检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2014年第8期54卷 956-961页

作者：胡小许张义全黄倩王丽杨瑞馥黎晓敏周冬生钟青萍华南农业大学食品学院广东广州510642 北京军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 西南大学动物科技学院重庆400715

【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3表达系统,表达出有活性的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)ToxR截短体蛋白,为进一步研究ToxR的转录调控机制奠定基础。【方法】以VP基因组DNA为模板,PCR扩增ToxR蛋白DNA结合结构域(ToxR-N)的DNA片... 详细信息

【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3表达系统,表达出有活性的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)ToxR截短体蛋白,为进一步研究ToxR的转录调控机制奠定基础。【方法】以VP基因组DNA为模板,PCR扩增ToxR蛋白DNA结合结构域(ToxR-N)的DNA片段,并将其直接克隆入pET28a中,获得重组质粒;将重组质粒导入大肠杆菌BL21λDE3中,所得菌株经IPTG诱导后能表达出His-ToxR-N蛋白。利用限制级凝血酶切除His-ToxR-N中的His-标签,进而以VP的calR和VP1687为靶基因,通过体外的凝胶阻滞实验(EMSA)验证ToxR-N蛋白的DNA结合活性。分别构建克隆有calR和VP1687上游启动子区的LacZ重组质粒,并将重组质粒转入野生株(WT)和toxR突变株(ΔtoxR)中,通过测定β-半乳糖苷酶活性来比较两株重组菌中靶基因启动子活性,以验证ToxR对calR和VP1687的调控关系。【结果】成功表达出有活性的ToxR-N蛋白,该蛋白对calR启动子区具有结合活性。LacZ结果显示ToxR对calR的转录具有激活作用,而对VP1687的转录具有抑制作用。【结论】所表达的ToxR-N可用于后续的转录调控机制研究;ToxR通过直接激活calR的转录表达,而间接抑制T3SS1相关基因的表达。

关键词：副溶血弧菌 ToxR DNA结合活性转录调控

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AphA蛋白促进副溶血弧菌c-di-GMP合成和生物膜形成

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微生物学报 2014年第5期54卷 525-531页

作者：黄倩张义全胡小许王丽杨瑞馥钟青萍周冬生黎晓敏西南大学动物科技学院重庆400715 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 华南农业大学食品学院广东广州510642

【目的】综合运用表型和分子生化实验研究AphA蛋白对副溶血弧菌生物膜形成的调节机制。【方法】利用菌落褶皱和结晶紫染色实验比较aphA突变株(ΔaphA)和野生株(WT)的表型差异;进而利用色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)的方法分别检测ΔaphA和WT... 详细信息

【目的】综合运用表型和分子生化实验研究AphA蛋白对副溶血弧菌生物膜形成的调节机制。【方法】利用菌落褶皱和结晶紫染色实验比较aphA突变株(ΔaphA)和野生株(WT)的表型差异;进而利用色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)的方法分别检测ΔaphA和WT中c-di-GMP分子含量;提取ΔaphA和WT的总RNA,采用实时定量RT-PCR的方法研究AphA对scrABC和scrG的调控关系;分别构建克隆有scrABC和scrG上游启动子区的LacZ重组质粒,并将重组质粒转入ΔaphA和WT中,通过测定并比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性差异来进一步研究AphA对scrABC和scrG的调控关系;PCR扩增scrABC和scrG的整个启动子区DNA序列,并纯化His-AphA蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)验证AphA对靶基因启动子区是否具有直接的相互作用。【结果】表型结果显示AphA能促进c-di-GMP的合成和生物膜形成;实时定量RT-PCR和LacZ结果表明AphA能抑制scrABC和scrG的转录表达;EMSA结果证明AphA不能结合到scrABC和scrG的启动子区DNA上。【结论】AphA间接抑制scrABC和scrG的表达是其促进副溶血弧菌c-di-GMP合成及生物膜形成的机制之一。

关键词：副溶血弧菌生物膜形成 c—di—GMP AphA scrABC scrG

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蜱虫叮咬所致红肉过敏

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中华临床免疫和变态反应杂志 2015年第1期9卷 44-48页

作者：祝戎飞陈浩孙劲旅文利平江佳富华中科技大学同济医学院附属同济医院过敏反应科武汉430030 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院变态反应科北京100730 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

蜱虫叮咬致病报道增多,已引起医务工作者重视。目前,大多数医务工作者关注蜱虫叮咬所引起的感染性疾病,而对蜱虫叮咬所致红肉过敏关注甚少,本文从蜱虫叮咬与红肉过敏的相关性,以及蜱虫叮咬所致红肉过敏的发病机制、诊断与鉴别诊断、治... 详细信息

蜱虫叮咬致病报道增多,已引起医务工作者重视。目前,大多数医务工作者关注蜱虫叮咬所引起的感染性疾病,而对蜱虫叮咬所致红肉过敏关注甚少,本文从蜱虫叮咬与红肉过敏的相关性,以及蜱虫叮咬所致红肉过敏的发病机制、诊断与鉴别诊断、治疗及预后等方面综述蜱虫叮咬所致红肉过敏的研究进展,以期为临床提供参考。

关键词：蜱虫红肉过敏 α-半乳糖

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利用高通量测序快速检测H7N9禽流感病毒及基因组序列分析

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安徽医科大学学报 2014年第8期49卷 1033-1038页

作者：裴广倩范航安小平王伟徐晓蒙史套兴童贻刚安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的探索用高通量测序技术检测咽拭子样本中H7N9禽流感病毒的方法。方法分别提取编号为106、089及024 3份样本RNA,反转录,cDNA扩增,用Ion Torrent进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学分析。结果 3个咽拭子样本的测序结果中均能检... 详细信息

目的探索用高通量测序技术检测咽拭子样本中H7N9禽流感病毒的方法。方法分别提取编号为106、089及024 3份样本RNA,反转录,cDNA扩增,用Ion Torrent进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学分析。结果 3个咽拭子样本的测序结果中均能检测出禽流感病毒,拼接出的基因组序列可以进行生物信息学分析。结论利用高通量测序技术可以快速地检测H7N9禽流感病毒,并可用生物信息学软件拼接基因组序列及进行序列分析。

关键词：高通量测序 H7N9禽流感病毒生物信息学分析

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副溶血弧菌基因回补实验方法的建立与应用

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南方医科大学学报 2014年第1期34卷 70-74页

作者：陈振鸿王丽张义全冯娇杨瑞馥常德安莉刘长庭周冬生解放军总医院南楼呼吸科北京100853 重庆医科大学检验医学院重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立以pBAD33质粒为载体的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)基因回补实验平台。方法 PCR扩增aphA和opaR的整个ORF区序列,并将其直接克隆入pBAD33质粒中,构建重组质粒。分别将重组质粒转入到ΔopaR和ΔaphA中(分别代表opaR和a... 详细信息

目的建立以pBAD33质粒为载体的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)基因回补实验平台。方法 PCR扩增aphA和opaR的整个ORF区序列,并将其直接克隆入pBAD33质粒中,构建重组质粒。分别将重组质粒转入到ΔopaR和ΔaphA中(分别代表opaR和aphA的突变株),以构建出相应的回补株C-ΔaphA和C-ΔopaR。分别在aphA和opaR基因内设计特异性引物,采用RT-PCR方法,验证在相应的回补突变株中aphA和opaR是否转录。利用引物延伸实验研究野生株(WT)、ΔopaR、ΔaphA、C-ΔaphA和C-ΔopaR中mfpA(aphA负调控,opaR正调控其表达)的相对RNA水平。结果 aphA和opaR在相应的回补株中发生转录;且mRNA水平与野生株一致。结论成功建立了以pBAD33质粒为载体的VP基因回补方法,并得到应用。

关键词：副溶血弧菌基因回补 pBAD33 aphA opaR

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猪链球菌H因子结合蛋白截短体的表达、纯化及其结合人血清IgG的活性分析

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第5期30卷 537-541页

作者：李雪琴刘鹏骈亚亚郑玉玲姜永强袁媛霍春月安徽医科大学研究生学院安徽合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 首都医科大学燕京医学院北京101300

目的构建带His标签的2型猪链球菌H因子结合蛋白(Fhb)截短表达片段Fhb-N(45-344aa)和Fhb-C(345-664aa)的重组质粒,并在大肠杆菌中表达,获得高纯度的重组蛋白,鉴定其与人血清IgG(hIgG)结合的活性。方法以05ZYH33基因组为模板并设计引物扩... 详细信息

目的构建带His标签的2型猪链球菌H因子结合蛋白(Fhb)截短表达片段Fhb-N(45-344aa)和Fhb-C(345-664aa)的重组质粒,并在大肠杆菌中表达,获得高纯度的重组蛋白,鉴定其与人血清IgG(hIgG)结合的活性。方法以05ZYH33基因组为模板并设计引物扩增目的片段,构建His-Fhb-N和His-Fhb-C重组表达质粒,利用亲和层析纯化目的蛋白并用Western blot法进行验证。蛋白G亲和层析柱从健康人血清中纯化人IgG(hIgG),Western blot法和生物膜干涉(BLI)鉴定和分析His-Fhb与hIgG结合的活性。结果成功构建了带His标签的原核表达质粒并获得了His-Fhb-N和His-Fhb-C截短表达蛋白,验证出Fhb特异性地与hIgG结合,且结合区域位于Fhb-N(45-344aa)。结论 Fhb能够结合hIgG,结合区域位于Fhb-N。

关键词： 2型猪链球菌 Fhb 原核表达人血清IgG

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艰难梭菌鞭毛帽蛋白的功能研究

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安徽医科大学学报 2014年第11期49卷 1582-1586页

作者：王德慧谭林林王琴陈芳红李涛王慧安徽医科大学军事医学科学院微生物流行病研究所微生物组学与生物信息学研究室合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的验证艰难梭菌鞭毛帽蛋白FliD的黏附细胞活性以推测其在艰难梭菌感染中的作用,并鉴定其抗原性以测试其应用于候选艰难梭菌疫苗组分的可能性。方法 PCR获取VPI 10463全长fliD基因,构建pET-22b-fliD原核表达质粒,转化至BL21（DE3）中,... 详细信息

目的验证艰难梭菌鞭毛帽蛋白FliD的黏附细胞活性以推测其在艰难梭菌感染中的作用,并鉴定其抗原性以测试其应用于候选艰难梭菌疫苗组分的可能性。方法 PCR获取VPI 10463全长fliD基因,构建pET-22b-fliD原核表达质粒,转化至BL21（DE3）中,诱导表达,Ni2＋亲和层析纯化,进行N端测序验证。蛋白3次皮下免疫大耳白兔后间接ELISA法检测其血清特异IgG水平并鉴定抗原性。间接免疫荧光染色后流式细胞术检测黏附Vero细胞能力。结果 VPI10463的fliD基因钓取成功,与GenBank公布的其他9株艰难梭菌的fliD基因相似度在89%～100%。pET-22b-fliD表达质粒构建成功,表达蛋白大小为56 ku,N端测序序列为MSSIS,与预期一致。一步纯化得到的蛋白纯度为99%以上。ELISA检测3次免疫后效价达到105。用流式细胞术检测其可以黏附在Vero细胞表面。结论构建的pET-22bfliD表达质粒成功表达FliD,具有黏附细胞活性,在艰难梭菌感染过程中起黏附因子作用,其具有较高的抗原性可以作为预防艰难梭菌感染的候选抗原之一。

关键词：艰难梭菌鞭毛帽蛋白FliD 重组表达流式细胞术黏附因子

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埃博拉病毒病流行病学

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浙江大学学报（医学版） 2014年第6期43卷 621-645页

作者：杨兴娄葛行义胡犇石正丽张永振方立群姚宏武曹务春卢珊中国科学院武汉病毒研究所中国疾病预防控制中心传染病预防控制所军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

埃博拉病毒为自然疫源性病原，其引起的埃博拉病毒病与人们食用野生哺乳动物或与其密切接触相关。在自然界埃博拉病毒可以感染非人类灵长类和翼手目（蝙蝠）动物，而自然或实验感染埃博拉病毒能引起非人类灵长类动物死亡，因此蝙蝠被认... 详细信息

埃博拉病毒为自然疫源性病原，其引起的埃博拉病毒病与人们食用野生哺乳动物或与其密切接触相关。在自然界埃博拉病毒可以感染非人类灵长类和翼手目（蝙蝠）动物，而自然或实验感染埃博拉病毒能引起非人类灵长类动物死亡，因此蝙蝠被认为是埃博拉病毒的自然宿主。埃博拉病毒可以在动物之间、动物与人之间、人与人之间传播。接触传播是埃博拉病毒主要传播方式，医源性传播也是人感染埃博拉病毒的途径之一，其是否能经气溶胶传播还有待于进一步研究证实。人类对埃博拉病毒普遍易感；埃博拉病毒病全年流行，无明显的季节性。至今埃博拉病毒的疫源地还仅局限于非洲，其他大陆出现的病例为输入性病例。埃博拉病毒病自1976年首次发现至今（截至2014年12月17日）已在非洲发生25次人类疫情，共报告21031例患者，死亡8537例。2013年12月前发生的23次疫情主要发生于赤道10°线内的5个非洲国家，包括苏丹（南部地区）、加蓬、刚果（布）、刚果（金）和乌干达；2013年12月始于西非的疫情是发现该病以来规模最大、覆盖范围最广的一次疫情，截至2014年12月17日，疫区已涉及利比里亚、几内亚、塞拉利昂、尼日利亚、马里、塞内加尔、美国、西班牙8个之前从未报道人类埃博拉病毒病疫情的国家，累计发病18603例，死亡6915例。此外，2014年在刚果（金）也出现了一次埃博拉病毒病的暴发疫情，发病69例，死亡49例。除非洲之外，其他地区也有实验室感染和非人类灵长类动物疫情的报道。到目前为止，尽管中国尚无感染埃博拉病毒的病例报道，但存在输入埃博拉病毒病的潜在风险。埃博拉病毒病暴发流行是卫生问题同时也是社会问题。生物和生态因素导致了病毒在丛林中的出现，而社会政治经济环境则决定了埃博拉病毒病的发生是一到两个孤立的病例还是一场大范围的持续暴发。

关键词：埃博拉病毒传染病/流行病学公共卫生工作风险调节埃博拉病毒病疾病监测

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产学研用结合引领生物医药产业发展——稀土资源在生物医药领域的科技创新

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中国科技产业 2015年第9期 73-73页

作者：周蕾军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

在门捷列夫的元素周期表里,有一片神秘的由17种金属元素组成的区域,这一区域中的元素在自然界中含量稀少,又常以氧化物的＂土＂颗粒状态存在,因而被称为＂稀土＂。别看＂稀土＂这个名字很不起眼,当今尖端武器、激光制导、新能源开发、... 详细信息

在门捷列夫的元素周期表里,有一片神秘的由17种金属元素组成的区域,这一区域中的元素在自然界中含量稀少,又常以氧化物的＂土＂颗粒状态存在,因而被称为＂稀土＂。别看＂稀土＂这个名字很不起眼,当今尖端武器、激光制导、新能源开发、汽车混合动力等新技术产物,无一不与稀土紧密相联。我国得天独厚稀土矿石约占世界总储量43%,占世界稀土市场98%的份额,但是长期以来始终局限于低端原料出口,由此造成了宝贵资源的极大浪费。

关键词：稀土资源生物医药领域能源开发纳米材料激光制导生物应用高附加值利用夜空下传染病防控临床急诊

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肺炎克雷伯菌CRP对kfuABC操纵子的转录调控机制研究

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重庆医科大学学报 2014年第9期39卷 1197-1201页

作者：杨世亚张义全王丽杨瑞馥周冬生李迎丽邱景富重庆医科大学公共卫生与管理学院营养与食品卫生教研室重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:利用分子生物学实验研究肺炎克雷伯菌环磷酸腺苷受体蛋白(cAMP receptor protein,CRP)对kfuABC操纵子的转录调控机制。方法:设计相关跨基因引物,用Real-time PCR方法验证kfuABC的转录结构。以肺炎克雷伯菌野生株NTUHK2044(wild typ... 详细信息

目的:利用分子生物学实验研究肺炎克雷伯菌环磷酸腺苷受体蛋白(cAMP receptor protein,CRP)对kfuABC操纵子的转录调控机制。方法:设计相关跨基因引物,用Real-time PCR方法验证kfuABC的转录结构。以肺炎克雷伯菌野生株NTUHK2044(wild type,WT)的总RNA为模板,利用引物延伸的方法寻找kfuA的转录起始位点,确定其核心启动子区。构建含kfuA启动子区DNA序列的LacZ重组质粒,并将其转入突变株△crp(肺炎克雷伯菌野生株基因组中crp基因敲除)和WT中,通过测定比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性差异来判定CRP调控子对kfuA的调控关系;分别提取△crp和WT的总RNA,进一步采用实时定量Real-time PCR的方法验证CRP对kfuA的调控关系。通过凝胶阻滞实验验证His-CRP是否对kfuA启动子区具有直接的结合作用,进一步采用DNaseⅠ足迹实验确定具体的结合位点。结果:肺炎克雷伯菌kfuA、kfuB和kfuC位于同一个操纵子kfuABC;引物延伸实验结果显示kfuABC只有一个转录起始位点T;CRP能够结合到kfuABC启动子区-204到-171之间的碱基序列上(转录起始位点为+1),抑制其转录表达。结论:CRP能直接结合到kfuABC启动子区抑制其转录表达。

关键词：肺炎克雷伯菌环磷酸腺苷受体蛋白 kfuABC 转录调控

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