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第十届全国病毒学学术研讨会

作者：韩剑峰李月香余楠潘玉先何思杰车小燕邓成林张波秦成峰中科院武汉病毒所军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室南方医科大学珠江医院检验医学中心

柯萨奇A16型病毒是手足口病的重要致病原之一,但自2008年安徽爆发EV71引起的手足口病以来,CA16病毒相关研究仍较少,阻碍了对新发肠道病毒致病机制的深入研究.CA16病毒通常引起的是轻症手足口病,但有时也可导致严重的神经系统症状.2009...

柯萨奇A16型病毒是手足口病的重要致病原之一,但自2008年安徽爆发EV71引起的手足口病以来,CA16病毒相关研究仍较少,阻碍了对新发肠道病毒致病机制的深入研究.CA16病毒通常引起的是轻症手足口病,但有时也可导致严重的神经系统症状.2009年广东手足口病爆发期间,我们从临床患者分离到2株CA16病毒,测序鉴定后命名为CA16/GD09/24 (KC117317)CA16/GD09/119(KC117318).这两株病毒在RD细胞上产生的细胞病变与空斑类似,但对乳鼠的致病力却具有明显差异.

关键词：

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云南省西北部分地区小兽类宿主中巴尔通体感染特征研究

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寄生虫与医学昆虫学报 2013年第2期20卷 110-114页

作者：张耀允黎浩龚正达赵晓光刘玮安徽医科大学研究生学院合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物学生物安全国家重点实验室北京100071 云南省地方病防治所云南大理675600

为了解云南西北部不同地区、环境和气候类型中小兽类宿主的巴尔通体感染情况，2005—2006年间在云南西北部两州5县的4种不同气候类型中捕获小兽类宿主，采集脾脏标本提取全基因组DNA，运用热休克蛋白groEL基因的特异性引物进行聚合酶链... 详细信息

为了解云南西北部不同地区、环境和气候类型中小兽类宿主的巴尔通体感染情况，2005—2006年间在云南西北部两州5县的4种不同气候类型中捕获小兽类宿主，采集脾脏标本提取全基因组DNA，运用热休克蛋白groEL基因的特异性引物进行聚合酶链反应（PCR），电泳图中出现目标条带即判断为阳性。本次研究共捕获小兽类宿主688只，PCR阳性为72份。在不同动物属种中均有巴尔通体检出，其中姬鼠属检出率最高为25．27％（46／182）。采样点分布于海拔1200-4300m，气候类型为温带季风气候、亚热带季风气候、高原气候、高寒山区气候4种，在不同海拔与气候类型中的小兽类宿主均有巴尔通体检出。本次研究首次证明调查区域存在巴尔通体的自然疫源地，其呈现出对各种气候环境与地理位置的高适应性和宿主多样性，基因序列分析结果说明采样点中小兽宿主中携带巴尔通体主要有两种基因型Bartonellatribocorum和***。

关键词：巴尔通体小兽类宿主感染率

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炭疽杆菌检测方法的研究现状与展望

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微生物学报 2012年第7期52卷 809-815页

作者：刘炬徐俊杰陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

炭疽是严重威胁人类健康的烈性传染病,其病原体为炭疽芽孢杆菌。炭疽芽孢杆菌在我国公布的《人间传染的病原微生物名录》中被列为第二类病原微生物(高致病性病原微生物),其芽孢可作为生物战剂和生物恐怖的原材料,因此,发展灵敏、高效的... 详细信息

炭疽是严重威胁人类健康的烈性传染病,其病原体为炭疽芽孢杆菌。炭疽芽孢杆菌在我国公布的《人间传染的病原微生物名录》中被列为第二类病原微生物(高致病性病原微生物),其芽孢可作为生物战剂和生物恐怖的原材料,因此,发展灵敏、高效的炭疽杆菌检测方法十分重要和紧迫。按检测的靶标分类,针对炭疽杆菌的检测方法主要有四大类:针对炭疽杆菌芽孢的检测方法,针对细菌繁殖体的检测方法,针对炭疽杆菌基因的检测方法和针对炭疽毒素蛋白的检测方法。其中,针对炭疽杆菌芽孢和细菌繁殖体的检测已经有比较成熟的方法,但其在特异性以及临床的实用性方面难以令人满意;针对炭疽杆菌基因的检测技术在特异性和灵敏度上有较大的提高,但在临床诊断等方面还有欠缺;而针对炭疽毒素蛋白的检测技术的发展,使得直接对炭疽杆菌的主要致病因子的检测成为可能,这对于临床诊断以及流行病学研究具有重要意义。本文对当前炭疽杆菌检测方法的最新进展做了简要的归纳,关注了不同检测方法的适用范围和检测能力,并展望了相关领域的发展趋势,希望能为从事炭疽杆菌检测方法研究的同行提供参考和帮助。

关键词：炭疽炭疽芽胞杆菌检测芽孢毒素

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建立基于RNA免疫共沉淀技术的鼠疫耶尔森菌Hfq蛋白相关sRNA的体内验证方法

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生物技术通讯 2013年第5期24卷 631-635页

作者：孟祥荣苏山春邓仲良刘子中杨瑞馥韩延平黄新祥江苏大学基础医学与医学技术学院江苏镇江212000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 四川农业大学动物医学院四川雅安625014

目的:建立RNA免疫共沉淀方法,为鼠疫耶尔森菌Hfq蛋白相关非编码小RNA(sRNA)提供体内验证方法。方法:首先在RNA结合蛋白Hfq下游加入Flag标签,用Flag标签抗体进行免疫共沉淀,获得蛋白-RNA复合物,然后从沉淀的蛋白-RNA复合物中分离得到纯化... 详细信息

目的:建立RNA免疫共沉淀方法,为鼠疫耶尔森菌Hfq蛋白相关非编码小RNA(sRNA)提供体内验证方法。方法:首先在RNA结合蛋白Hfq下游加入Flag标签,用Flag标签抗体进行免疫共沉淀,获得蛋白-RNA复合物,然后从沉淀的蛋白-RNA复合物中分离得到纯化的RNA;通过Western印迹检测各步骤Hfq蛋白的表达,再利用Northern印迹检测目的sRNA——RyhB1和RyhB2。结果:构建了带有Flag标签的RNA结合蛋白Hfq的载体,此载体转导入hfq缺失株后与鼠疫菌野生株的生长曲线无明显差异;通过RNA-蛋白免疫共沉淀技术鉴定出已知与鼠疫菌Hfq蛋白结合的2个sRNA——RyhB1和RyhB2。结论:建立了利用RNA-蛋白免疫共沉淀鉴定与鼠疫菌Hfq蛋白结合的sRNA的技术,为细菌sRNA的验证、功能研究和体内蛋白质与RNA相互作用研究提供了有利工具。

关键词：鼠疫耶尔森菌非编码小RNA Hfq蛋白 RNA-蛋白免疫共沉淀

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冰毒对HIV-1在巨噬细胞内复制影响的体外实验研究

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中华疾病控制杂志 2013年第12期17卷 1013-1016页

作者：梁冰玉李彧刘思扬蒋俊俊陈晖黄颉刚苏锦明蓝光华黎明强叶力陶人川曹存巍梁浩广西医科大学公共卫生学院广西艾滋病防治研究重点实验室广西南宁530021 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 广西医科大学第一附属医院老年消化内科广西南宁530021 广西疾病预防控制中心艾滋病防制所广西南宁530021 柳州市疾病预防控制中心广西柳州545001

目的探讨冰毒对人类免疫缺陷病毒-1型(human immunodeficiency virus 1,HIV-1)在巨噬细胞中复制的作用。方法将巨噬细胞按单纯随机分组原则分为:(1)冰毒+多巴胺受体D1阻滞剂(SCH 23390)处理组,(2)冰毒处理组,(3)SCH 23390处理组,(4)病... 详细信息

目的探讨冰毒对人类免疫缺陷病毒-1型(human immunodeficiency virus 1,HIV-1)在巨噬细胞中复制的作用。方法将巨噬细胞按单纯随机分组原则分为:(1)冰毒+多巴胺受体D1阻滞剂(SCH 23390)处理组,(2)冰毒处理组,(3)SCH 23390处理组,(4)病毒对照组。先用浓度为10-5mol/L的SCH 23390预处理(1)、(3)组1 h,再用10-4mol/L的冰毒处理(1)组24 h,同时用10-5mol/L、10-4mol/L及2.5×10-4mol/L的冰毒处理(2)组24 h,然后每组加入等量的HIV-1进行感染,于感染的第4、6、8、10 d取培养上清,用酶联免疫吸附剂测定(enzymelinked immunosorbnent assay,ELISA)检测培养上清的HIV-1 p24抗原,比较各组之间抗原表达量差异。结果 HIV-1感染巨噬细胞第4、6、8、10 d,病毒对照组的p24抗原表达量均低于3个不同浓度冰毒处理组(均有P<0.01);且各浓度冰毒处理组的p24抗原表达量比对照组增加的倍数,随着感染时间的延长而具有上升的趋势,时间-效应差异有统计学意义(F=155.94,P<0.001);而冰毒+SCH 23390处理组、SCH 23390处理组分别与病毒对照组HIV-1p24抗原表达比较,差异均无统计学意义(均有P>0.05)。结论冰毒能够促进HIV-1在巨噬细胞内的复制,并随感染时间的延长呈递增趋势;冰毒促进HIV-1复制的作用可被多巴胺受体D1阻滞剂(SCH 23390)阻断。

关键词： HIV-1 HIV核心蛋白质p24 巨噬细胞

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武夷山地区3种野生动物体外寄生蜱调查

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寄生虫与医学昆虫学报 2013年第3期20卷 210-211页

作者：张忠旺郭天宇王公东张晓龙许荣满福建出入境检验检疫局武夷山办事处福建武夷山354300 中国检验检疫科学研究院北京100071 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

本论文报道了采自小麂、野猪和野兔3种野生动物的8种体外寄生蜱，并对各宿主的体外寄生蜱种类组成进行计算。

关键词：蜱螨亚纲蜱小麂野猪野兔武夷山

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TBEV对人神经细胞致病性的实验研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第5期32卷 415-418页

作者：魏婧靖李裕昌吴晓燕司炳银张雨李靖户义祝庆余杨银辉康晓平军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的确定蜱传脑炎病毒（Tick-borne encephalitis virus，TBEV）对人神经母瘤细胞的感染性及复制增殖情况。方法将TBEV感染人神经母瘤细胞SK－N－SH，取不同时间点的细胞培养上清，分别采用real－timeRT－PCR方法及空斑测定的方法测定... 详细信息

目的确定蜱传脑炎病毒（Tick-borne encephalitis virus，TBEV）对人神经母瘤细胞的感染性及复制增殖情况。方法将TBEV感染人神经母瘤细胞SK－N－SH，取不同时间点的细胞培养上清，分别采用real－timeRT－PCR方法及空斑测定的方法测定病毒滴度，以确定TBEV在SK－N－SH细胞中的复制增殖情况；同时进行细胞形态观察及免疫荧光检测，以确定TBEV感染后的SK－N－SH细胞形态变化。结果TBEV感染SK－N－SH细胞后，可进行大量复制增殖，感染后3d，病毒滴度达到峰值，可达2．92×10＾7PFU／ml，感染细胞产生明显的形态改变，免疫荧光法可检测到细胞内的病毒粒子。结论TBEV可在人神经母瘤细胞SK－N－SH中大量复制增殖，并可造成细胞明显的形态改变，因此人神经母瘤细胞SK-N-SH可以作为TBEV培养良好的细胞模型。

关键词：蜱传脑炎病毒神经细胞致病性

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两株炭疽芽胞杆菌MLST新序列型(ST)

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微生物学报 2012年第1期52卷 120-123页

作者：左庭婷李岩伟韩雪莲何君端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【目的】2株炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)17003-14和17003-32的多位点序列分型(Multilocussequence typing,MLST)研究。【方法】选取***基因组7个常见管家基因位点glpF、gmk、ilvD、pta、pur、pycA和tpi进行PCR扩增、测序,与MLST数据库中的等位基因序列进行比对,确定菌株的序列型(sequence type,ST)。【结果】*** 17003-14和17003-32的等位基因编号分别为113、31、1、43、1、53、7和113、31、1、43、1、53、37,比对结果显示这2株细菌的等位基因编号组合未见报道。【结论】17003-14和17003-32为新ST菌株,已被MLST数据库确认,注册号(pubMLST id)分别为id-1053和id-1054。

关键词：炭疽芽胞杆菌多位点序列分型序列型基因分型

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多耐药鲍曼不动杆菌噬菌体IME-AB6的分离、生物特性及保存方法研究

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生物技术通讯 2013年第5期24卷 641-644页

作者：彭帆童贻刚柏长青中南大学湘雅三医院湖南长沙410013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院附属医院呼吸危重症科北京100071 Department of Respiratory Medicine PLA Hospital 307beijing100071

目的:分离并鉴定一株多耐药鲍曼不动杆菌噬菌体,对其生物特性进行研究,为治疗多耐药鲍曼不动杆菌感染提供新的方法和实验依据。方法:以一株多耐药不动杆菌AB6为宿主菌,从医院废水中分离出噬菌体;用聚乙二醇6000对噬菌体进行浓缩和纯化,... 详细信息

目的:分离并鉴定一株多耐药鲍曼不动杆菌噬菌体,对其生物特性进行研究,为治疗多耐药鲍曼不动杆菌感染提供新的方法和实验依据。方法:以一株多耐药不动杆菌AB6为宿主菌,从医院废水中分离出噬菌体;用聚乙二醇6000对噬菌体进行浓缩和纯化,并就噬菌体的形态、一步生长曲线、裂解特性和不同保存条件对噬菌体活性的影响进行初步研究。结果:分离出一株噬菌体IME-AB6,电镜显示为肌尾噬菌体,其潜伏期为10 min,爆发期为40 min,爆发量160 pfu/cell;IME-AB6能迅速使菌液变清晰,温度灵敏性强,并且发现在4℃保存是一种方便高效的方法。结论:噬菌体IME-AB6是一株新的有独特特点的噬菌体,用聚乙二醇能很好地提高滴度,其潜伏期和爆发期短且杀菌效能强,性能稳定易保存,这对于噬菌体制剂的开发和耐药性鲍曼不动杆菌的防治具有潜在应用价值。

关键词：鲍曼不动杆菌噬菌体生物特性

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H221Y突变在HIV-1B ＇亚型毒株中的流行状况及突变模式

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中华医学杂志 2012年第4期92卷 250-253页

作者：李韩平郭伟刘永健鲍作义李林庄道民刘思扬王晓林李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的探讨人类免疫缺陷病毒（ HIV）逆转录酶区H221Y突变在抗病毒治疗失败人群HIV-1B’亚型毒株中的流行状况及突变模式.方法提取我国中部地区多个省份1205例抗病毒治疗失败及158例未抗病毒治疗的艾滋病患者血浆样本RNA,扩增HIV B’亚... 详细信息

目的探讨人类免疫缺陷病毒（ HIV）逆转录酶区H221Y突变在抗病毒治疗失败人群HIV-1B’亚型毒株中的流行状况及突变模式.方法提取我国中部地区多个省份1205例抗病毒治疗失败及158例未抗病毒治疗的艾滋病患者血浆样本RNA,扩增HIV B’亚型毒株聚合酶区（pol区）基因序列提交斯坦福大学HIV-1耐药数据库,根据数据库比对结果,分析H221Y突变在2组人群中发生频率及发生模式.结果 H221Y突变在抗病毒治疗失败人群中流行率（6.59％）显著高于未治疗人群（0.60％）（x2=6.59,P=0.027）.该突变的发生常伴随逆转录酶区位点T215、M184、K103、Y181突变的出现,突变模式以TAMs/H221 Y/Y181C/I为主.5种抗病毒治疗方案中,齐多夫定（AZT）/去羟肌苷（ddI）/奈韦拉平（NVP）治疗方案的H221Y突变发生率显著高于其他4种治疗方案（14.6％比3.5％、4.9％、2.3％、2.6％,均P ＜0.01）.结论使用一线方案治疗失败的艾滋病患者中H221Y突变有一定流行,该突变的发生以特有的突变模式出现.

关键词： HIV-1 突变抗药性 H221Y

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