检索结果-内蒙古大学图书馆

寄生虫与医学昆虫学报 2019年第1期26卷 41-46页

作者：杜鹃邓耀华张子龙赵彤言李深伟田桢干上海国际旅行卫生保健中心上海200335 上海浦东国际机场海关上海201202 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

使用传统形态学分类方法进行干制标本的物种鉴定通常比较困难。本文按照《国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程》对上海口岸截获的粉蝇属干制标本进行DNA条形码研究。经BOLD System v4比对,结果显示所得序列分别属于5个种:粗野粉... 详细信息

使用传统形态学分类方法进行干制标本的物种鉴定通常比较困难。本文按照《国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程》对上海口岸截获的粉蝇属干制标本进行DNA条形码研究。经BOLD System v4比对,结果显示所得序列分别属于5个种:粗野粉蝇Pollenia rudis、伪粗野粉蝇***、游荡粉蝇***、匈牙利粉蝇***和Pollenia sp.。引入1条COⅠ序列作为外群对全部序列构建系统发育树(NJ树),结果显示不同物种各自聚为一支。因此,COⅠ条形码技术可以弥补传统形态学分类方法的不足,提高蝇类干制标本鉴定的成功率。

关键词： COⅠ基因 DNA条形码粉蝇属国境口岸

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寨卡病毒蛋白结构与功能研究进展

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微生物学通报 2018年第8期45卷 1787-1793页

作者：程梦丽李晓峰秦成峰安徽医科大学安徽合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

2015年以来,南美暴发大规模寨卡疫情,因其与新生儿小头症等严重神经发育疾病密切相关,被世界卫生组织列为国际关注的突发公共卫生事件。与其他虫媒黄病毒类似,寨卡病毒为单股正链RNA病毒,其基因组编码的3种结构蛋白构成病毒颗粒,7种非... 详细信息

2015年以来,南美暴发大规模寨卡疫情,因其与新生儿小头症等严重神经发育疾病密切相关,被世界卫生组织列为国际关注的突发公共卫生事件。与其他虫媒黄病毒类似,寨卡病毒为单股正链RNA病毒,其基因组编码的3种结构蛋白构成病毒颗粒,7种非结构蛋白参与病毒复制生活周期的调控。在全球科学家的共同努力下,寨卡病毒蛋白结构与功能的研究取得了突破性进展,极大地促进研究者对病毒复制与致病机制的认识,也为疫苗和药物研发提供了重要科学依据和潜在靶标。本文将对寨卡病毒蛋白的结构与功能的最新研究进展作一综述,并讨论当前面临的挑战和机遇。

关键词：寨卡病毒结构蛋白非结构蛋白结构

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TFPR1通过激活树突状细胞并促进其成熟发挥佐剂功能

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军事医学 2018年第2期42卷 101-104页

作者：李悄王月鹏朱青宁秀哲孙维来周育森寇志华安徽医科大学北京微生物流行病研究所合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究树突状细胞(DC)在重组蛋白TFPR1发挥佐剂功能中的作用。方法在无菌条件下取4~5周龄雄性BALB/c小鼠的骨髓细胞,小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rm GM-CSF)与重组白介素4(rm IL-4)诱导分化6 d后,加入TFPR1共孵育24 h,并以LP... 详细信息

目的研究树突状细胞(DC)在重组蛋白TFPR1发挥佐剂功能中的作用。方法在无菌条件下取4~5周龄雄性BALB/c小鼠的骨髓细胞,小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rm GM-CSF)与重组白介素4(rm IL-4)诱导分化6 d后,加入TFPR1共孵育24 h,并以LPS处理为阳性对照、PBS为阴性对照,普通光学显微镜观察DC形态变化,罗丹明标记鬼笔环肽(TRITC Phalloidin)和DAPI共染色后,激光共聚焦显微镜观察细胞肌动蛋白和细胞核的分布情况,流式细胞术检测细胞表面CD40、CD80、CD86、MHCⅡ的表达水平,ELISA检测细胞培养上清中的细胞因子。结果在普通光镜和共聚焦显微镜下,加入TFPR1的DC与加入PBS的阴性对照DC相比具有显著的不同,而和加入LPS的阳性对照相似:光镜下发现大多数TFPR1处理的DC伪足变短直至消失,并变成圆形、悬浮于培养基中;激光共聚焦显微镜观察发现TFPR1处理的DC肌动蛋白由分布于细胞两极转至均匀分布于细胞膜上,从形态学上表明TFPR1可促进DC成熟;流式细胞术检测到TFPR1处理的DC表面CD40、CD80、CD86、MHCⅡ的表达量上调,进一步证明TFPR1具有促进DC成熟的作用。ELISA检测发现TFPR1处理的DC可产生高水平的IL-6、IL-8、TNF-α等细胞因子。结论 TFPR1不但能促进DC成熟,且能激活DC产生细胞因子,说明DC在TFPR1的佐剂功能中发挥重要作用。

关键词： TFPR1 树突状细胞佐剂作用机制

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多耐药B族链球菌基因组序列分析

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军事医学 2019年第1期43卷 63-67页

作者：王益青朱亮孔德聪高薇姚开虎董方宋文琪郑玉玲姜永强刘钢军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院感染内科儿科重大疾病研究教育部重点实验室北京100045 首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所北京100045 首都医科大学附属北京儿童医院检验科北京100045

目的研究中国B族链球菌种群结构并鉴定菌株携带的耐药基因。方法从患儿脑脊液样本中分离B族链球菌临床株,高通量测序获得菌株的全基因组序列。使用分子分型方法对菌株进行血清学分型和MLST分型;使用核心基因组系统演化分析构建种群结构... 详细信息

目的研究中国B族链球菌种群结构并鉴定菌株携带的耐药基因。方法从患儿脑脊液样本中分离B族链球菌临床株,高通量测序获得菌株的全基因组序列。使用分子分型方法对菌株进行血清学分型和MLST分型;使用核心基因组系统演化分析构建种群结构;通过查询耐药数据库鉴定基因组中的耐药基因;序列比对分析耐药基因元件结构;药敏试验测试菌株耐药表型。结果该研究共收集102株B族链球菌基因组,划分为5个克隆群,其中50株B族链球菌携带多耐药基因元件。结论新生儿B族链球菌感染主要由ST17型菌株引起;携带多耐药基因整合接合元件的B族链球菌在中国广泛分布,在临床中应对感染要控制抗生素的使用。

关键词： B族链球菌新生儿感染高通量测序抗生素耐药基因整合接合元件

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鼠疫历史疫情的考古微生物学研究进展

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中国人兽共患病学报 2018年第12期34卷 1142-1146页

作者：宋凯祁芝珍杨瑞馥宋亚军病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071 青海省地方病预防控制所西宁811062 青海省鼠疫防控及研究重点实验室西宁811062

鼠疫是由鼠疫耶尔森氏菌(简称鼠疫菌)引发的烈性传染病,人类历史上曾发生3次大规模的鼠疫大流行。近年来,考古微生物学得到长足发展,使得研究人员可以对历史上的鼠疫疫情进行探索,为鼠疫的起源、传播以及鼠疫菌的进化等关键问题提供更... 详细信息

鼠疫是由鼠疫耶尔森氏菌(简称鼠疫菌)引发的烈性传染病,人类历史上曾发生3次大规模的鼠疫大流行。近年来,考古微生物学得到长足发展,使得研究人员可以对历史上的鼠疫疫情进行探索,为鼠疫的起源、传播以及鼠疫菌的进化等关键问题提供更为深刻的理解。本文就关于考古微生物学方法在古代鼠疫疫情研究领域取得的进展进行简单综述:包括基于PCR、蛋白质分析以及基因组序列测定在内的考古微生物学研究技术方法;基于以上技术确认查士丁尼瘟疫和黑死病的病原体为鼠疫菌;新石器时代晚期至青铜时代就已经存在人类感染鼠疫菌的病例;通过分子钟分析将鼠疫菌的物种形成时间确定为5000-7500年前。考古微生物学方法不仅可以继续推进鼠疫和鼠疫菌的相关研究,也将为其他历史传染病的研究提供有益借鉴。

关键词：鼠疫鼠疫菌考古微生物学传播毒力因子

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贝氏柯克斯体九里株Ⅱ相突变体的克隆与鉴定

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生物技术通讯 2019年第2期30卷 170-174页

作者：何泽民孙志会于永慧罗声栋王益清王景林姜永强宋立华病原微生物生物安全国家重点实验室军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071 解放军总医院第五医学中心临床研究管理中心北京100039

目的:克隆分离国内贝氏柯克斯体九里株Ⅱ相突变体,并利用基因组测序方法进行鉴定,为贝氏柯克斯体研究提供参考依据。方法:用半固体平板法克隆分离贝氏柯克斯体,对随机选择的克隆株CB01进行全基因组测序分析,将测序结果与国外贝氏柯克斯... 详细信息

目的:克隆分离国内贝氏柯克斯体九里株Ⅱ相突变体,并利用基因组测序方法进行鉴定,为贝氏柯克斯体研究提供参考依据。方法:用半固体平板法克隆分离贝氏柯克斯体,对随机选择的克隆株CB01进行全基因组测序分析,将测序结果与国外贝氏柯克斯体不同克隆株的基因组进行比较分析。结果:CB01的基因组全长2.024 Mb,包含1个1.987 Mb的环状染色体和1个37.321 kb的质粒。与九里株Ⅰ相菌(RSA 493克隆)基因组相比,CB01多出5个重复序列,有1个25 997 bp的删除区,23个单核苷酸多态性位点(SNP)差异。与九里株Ⅱ相菌(RSA 439克隆)基因组相比,CB01同样多出5个重复序列,但仅有6个SNP差异。CB01与RSA 439的CBU_0533基因序列完全相同,可解释CB01缺失O抗原从而成为Ⅱ相菌。结论:贝氏柯克斯体九里株Ⅱ相菌克隆CB01与国外Ⅱ相菌RSA 439高度同源,CB01可用做国内贝氏柯克斯体研究用参考菌株。

关键词：贝氏柯克斯体 Q热全基因组测序适应性变异

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医院感染细菌性肺炎患者多重耐药菌感染及30 d内死亡危险因素分析

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检验医学 2019年第4期34卷 300-304页

作者：李静刘雪超孙惠敏崔冰漪刘秀玮唐山市中医医院免疫发光科河北唐山063000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 唐山市中医医院肺系病科河北唐山063000

目的探讨医院感染细菌性肺炎的病原谱和耐药情况,分析患者感染30 d内死亡的危险因素。方法回顾性分析2017年1—12月唐山市中医医院医院感染细菌性肺炎患者的临床资料,分析病原菌分布及耐药情况。采用Logistic回归分析和Cox回归分析评估... 详细信息

目的探讨医院感染细菌性肺炎的病原谱和耐药情况,分析患者感染30 d内死亡的危险因素。方法回顾性分析2017年1—12月唐山市中医医院医院感染细菌性肺炎患者的临床资料,分析病原菌分布及耐药情况。采用Logistic回归分析和Cox回归分析评估相关危险因素。结果患者年龄、重症监护病房(ICU)入住>7 d、接受有创机械性通气>7 d是患者发生多重耐药(MDR)菌感染的独立危险因素;患者年龄、肺部肿瘤及合并机体其他部位感染是细菌性肺炎患者30 d内死亡的独立危险因素。结论明确了医院感染细菌性肺炎患者发生MDR及30 d内死亡的危险因素,为临床制定相应预防、治疗措施提供了理论依据。

关键词：医院感染细菌性肺炎危险因素多重耐药菌死亡

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两质粒系统重配甲型H1N1流感病毒株的研究

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免疫学杂志 2018年第4期34卷 353-358页

作者：周珊珊杨晓岚孙芳程晋霞谷宏婧段跃强杨鹏辉王希良安徽医科大学研究生院合肥230601 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfast... 详细信息

目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfastbac△plh HTBP6。同时将流感病毒A/California/7/2009(H1N1)表面基因(HA、NA)双向转录表达元件定向克隆入p ENTR-1A质粒,获得p ENTR-1AP2。将2个重组质粒共转染MDCK/COSI细胞,细胞上清接种10日龄SPF鸡胚,收取尿囊液,血凝实验筛选阳性株,并进行全面鉴定。结果本研究利用两质粒系统成功重配甲型H1N1流感病毒株,命名为TRG A/California/07/2009(H1N1)Vca,重配病毒株传代后HA效价为2~8,形态符合流感病毒典型特征,大小80~120 nm,具有冷适应、温度敏感表型。结论两质粒流感病毒拯救系统为高效重配流感疫苗株提供了新策略。

关键词：反向遗传学两质粒系统流感病毒

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加巴喷丁体内外抗RSV感染的作用

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免疫学杂志 2018年第5期34卷 378-384页

作者：时艳婷谷宏婧杨晓岚段跃强赵忠鹏周娅杨鹏辉王希良宁夏医科大学基础医学院银川750004 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所/病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的探讨加巴喷丁对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)的抗病毒作用。方法体外实验通过MTS、TCID50、q RT-PCR方法检测不同浓度加巴喷丁对RSV感染的抑制作用,包括细胞活力、病毒复制及细胞因子的变化。体内实验选取4~6周... 详细信息

目的探讨加巴喷丁对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)的抗病毒作用。方法体外实验通过MTS、TCID50、q RT-PCR方法检测不同浓度加巴喷丁对RSV感染的抑制作用,包括细胞活力、病毒复制及细胞因子的变化。体内实验选取4~6周龄C57BL/6小鼠,随机分为空白对照组、RSV感染组、低剂量及高剂量加巴喷丁处理组,连续腹腔注射给药,每日观察体质量变化,HE染色观察小鼠肺部的病理变化,q RT-PCR方法检测肺部病毒载量。结果 1、2、5、10 mmol/L不同浓度加巴喷丁显著增加RSV感染A549细胞的活力;5、10 mmol/L浓度的加巴喷丁可显著降低RSV感染A549细胞的病毒载量,10 mmol/L的加巴喷丁可显著抑制病毒的复制,减少CCL3、CCL5、CXCL2及TNF-α、IL-6、IL-8等趋化因子和炎性因子表达,促进干扰素IFN-α、IFN-β表达;动物实验表明90μg、180μg的加巴喷丁处理组可减轻RSV感染小鼠的体质量变化、改善肺部病理损伤和降低病毒载量。结论加巴喷丁可通过抑制病毒复制,调节趋化因子及炎性因子释放,促进干扰素分泌的方式发挥体内抗病毒作用,对RSV感染的C57BL/6小鼠有一定的治疗作用,可改善肺部病理,为进一步临床应用提供实验依据。

关键词：加巴喷丁呼吸道合胞病毒抗病毒细胞因子

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基于FRET技术构建破伤风毒素和B型肉毒毒素酶类抑制剂高通量体外筛选方法

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安徽医科大学学报 2018年第5期53卷 739-745页

作者：罗森丁朋晓李涛王琴王慧遵义医药高等专科学校病原生物与免疫教研室遵义563006 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用FRET技术构建破伤风毒素和B型肉毒毒素酶类抑制剂高通量体外筛选方法。方法构建针对破伤风毒素和B型肉毒毒素的双荧光标记底物的重组表达质粒,表达并纯化荧光标记底物重组蛋白;利用A型肉毒毒素轻链(ALc),B型肉毒毒素轻链(BLc)... 详细信息

目的利用FRET技术构建破伤风毒素和B型肉毒毒素酶类抑制剂高通量体外筛选方法。方法构建针对破伤风毒素和B型肉毒毒素的双荧光标记底物的重组表达质粒,表达并纯化荧光标记底物重组蛋白;利用A型肉毒毒素轻链(ALc),B型肉毒毒素轻链(BLc)和破伤风毒素轻链(TLc)分别对目的蛋白进行酶切反应。对基于双荧光标记底物高通量体外筛选方法的条件进行优化。酶动力学参数分别测定TLc和BLc切割底物荧光标记底物的Km和Kcat值。结果设计并成功构建荧光标记底物的重组表达质粒。表达并纯化后获得纯度为90%左右的重组蛋白,命名为CYVAMP。利用ALc、BLc和TLc分别对CYVAMP进行酶切,CYVAMP能被BLc和TLc识别切割而不能被ALc切割。对基于双荧光标记底物高通量体外筛选方法的条件优化得到:CYVAMP较适宜的范围为0.2~32μmol/L,酶标仪滤光片灵敏度设定的较合适的设置范围在65~110;(对于96孔板)动态实时检测间隔时间2 min较为合适,检测持续时间从30 min到120 min较合适。CYVAMP在内肽酶BLc作用下随反应时间变化与荧光值528与485比值作图最大时在1.5左右,最小在0.5左右。酶动力学参数测定得到BLc酶切CYVAMP的Km和Kcat值分别为(17.6±2.6)μmol/L和(4.16±0.28)s-1。TLc酶切CYVAMP的Km和Kcat值分别为(40.8±3.5)μmol/L和(2.65±0.32)s-1。结论成功构建基于FRET技术的分析法能满足对破伤风毒素和B型肉毒毒素的检测及抑制剂的高通量体外筛选所需。

关键词： FRET 肉毒毒素破伤风毒素高通量筛选

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