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生物技术通讯 2012年第1期23卷 26-29页

作者：王猛任军张金龙李浩蔡晨光李建民陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

目的:在大肠杆菌中表达、纯化无标签鼠疫耶尔森菌低钙反应V抗原突变体,并对其免疫原性进行研究。方法:采用融合PCR方法将Ⅴ抗原基因中编码半胱氨酸的碱基缺失突变,将获得得Ⅴ抗原突变体基因克隆到原核表达载体pET32a(+)后转化大肠杆菌BL... 详细信息

目的:在大肠杆菌中表达、纯化无标签鼠疫耶尔森菌低钙反应V抗原突变体,并对其免疫原性进行研究。方法:采用融合PCR方法将Ⅴ抗原基因中编码半胱氨酸的碱基缺失突变,将获得得Ⅴ抗原突变体基因克隆到原核表达载体pET32a(+)后转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达并进行柱层析纯化,纯化产物以Western印迹进行鉴定并免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测免疫血清效价。结果:目的蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性高表达,经三步柱层析后纯度高于95%,经Western印迹检测可与野生型V抗原单克隆抗体特异性结合,免疫小鼠后获得高效价免疫血清。结论:获得了无标签的鼠疫耶尔森菌Ⅴ抗原突变体蛋白,并证实其具有免疫原性,将对V抗原结构和功能的研究提供帮助。

关键词：鼠疫耶尔森菌 Ⅴ抗原突变体表达纯化免疫原性

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动物口鼻动态气溶胶暴露系统的建立与效果评价

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解放军预防医学杂志 2012年第6期30卷 402-405页

作者：温占波李娜李劲松杨文慧王洁胡凌飞董晓凯鹿建春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的评价所设计的动物口鼻动态气溶胶暴露系统的上下层和每层各暴露口之间细菌气溶胶浓度的均匀性,为动物气溶胶吸入研究奠定基础。方法在负压气雾室中运行整体动物口鼻动态气溶胶暴露系统,DV 40气溶胶发生器发生粘质沙雷氏菌气溶胶,流... 详细信息

目的评价所设计的动物口鼻动态气溶胶暴露系统的上下层和每层各暴露口之间细菌气溶胶浓度的均匀性,为动物气溶胶吸入研究奠定基础。方法在负压气雾室中运行整体动物口鼻动态气溶胶暴露系统,DV 40气溶胶发生器发生粘质沙雷氏菌气溶胶,流量10 L/min,使用微生物采样器测试动物口鼻动态气溶胶暴露系统上下层之间和每层各暴露口之间细菌气溶胶粒谱分布,同时测试暴露系统在发生细菌气溶胶时是否发生泄漏。使用SAS 8.2统计学分析软件对实验结果进行统计学分析。结果上层暴露腔和下层暴露腔细菌气溶胶浓度分别为(23 770±2792)CFU/m3和(24 865±1583)CFU/m3,差异无显著性(P>0.05)。暴露系统上层3#、6#、9#暴露口的浓度分别为(7551±375)、(7363±89)、(7563±283)CFU/m3;下层11#、14#、17#暴露口的浓度分别为(7209±215)、(7362±525)、(7374±327)CFU/m3,各暴露口之间浓度差异无显著性(P>0.05)。整个测试过程未发生细菌气溶胶泄露。结论动物口鼻动态气溶胶暴露系统上下层之间和每层各暴露口之间细菌气溶胶浓度均匀性较好,未发生泄露,可以用于相关细菌气溶胶暴露的研究。

关键词：口鼻暴露系统细菌气溶胶均匀性建立评价

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猪链球菌2型强毒株*** 05ZY和弱毒株*** 1940的比较转录谱分析

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生物技术通讯 2012年第1期23卷 11-14,22页

作者：尉研袁媛曾小涛江华郑玉玲周冬生姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:比较猪链球菌2型强毒株*** 05ZY和弱毒株*** 1940毒力相关基因转录水平的差异,为进一步研究强毒株*** 05ZY毒力增强的原因提供实验基础。方法:分别提取*** 05ZY和*** 1940的RNA,反转录成cDNA并纯化,用Cy5或Cy3标记,与猪链球菌全基... 详细信息

目的:比较猪链球菌2型强毒株*** 05ZY和弱毒株*** 1940毒力相关基因转录水平的差异,为进一步研究强毒株*** 05ZY毒力增强的原因提供实验基础。方法:分别提取*** 05ZY和*** 1940的RNA,反转录成cDNA并纯化,用Cy5或Cy3标记,与猪链球菌全基因组DNA芯片进行杂交,扫描芯片进行数据分析,比较二者在转录水平上的差异基因。结果:编码溶血素、精氨酸氨基肽酶的基因分别上调4.4和6.0倍,参与荚膜多糖合成的相关基因cps2H、cps2I、cps2J和一些可能的毒力相关基因ofs、dpr、SSU05_0196、SSU05_0272、SSU05_1408-1409均发生转录水平的上调。结论:溶血素、荚膜多糖、精氨酸氨基肽酶及一些可能的毒力因子在转录水平的上调很可能与*** 05ZY的毒力增强有关。

关键词：猪链球菌2型 DNA芯片比较转录谱毒力因子

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6种沙门菌单克隆抗体的制备和效能评价

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生物技术通讯 2012年第6期23卷 813-816页

作者：张平平张丽丽王浩然王津杨瑞馥周蕾军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:制备稳定、特异、高亲和性的分别针对甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的单克隆抗体。方法:用甲醛灭活的菌液抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;用... 详细信息

目的:制备稳定、特异、高亲和性的分别针对甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的单克隆抗体。方法:用甲醛灭活的菌液抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;用灭活的菌液包被酶标板,ELISA筛选阳性克隆株,建立细胞系;选取高效分泌杂交瘤细胞,常规制备腹水并纯化,进行单抗特异性与亲和性评价。结果:筛选得到分泌6种沙门菌相应单克隆抗体的杂交瘤细胞株,获得高亲和性单抗;所有单抗与大部分病原菌(包括7种沙门菌、3株志贺菌、2株李斯特菌、4株致病性大肠杆菌、2株霍乱弧菌)无交叉反应,但由于同类型O抗原的广泛分布,抗乙型副伤寒沙门菌单抗与鼠伤寒沙门菌、抗伤寒沙门菌单抗与肠炎沙门菌有明显的交叉反应。结论:沙门菌单抗的制备,为感染性腹泻的监测、诊断奠定了基础。

关键词：沙门菌单克隆抗体效价评价特异性评价

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利用扩增片段长度多态性分析鉴别炭疽和蜡样芽孢杆菌

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生物技术通讯 2012年第4期23卷 546-549页

作者：左庭婷李岩伟韩雪莲何君端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：利用扩增片段长度多态性（AFLP）分析建立鉴别炭疽芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的分子生物学方法。方法：3株炭疽芽孢杆菌和3株蜡样芽孢杆菌基因组经限制性内切酶EcoRⅠ和MseⅠ酶切后与对应接头连接,通过预扩增和选择性扩增获得特异性... 详细信息

目的：利用扩增片段长度多态性（AFLP）分析建立鉴别炭疽芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的分子生物学方法。方法：3株炭疽芽孢杆菌和3株蜡样芽孢杆菌基因组经限制性内切酶EcoRⅠ和MseⅠ酶切后与对应接头连接,通过预扩增和选择性扩增获得特异性DNA片段,将片段进行毛细管电泳,并利用GeneScan和BioNumerics软件对电泳数据进行分析。结果：选择性扩增最佳引物组合为EcoRⅠ-G/MseⅠ-A,其扩增片段在100~500 bp范围内的有效数量为40~50条;比较炭疽芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的AFLP特征峰值图和DNA指纹图谱,确定了5个有明显差异的片段区。结论：利用AFLP分析可对芽孢杆菌属中相近的炭疽芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌进行鉴别,该方法可作为炭疽芽孢杆菌传统鉴定方法的补充。

关键词：炭疽芽孢杆菌蜡样芽孢杆菌扩增片段长度多态性 DNA指纹图谱

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EV71病毒感染动物模型研究进展

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国际病毒学杂志 2012年第6期19卷 280-283页

作者：韩剑峰秦鄂德秦成峰军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

手足口病（hand—foot—and—mouth disease，HFMD）是由多种肠道病毒引起的常见传染病，肠道病毒71型（EV71）是其主要病原体。EV71病毒属于小RNA病毒科、肠道病毒属病毒，为单股正链RNA病毒。自1974年首次报道从美国加州神经系统疾病... 详细信息

手足口病（hand—foot—and—mouth disease，HFMD）是由多种肠道病毒引起的常见传染病，肠道病毒71型（EV71）是其主要病原体。EV71病毒属于小RNA病毒科、肠道病毒属病毒，为单股正链RNA病毒。自1974年首次报道从美国加州神经系统疾病患者标本中分离到EV71以来，EV71病毒曾在世界范围内多次引起暴发疫情，

关键词：手足口病 EV71 动物模型

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干扰素的信号传导和抗病毒效应机制

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生物技术通讯 2012年第1期23卷 123-126页

作者：刘颖侯利华陈薇军事医学科学院微生物流行病学研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

干扰素是一种具有抗病毒、抗增殖和免疫调节功能的细胞因子,它在宿主天然免疫防御中起着重要的作用。干扰素诱导的信号通路除了最初的Jak-Stat途径以外,很多新发现的信号途径对于干扰素反应也是必需的。干扰素反应最终导致抗病毒的效应... 详细信息

干扰素是一种具有抗病毒、抗增殖和免疫调节功能的细胞因子,它在宿主天然免疫防御中起着重要的作用。干扰素诱导的信号通路除了最初的Jak-Stat途径以外,很多新发现的信号途径对于干扰素反应也是必需的。干扰素反应最终导致抗病毒的效应蛋白通路,包括2′,5′-寡聚腺苷酸合成酶、蛋白激酶、ISG15等途径。这些效应蛋白通过抑制病毒转录、降解病毒RNA、抑制翻译和修饰蛋白的功能来控制病毒复制的过程。

关键词：干扰素信号通路效应蛋白

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副溶血弧菌的分子分型和微进化研究

副溶血弧菌的分子分型和微进化研究

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纪念中国微生物学会成立六十周年大会暨2012年中国微生物学会学术年会

作者：周冬生崔玉军颜炎峰杨瑞馥军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

本研究建立了多个副溶血弧菌分子分型方法，在相应疾病爆发流行时，或发生食品安全事件时，可用于副溶血弧菌的鉴定、分型、溯源分析，可为相关疾病防控和保障食品安全提供相关技术储备。同时，还进行了深入的种群遗传学研究，探究了副... 详细信息

本研究建立了多个副溶血弧菌分子分型方法，在相应疾病爆发流行时，或发生食品安全事件时，可用于副溶血弧菌的鉴定、分型、溯源分析，可为相关疾病防控和保障食品安全提供相关技术储备。同时，还进行了深入的种群遗传学研究，探究了副溶血弧菌的微进化历史，了解其种群结构，试图为相关疾病的检测预警、预防控制提供新思路。

关键词：副溶血弧菌种群遗传学分子分型

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一种蜱类保护性抗原蛋白——Subolesin

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寄生虫与医学昆虫学报 2012年第3期19卷 179-185页

作者：王欣孙毅军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 安徽医科大学合肥230032

Subolesin是一种进化上保守的蛋白，在蜱类传播病原中发挥重要作用。本文综述了subolesin对于蜱的繁殖、发育、病原感染与传播等几个方面的研究进展，并且评价其作为传播阻断疫苗，在监测蜱类叮咬并预防蜱传疾病中的应用前景。

关键词： Subolesin 传播阻断疫苗蜱

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山东临沂市手足口病传播时空特征分析

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中国公共卫生 2012年第1期28卷 121-122页

作者：孙大鹏姜宝法丁淑军王连森方立群曹务春王显军山东大学公共卫生学院卫生统计与流行病学研究所济南250012 山东省疾病预防控制中心山东省传染病预防控制重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

手足口病（hand，foot，andmonthdisease，HFMD）是由多种肠道病毒引起的常见传染病，多发于〈5岁婴幼儿。可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹、溃疡，个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症。2007年山东省临沂地区... 详细信息

手足口病（hand，foot，andmonthdisease，HFMD）是由多种肠道病毒引起的常见传染病，多发于〈5岁婴幼儿。可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹、溃疡，个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症。2007年山东省临沂地区出现手足口病暴发流行，一些患儿出现严重并发症，引起社会广泛关注。为了解临沂市手足口病流行特点，本研究对临沂市2007—2010年的手足口病疫情资料进行了分析。结果报告如下。

关键词：手足口病时空分析趋势面模型

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