检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学 2013年第9期37卷 671-675页

作者：李箐辛文文康琳高姗王景林安徽医科大学研究生院安徽230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的制备特异性的产气荚膜梭菌α毒素(Clostridium perfringens alpha-toxin,CPA)卵黄抗体(yolk immunoglobulin,IgY)。方法利用定点突变技术,将CPA第56位天冬氨酸和第68位组氨酸分别突变为丝氨酸,构建了重组表达载体pTIG-mCPAD56S和pTIG-mCPAH68S,将其转化入*** Origami中进行诱导表达。用亲和层析的方法对突变体蛋白进行纯化并对其活性及抗原性进行检测,将获得的突变体蛋白分别免疫健康母鸡,收集鸡蛋;经水稀释法纯化卵黄中IgY;用酶联免疫吸附试验检测IgY效价;通过筛选保护剂而选择最佳的IgY冻干条件。结果与结论pTIG-mCPA在Origami表达菌株中得到高效表达,经验证,mCPAD56S和mCPAH68S均完全失去生物学活性同时保留抗原性;纯化卵黄后得到较高纯度的特异性IgY,其效价可达到1∶200 000;经过IgY冻干条件的筛选,最终选择不添加保护剂大量冻干IgY作为抗体的储备。该研究为研制基于IgY抗体的检测方法奠定了基础。

关键词：产气荚膜梭菌α毒素突变 IgY 重组表达

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鼠疫菌OxyR蛋白对katY的转录调控机制

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中国人兽共患病学报 2013年第9期29卷 850-853,861页

作者：倪斌张义全黄新祥杨瑞馥周冬生江苏大学基础医学与医学技术学院镇江212013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用分子生物学实验研究OxyR对katY的转录调控机制。方法 PCR扩增katY的整个启动子区DNA序列全长,并纯化鼠疫菌His-OxyR蛋白,通过体外的凝胶阻滞实验(EMSA)和DNase I足迹实验研究OxyR对katY启动子区的结合位点;提取鼠疫菌野生株(WT)... 详细信息

目的利用分子生物学实验研究OxyR对katY的转录调控机制。方法 PCR扩增katY的整个启动子区DNA序列全长,并纯化鼠疫菌His-OxyR蛋白,通过体外的凝胶阻滞实验(EMSA)和DNase I足迹实验研究OxyR对katY启动子区的结合位点;提取鼠疫菌野生株(WT)和oxyR突变株(ΔoxyR)的总RNA,采用引物延伸实验研究katY的转录起始位点,并根据产物的丰度判断OxyR对katY的调控关系;进一步采用实时定量RT-PCR的方法验证OxyR对katY的调控关系。结果体外实验结果表明OxyR能结合到katY启动子区-101到-48之间的碱基上;鼠疫菌katY有一个转录起始位点G(-26)(翻译起始位点为+1),其转录表达受OxyR的激活。结论 OxyR能直接结合到katY启动子区而激活其转录表达。

关键词：鼠疫耶尔森氏菌 OxyR katY 转录调控

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携带bla_(NDM-1)的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌中的适应度代价

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微生物学报 2013年第1期53卷 99-104页

作者：徐丽吕瑞辰王海燕胡红焱赵向娜杨瑞馥赵建宏宋亚军河北医科大学第二医院河北省临床检验中心石家庄050000 病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 武警总医院检验科北京100039

【目的】了解编码新德里金属-β-内酰胺酶-1(blaNDM-1)的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌10621菌株中的适应度代价,进而评估该质粒在鲁氏不动杆菌群体中存续和扩散的潜能。【方法】通过不含亚胺培南的液体培养基连续传代培养,获得抗性质粒... 详细信息

【目的】了解编码新德里金属-β-内酰胺酶-1(blaNDM-1)的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌10621菌株中的适应度代价,进而评估该质粒在鲁氏不动杆菌群体中存续和扩散的潜能。【方法】通过不含亚胺培南的液体培养基连续传代培养,获得抗性质粒丢失的10621衍生菌株,利用生长曲线、生物被膜、无营养生存时间等体外适应度测量实验,分析10621NDM-1(+)及质粒缺失的10621NDM-1(-)之间的适应度差异。【结果】pNDM-BJ01在10621菌株中不稳定,连续传代11次即在群体中完全丢失。在26℃和37℃下,10621NDM-1(-)与10621NDM-1(+)菌株的生长曲线无显著性差异。在26℃条件下,10621NDM-1(-)菌株形成生物被膜的能力明显强于10621NDM-1(+),而在37℃条件下,10621NDM-1(+)强于10621NDM-1(-)。在无营养的PBS缓冲液中,10621NDM-1(-)菌株生存能力明显高于10621NDM-1(+)。【结论】编码blaNDM-1的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌中具有较大的适应度代价,缺失这一质粒的菌株在外界环境中的生存能力强于抗性菌株,pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌存续与扩散的能力有限。

关键词：鲁氏不动杆菌新德里金属-β-内酰胺酶-1 生物被膜适应度代价

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基于NP和M1蛋白的甲型流感通用疫苗的初步研究

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免疫学杂志 2013年第5期29卷 376-381页

作者：王文娟刘坤段跃强高啸邢丽张良艳王希良杨鹏辉安徽医科大学研究生学院合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的克隆、表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性,为候选甲型流感通用疫苗抗原提供新靶标。方法合成NP-M1-HSP60融合基因,构建pET28a-NP-M1-HSP60重组质粒,表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,抗原与S... 详细信息

目的克隆、表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性,为候选甲型流感通用疫苗抗原提供新靶标。方法合成NP-M1-HSP60融合基因,构建pET28a-NP-M1-HSP60重组质粒,表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,抗原与SP01水包油佐剂混匀,制备候选甲型流感通用疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性。结果成功构建pET28a-NP-M1-HSP60表达载体,表达并纯化了NP-M1-HSP60融合蛋白;与SP01水包油乳剂佐剂混合免疫小鼠后,小鼠血清IgG抗体效价较对照组显著提升,鼻、肺灌洗液中sIgA水平显著升高,IgG亚型分析及细胞因子分泌细胞实验表明该候选疫苗可诱导相对均衡的Th1和Th2反应。免疫后小鼠分别对100LD50剂量的A/Beijing/501/2009(H1N1)毒株,100LD50剂量的PR8(H1N1)毒株和50LD50剂量的A/ostrich/Suzhou/097/2003(H5N1)毒株的攻击分别具有100%、100%和67%保护效果。结论 NP-M1-HSP60融合蛋白抗原具有一定的效果,为发展甲型流感通用疫苗提供了实验依据。

关键词： NP M1 HSP60 流感病毒通用疫苗

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肝素结合蛋白的特性及在临床诊断中的应用

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第11期29卷 1226-1228,1231页

作者：吴凯李霖江华郑玉玲陈福生姜永强华中农业大学食品科技学院武汉湖北430070 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

感染性疾病是一类对健康威胁比较严重的疾病,脓毒症和一些严重的感染性疾病已然成为导致发病和死亡的主要原因。测定感染严重程度的指标很多,最常用的指标有:降钙素原、C-反应蛋白、白细胞计数、中性粒细胞比、血沉、体温等,但上述指标... 详细信息

感染性疾病是一类对健康威胁比较严重的疾病,脓毒症和一些严重的感染性疾病已然成为导致发病和死亡的主要原因。测定感染严重程度的指标很多,最常用的指标有:降钙素原、C-反应蛋白、白细胞计数、中性粒细胞比、血沉、体温等,但上述指标都不同程度的存在滞后、敏感度低及特异性不高的缺陷。在感染性疾病的预防和治疗中,如何及早地采取合理的应对措施是成功的关键。因此,目前看来不管是在临床还是实验室研究,都需要一种可以在病人感染早期就能进行鉴定的方法。近几年来HBP被证实可以作为这样一种早期诊断标志。本文简述了肝素结合蛋白(HBP)作为一种感染早期指标的应用。

关键词：肝素结合蛋白临床诊断应用

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广西壮族自治区2008—2009年HIV-1流行毒株基因型及其分布

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中华流行病学杂志 2013年第1期34卷 53-56页

作者：刘伟梁淑家杨进业李剑军王斌陈立力李林刘永健李敬云广西壮族自治区疾病预防控制中心南宁530028 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室兰州军区乌鲁木齐总医院

目的了解广西地区目前HIV-1流行毒株的基因型及其分布。方法收集广西地区13个市294名2008--2009年新诊断的HIV感染者血浆标本和背景信息，感染途径主要为异性性传播（86．1％）。采用RT-PCR法分别扩增HIV-1gag．100i全长基因（分别为158... 详细信息

目的了解广西地区目前HIV-1流行毒株的基因型及其分布。方法收集广西地区13个市294名2008--2009年新诊断的HIV感染者血浆标本和背景信息，感染途径主要为异性性传播（86．1％）。采用RT-PCR法分别扩增HIV-1gag．100i全长基因（分别为1584bp和3147bp）及enV基因的C2V3片段（558bp），序列编辑后用Genotyping及Mega5．03工具确定病毒的基因型，用Simplot和RecombinantHIV-1DrawingTool软件进行病毒基冈的重组分析。结果获得全长gag基因序列270条、全长poZ基因序列246条、eltv基因C2V3区序列22：3条，确定272例标本的基因型。CRF01AE占的比例最高（77．6％），其次为CRF08BC（10．7％）和CRF07BC（7．4％），有4例B（B’）亚型、1例G亚型，还有7例未知重组型。性别、民族间病毒基因型分布的差异无统计学意义。7株新型重组毒株有6株以CRF01AE为母株，嵌入B和／（或）c的片段，还有1株为CRF07BC和CRF08BC的二代重组。结论广西地区目前流行的HIV-1毒株以CRF01AE为主，并出现以CRF01-AE为母株嵌入其他毒株基因片段的新型重组毒株，呈现基因组结构复杂化趋势。

关键词：艾滋病病毒1型 HIV基因亚型分子流行病学

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EV71与CB3病毒VP1融合蛋白的构建表达与抗原性初步评价

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安徽医科大学学报 2013年第6期48卷 583-586页

作者：房华丽王琴罗森高翔屠伟田仁茂刘雄李涛王慧安徽医科大学军事医学科学院微生物流行病研究所合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建pET-22b-ECVP1表达载体,在大肠杆菌中诱导表达肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇B3型(CB3)病毒VP1融合蛋白(ECVP1),并鉴定其抗原性。方法利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分别从EV71与CB3病毒基因组中扩增得到外壳蛋白VP1基因,... 详细信息

目的构建pET-22b-ECVP1表达载体,在大肠杆菌中诱导表达肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇B3型(CB3)病毒VP1融合蛋白(ECVP1),并鉴定其抗原性。方法利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分别从EV71与CB3病毒基因组中扩增得到外壳蛋白VP1基因,经重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法拼接构建重组融合蛋白基因(ecvp1),将该片段连接到pET-22b表达载体上,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白,经Western blot鉴定其抗原性。结果pET-22b-ECVP1表达载体构建成功,融合蛋白相对分子量约为65 ku,Western blot分析表明,该融合蛋白能被抗EV71及抗CB3抗体特异识别。结论成功构建pET-22b-ECVP1表达质粒并诱导ECVP1融合蛋白表达,且融合蛋白具有良好的抗原性。

关键词：肠道病毒71型柯萨奇B3病毒外壳蛋白VP1 融合蛋白

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肺炎克雷伯菌基因无痕敲除方法的建立

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军事医学 2013年第6期37卷 431-434页

作者：高钰双冯甜邱景富杨瑞馥周冬生李迎丽重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立可行的肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)基因无痕敲除方法。方法 PCR扩增得到目的基因上下游同源臂融合片段,将其克隆到自杀载体pKO3-km,构建重组质粒。提取重组质粒,通过电转化转入肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中,在43℃条件下... 详细信息

目的建立可行的肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)基因无痕敲除方法。方法 PCR扩增得到目的基因上下游同源臂融合片段,将其克隆到自杀载体pKO3-km,构建重组质粒。提取重组质粒,通过电转化转入肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中,在43℃条件下培养筛选得到重组质粒整合到细菌基因组上的重组子,再利用质粒pKO3-km上的sacB基因在含蔗糖的平板上反向筛选得到突变株。结果与结论成功构建突变株,且突变株基因组上没有任何抗性筛选标记残留。该研究为肺炎克雷伯菌基因功能研究提供了基因敲除技术。

关键词：克雷伯菌,肺炎 cAMP受体蛋白基因敲除自杀载体同源重组

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肺炎克雷伯菌全基因组DNA芯片的研制和质量评价

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军事医学 2013年第2期37卷 122-125页

作者：刘梦颖张义全王丽闫小娟杨世亚周冬生杨瑞馥邱景富重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研制肺炎克雷伯菌(KP)全基因组DNA芯片并对芯片质量进行评价。方法根据KP的NTUH-K2044全基因组序列,挑选出5075条基因,PCR扩增各基因并纯化产物,点样制备芯片。设计了3个质控杂交组合,采用双色荧光杂交策略,对芯片质量进行评价。结... 详细信息

目的研制肺炎克雷伯菌(KP)全基因组DNA芯片并对芯片质量进行评价。方法根据KP的NTUH-K2044全基因组序列,挑选出5075条基因,PCR扩增各基因并纯化产物,点样制备芯片。设计了3个质控杂交组合,采用双色荧光杂交策略,对芯片质量进行评价。结果与结论芯片杂交结果与理论预期结果一致。本研究成功研制了KP全基因组DNA芯片,并建立了基于全基因组DNA芯片的KP比较基因组学技术平台。

关键词：克雷伯菌肺炎 DNA芯片比较基因组学

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副溶血弧菌VPA1405多克隆抗体制备及应用

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军事医学 2013年第2期37卷 118-121,125页

作者：闫小娟张义全王丽刘梦颖杨世亚杨瑞馥周冬生邱景富重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的Western印迹方法。方法将VPA1405基因克隆到pET-28a(+)载体,转入大肠杆菌BL21中进行不可溶性表达,在变性条件下纯化得到VPA1405蛋白,制备的包涵体溶液直接免疫兔得到多克隆抗体,进而利... 详细信息

目的建立副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的Western印迹方法。方法将VPA1405基因克隆到pET-28a(+)载体,转入大肠杆菌BL21中进行不可溶性表达,在变性条件下纯化得到VPA1405蛋白,制备的包涵体溶液直接免疫兔得到多克隆抗体,进而利用Western印迹检测VPA1405蛋白在野生株(WT)和opaR基因敲除株(ΔopaR)中表达水平的差异。结果成功表达纯化了6个与生物膜相关基因的蛋白;Western印迹结果显示OpaR调控子对VPA1405基因的表达呈正调控,这与表型实验结果相符。结论成功建立了VP的Western印迹实验平台,该平台可用于后续VP生物膜相关基因的调控研究。

关键词：副溶血弧菌生物膜 Western印迹

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