对含量。结果WC经氯仿-甲醇回馏处理后得到的不溶性组分CMR。气相色谱分析发现CMR较WC减少了11种脂肪酸,其中4种为不饱和脂肪酸,4种为支链脂肪酸,70%为C原子数≥18的较长链的脂肪酸。另外,两种疫苗的支链脂肪酸与直链脂肪酸、不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比值也明显不同。结论灭活贝氏柯克斯体疫苗经氯仿-甲醇提取后,除去了它的多种脂肪酸或减少某些脂肪酸含量,这些脂肪酸的消除与减少可能是CMR疫苗诱导的局部和全身不良反应消失或减轻的主要原因。

关键词：贝氏柯克斯体疫苗脂肪酸

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西尼罗病毒外膜蛋白的表达及其抗原性鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第12期26卷 1102-1103页

作者：张久松张泮河高玉然刘一萍司炳银曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

西尼罗病毒（West Nile virus, WNV）属黄病毒科、黄病毒属，血清学分类与乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）同属JEV复合组。该病毒主要引起人和哺乳动物的西尼罗热和西尼罗脑炎，是近年来倍受关注的新发虫媒传染病之一... 详细信息

西尼罗病毒（West Nile virus, WNV）属黄病毒科、黄病毒属，血清学分类与乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）同属JEV复合组。该病毒主要引起人和哺乳动物的西尼罗热和西尼罗脑炎，是近年来倍受关注的新发虫媒传染病之一。WNV基因组核酸为单股正链RNA，由约11kb核苷酸组成。

关键词：病毒外膜蛋白抗原性鉴定单股正链RNA 乙型脑炎病毒西尼罗病毒血清学分类西尼罗脑炎虫媒传染病

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新分离呼肠病毒基因组片段S1全长cDNA克隆及其序列分析

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军事医学科学院院刊 2006年第1期30卷 15-17,21页

作者：宋立华苏裕心何君朱虹黄如统端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：克隆测序新分离呼肠病毒的S1全长基因组片段，并对其进行序列分析。方法：从接种呼肠病毒的L929细胞中提取病毒基因组，用改进的单引物扩增技术获得S1片段的全长cDNA克隆井测定其全序列。结果：新分离呼肠病毒的S1片段长1437bp，... 详细信息

目的：克隆测序新分离呼肠病毒的S1全长基因组片段，并对其进行序列分析。方法：从接种呼肠病毒的L929细胞中提取病毒基因组，用改进的单引物扩增技术获得S1片段的全长cDNA克隆井测定其全序列。结果：新分离呼肠病毒的S1片段长1437bp，其核苷酸序列与已知的1—3型呼肠病毒标准株的同源性分另1为59％，61％和48％；推测的cr1序列与标准株的同源性分别为52％，60％和26％。结论：新分离呼肠病毒的S1片段与目前已知的分离株相比有很大差异，有可能是2型呼肠病毒的一个独立分支。

关键词：呼肠病毒 S1片段序列分析

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我国部分林区鼠中莱姆病螺旋体的分子流行病学调查研究

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中国人兽共患病学报 2006年第9期22卷 817-820页

作者：褚宸一何静赵秋敏张泮河吴晓明蒋宝贵高燕李红梅黄海楠詹琳曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的了解我国部分林区鼠中莱姆病螺旋体感染及其基因分型情况。方法应用巢式PCR扩增鼠中莱姆病螺旋体5S-23S rRNA间隔区片段,对阳性产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析。结果共检测鼠8属19种455只,感染莱姆病螺旋体的有4属8种26只... 详细信息

目的了解我国部分林区鼠中莱姆病螺旋体感染及其基因分型情况。方法应用巢式PCR扩增鼠中莱姆病螺旋体5S-23S rRNA间隔区片段,对阳性产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析。结果共检测鼠8属19种455只,感染莱姆病螺旋体的有4属8种26只,感染率为5.71%。内蒙古、黑龙江、浙江、贵州林区鼠的感染率分别为3.45%、4.84%、8.00%、7.14%;其中东北林区(包括内蒙古和黑龙江)棕背鼠平的感染率为9.09%;浙江林区社鼠的感染率为9.26%;未发现新疆林区鼠感染莱姆病螺旋体。RFLP分析结果显示内蒙古、黑龙江林区鼠中莱姆病螺旋体均为***基因型,而浙江、贵州林区鼠感染的莱姆病螺旋体包括***和***两种基因型。结论东北林区及浙江林区以***基因型为主,棕背鼠平、社鼠可能分别是两地林区莱姆病螺旋体的主要储存宿主。

关键词：莱姆病螺旋体基因型鼠

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重叠PCR合成蓖麻毒素B链基因及其在大肠杆菌中表达和抗原性分析

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军事医学科学院院刊 2006年第1期30卷 29-33页

作者：王俊虹康琳高姗王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:表达蓖麻毒素B(RTB)链蛋白,为制备RTB特异性抗体奠定基础。方法:采用密码子优化软件对RTB编码基因序列重新优化设计,以18条长片段寡核苷酸引物经两步重叠PCR合成RTB基因片段,并在RTB的C端引入6×H is标签序列,插入表达载体pBV2... 详细信息

目的:表达蓖麻毒素B(RTB)链蛋白,为制备RTB特异性抗体奠定基础。方法:采用密码子优化软件对RTB编码基因序列重新优化设计,以18条长片段寡核苷酸引物经两步重叠PCR合成RTB基因片段,并在RTB的C端引入6×H is标签序列,插入表达载体pBV220,转化***5α获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用W estern印迹和间接ELISA方法鉴定重组RTB蛋白的抗原性。结果:表达工程菌株***5α在42℃经诱导3 h后获得包涵体形式表达的目的蛋白,约占菌体总蛋白的65.48%,SDS-PAGE分析显示表达的蛋白区带与RTB相对分子质量相符,为29×103左右。表达产物经N i-NTA亲和层析法一步纯化,蛋白纯度达96.21%,并可得到约25 mg/L重组RTB蛋白。结论:在国内首次应用重叠PCR合成RTB基因并实现高表达,纯化重组RTB蛋白可被抗天然蓖麻毒素多抗所识别,为制备特异性抗体及建立快速检测方法打下了基础。

关键词：蓖麻毒素B链克隆与表达亲和纯化抗原性

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我国北方部分地区土拉弗菌感染宿主动物的分子流行病学研究

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军事医学科学院院刊 2006年第2期30卷 131-134页

作者：张芳刘玮何君端青吴晓明赵秋敏张泮河杨红曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:了解我国北方部分地区宿主动物感染土拉弗菌状况和基因型别。方法:鼠夹诱捕鼠,从鼠脾组织提取DNA,应用巢式PCR检测土拉弗菌,计算并比较各地区及各鼠种阳性率。阳性标本用型特异性引物及短串联重复序列(SSTR9、SSTR16)引物扩增两区... 详细信息

目的:了解我国北方部分地区宿主动物感染土拉弗菌状况和基因型别。方法:鼠夹诱捕鼠,从鼠脾组织提取DNA,应用巢式PCR检测土拉弗菌,计算并比较各地区及各鼠种阳性率。阳性标本用型特异性引物及短串联重复序列(SSTR9、SSTR16)引物扩增两区域并测序,用C lustalX(5.0)和DNA C lub软件对序列进行比较分析。结果:共捕获鼠421只,分属14种鼠种,其中7个鼠种20份标本PCR检测阳性,总阳性率为4.75%。吉林、新疆、黑龙江、内蒙古和浙江的阳性率分别为11.65%,10.00%,6.54%,1.76%和0%。地区间阳性率差异显著(χ2=20.90,P=0.0003);不同鼠种间阳性率未见差异(χ2=11.82,P=0.066)。对20份扩增阳性标本进行型特异性扩增及SSTR9、SSTR16序列测定并对比分析,结果显示均为土拉弗菌B亚型,但型内差别较大,标本及菌株相互比较均显示基因多态性程度高且地区间有交叉。结论:我国北方部分地区可能依然存在B亚型土拉弗菌型感染(宿主动物)情况,且其基因型内差异较大。

关键词：土拉弗菌感染短串联重复序列巢式PCR 啮齿类动物分子流行病学

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鹦鹉热衣原体HSP60基因克隆及其表达产物抗原性的实验研究

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中国人兽共患病学报 2006年第3期22卷 209-211页

作者：裴杰萍朱虹何君檀华张美玲端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的验证新获得的鹦鹉热衣原体HSP60基因在***中高效表达的产物是否具有足够的抗原活性,为进一步研究其在鹦鹉热衣原体感染检测上的应用奠定基础。方法根据GenBank鹦鹉热衣原体Hsp60基因序列X51404,设计一对特异性引物,扩增了鹦鹉热衣原... 详细信息

目的验证新获得的鹦鹉热衣原体HSP60基因在***中高效表达的产物是否具有足够的抗原活性,为进一步研究其在鹦鹉热衣原体感染检测上的应用奠定基础。方法根据GenBank鹦鹉热衣原体Hsp60基因序列X51404,设计一对特异性引物,扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,克隆入pET32a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导获得高效表达。结果扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,表达产物分子量约为68kD,经Western blotting和胶体金免疫层析技术检测,表明表达产物具有较好的抗原性。结论扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,并对其表达产物的抗原性进行免疫印记分析和免疫层析初步检测,表明具有较好的抗原性,为进一步研究其在鹦鹉热衣原体感染检测上的意义打下了基础。

关键词：鹦鹉热衣原体 HSP60 克隆

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应用两种基因组快速扩增方法进行病毒芯片杂交鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2006年第9期22卷 750-754页

作者：康晓平刘洪杨银辉胡玉洋朱晓光祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为了摸索均衡的病毒基因组扩增方法,建立高通量的病毒检测基因芯片技术平台,本研究以甲病毒属的辛德比斯病毒作为检测模型,分别以随机PCR扩增法和MDA(multipledisplacementamplification)扩增法扩增病毒基因组,并以两种扩增产物作为模板... 详细信息

为了摸索均衡的病毒基因组扩增方法,建立高通量的病毒检测基因芯片技术平台,本研究以甲病毒属的辛德比斯病毒作为检测模型,分别以随机PCR扩增法和MDA(multipledisplacementamplification)扩增法扩增病毒基因组,并以两种扩增产物作为模板,扩增辛德比斯病毒的特异基因片段以初步验证基因组扩增的均衡性;然后将两种基因组扩增产物标记荧光染料后与基因芯片进行杂交;结果表明从两种基因组扩增产物中正确扩增出了辛德比斯的特定基因片段,作为探针可与基因芯片上的靶标基因特异性结合;基因组扩增产物与基因芯片进行杂交,可成功检测到甲病毒属的特异性信号,充分说明随机PCR扩增法和MDA扩增法扩增病毒基因组可用于病毒性病原体的基因芯片检测.

关键词：病毒基因组扩增芯片检测

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