检索结果-内蒙古大学图书馆

中国中药杂志 2010年第5期35卷 630-634页

作者：王穆让蔚清张琪霍超马增春王宇光颜贤忠高月军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理与毒理研究室北京100850 南华大学公共卫生学院环境医学与放射卫生研究所湖南衡阳421001 军事医学科学院生物医学分析中心北京100850

目的:通过分析血虚证模型以及给予四物汤反证后小鼠血清和组织提取物的代谢组学变化,结合模式识别的统计分析方法,探讨环磷酰胺所致血虚证及四物汤治疗后的特征性内源代谢谱的改变,为中药经典复方四物汤的作用机制研究提供科学依据。方... 详细信息

目的:通过分析血虚证模型以及给予四物汤反证后小鼠血清和组织提取物的代谢组学变化,结合模式识别的统计分析方法,探讨环磷酰胺所致血虚证及四物汤治疗后的特征性内源代谢谱的改变,为中药经典复方四物汤的作用机制研究提供科学依据。方法:将C57小鼠按体重随机分为3组:正常对照组、环磷酰胺模型组、四物汤给药组(10 ***-1.d-1),每组10只,连续给药7 d后股动脉取血,同时取脾脏、胸腺及股骨骨髓。用600 MHz超导傅立叶变化核磁共振波谱仪检测,对所得到的氢谱按每段0.04进行分段积分并归一化后,用SIMCA-P10.0软件进行主成分分析。结果:正常对照组、环磷酰胺模型组和四物汤给药组的血清代谢物组成、胸腺、脾脏、骨髓提取物的成分明显不同。其中环磷酰胺导致血清中的乳酸、3-羟基丁酸、胆碱、葡萄糖的含量下调,低密度脂蛋白、亮氨酸/异亮氨酸含量上调;胸腺提取物中的牛磺酸,胆碱,F:βRCH2CH2CO,epi-coprostanol,乳酸含量下调;脾脏提取物中的乳酸,3-羟基丁酸,胆碱,F:βRCH2CH2CO,epi-coprostanol,牛磺酸的含量下调;骨髓提取物中的乳酸、3-羟基丁酸、胆碱、葡萄糖的含量下调。给予四物汤后,以上各成分在不同程度上得到有效逆转。结论:环磷酰胺所致血虚证的可能机制是导致机体脂肪酸β氧化功能紊乱、细胞内外渗透压平衡破坏以及糖酵解功能失调。经典补血方剂治疗血虚证的机制可能与改善线粒体功能,纠正脂肪酸β氧化功能紊乱;稳定细胞膜,维持细胞内外正常渗透压;调节糖酵解,促进机体正常能量代谢有关。

关键词：四物汤血虚证环磷酰胺代谢组学核磁共振主成分分析

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过氧化物酶体增殖物活化型受体γ在抑制大鼠心肌肥厚中的作用

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中华心血管病杂志 2004年第3期32卷 250-253页

作者：伍仕敏叶平周新刘永学解放军总医院老年心内科北京100853 武汉大学中南医院基因诊断中心北京放射医学研究所药理毒理室

目的　探讨过氧化物酶体增殖物活化型受体γ(peroxisomeproliferator activatedreceptorγ ,PPARγ)在大鼠心肌肥厚过程中的作用。方法　新生大鼠的原代心肌和非心肌培养细胞 ,以血管紧张素Ⅱ诱导建立体外心肌肥厚模型 ,并用不同浓度的P... 详细信息

目的　探讨过氧化物酶体增殖物活化型受体γ(peroxisomeproliferator activatedreceptorγ ,PPARγ)在大鼠心肌肥厚过程中的作用。方法　新生大鼠的原代心肌和非心肌培养细胞 ,以血管紧张素Ⅱ诱导建立体外心肌肥厚模型 ,并用不同浓度的PPARγ内、外源性激活物 15脱氧前列腺素J2 (15d PGJ2 )和吡格列酮作用细胞。采用RT PCR法检测心肌肥厚特征性基因心钠肽和脑钠肽mRNA的表达 ,以MTT比色法和3 H TdR掺入实验检测非心肌细胞增殖情况 ,以3 H 亮氨酸掺入实验检测心肌细胞蛋白合成速率 ,并用软件分析心肌细胞表面积。结果　血管紧张素Ⅱ诱导后 ,心肌细胞表面积、心钠肽和脑钠肽mRNA的表达以及蛋白合成速率增加 ;非心肌细胞增殖活跃 ,但心钠肽和脑钠肽mRNA的表达没有显著变化。PPARγ激活物 15d PGJ2 和吡格列酮可以逆转这些变化 ,同时下调非心肌细胞的心钠肽和脑钠肽mRNA的表达 ,并呈一定的剂量依赖性。

关键词：过氧化物酶体增殖物活化型受体γ 抑制大鼠心肌肥厚转录因子心肌病

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HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中的知母皂苷B-Ⅱ

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中国药理学通报 2010年第8期26卷 1064-1068页

作者：王莉贾彦波陈方王清清赵阳马百平陈志武宋海峰安徽医科大学基础医学院药理学教研室安徽合肥230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850 军事医学科学院放射与辐射医学研究所生物技术研究室北京100850

目的建立快速、灵敏和准确的大鼠血浆中知母皂苷B-Ⅱ液质联用(HPLC-MS/MS)定量分析方法。方法大鼠血浆样品用乙腈沉淀蛋白,上清液经Alltima HP C18柱(2.1mm×50mm,5μm)分离,采用负离子检测多反应监测模式(MRM)、电喷雾离子化(ESI)... 详细信息

目的建立快速、灵敏和准确的大鼠血浆中知母皂苷B-Ⅱ液质联用(HPLC-MS/MS)定量分析方法。方法大鼠血浆样品用乙腈沉淀蛋白,上清液经Alltima HP C18柱(2.1mm×50mm,5μm)分离,采用负离子检测多反应监测模式(MRM)、电喷雾离子化(ESI)对知母皂苷B-Ⅱ进行定量分析,内标为ParisaponinⅠ(重楼皂苷Ⅰ)。检测离子对为知母皂苷B-Ⅱ离子对(m/z919.4→757.4)与"重楼皂苷Ⅰ"离子对(m/z1033.5→901.4)。结果方法的线性范围为5～2000μg·L-1,最低定量下限5μg·L-1。日内精密度<10.9%,日间精密度<6.6%,准确度为-8.6%～7.5%;每样品分析时间为3min。结论该法准确、灵敏、特异,适用于血浆中知母皂苷B-Ⅱ的测定。

关键词：知母皂苷B-Ⅱ 液质联用法电喷雾电离 SD大鼠血药浓度药代动力学

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人GPC3基因真核表达载体的构建及重组蛋白表达纯化

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第9期28卷 937-939,943页

作者：宋海晶张卓梅邱伟成杨小盼万德友何椿鹏李萌萌高新解放军第306医院急诊部北京100850 武警总医院妇产科北京100039 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850

目的:人磷脂酰肌醇蛋白3是肝癌的诊断标志物和潜在治疗靶点。本研究目的在于获得足量的GPC3蛋白用于结构、功能及应用研究。方法:通过RT-PCR从人胎肝中克隆GPC3编码cDNA,利用Xho I和Xba I酶切位点,将GPC3ORF编码基因插入毕赤酵母表达载... 详细信息

目的:人磷脂酰肌醇蛋白3是肝癌的诊断标志物和潜在治疗靶点。本研究目的在于获得足量的GPC3蛋白用于结构、功能及应用研究。方法:通过RT-PCR从人胎肝中克隆GPC3编码cDNA,利用Xho I和Xba I酶切位点,将GPC3ORF编码基因插入毕赤酵母表达载体pPICZ A中,构建真核表达质粒pPICZ A-GPC3。以该表达质粒转染毕赤酵母菌株GS115,在含有Zeocin的YPD平板上进行筛选。然后使用HRP标记的山羊抗人IgG在醋酸-硝酸纤维素双层膜上进行Dot blot筛选。对筛选获得的菌株进行诱导表达,表达上清经SDS-PAGE和Western blot检测。结果:筛选获得的阳性菌株诱导表达上清SDS-PAGE结果表明在预期位置观察到GPC3重组蛋白条带,且该蛋白条带与抗GPC3单克隆抗体(mAb)孵育后呈现特异性反应。工程菌株经高密度培养后,发酵上清中重组GPC3表达量约5 mg/L,进而通过阳离子交换层析从发酵上清中纯化了重组蛋白。结论:利用毕赤酵母表达并纯化了重组人GPC3蛋白,为进一步研究GPC3的结构和功能奠定了基础。

关键词：人磷脂酰肌醇蛋白3 克隆毕赤酵母表达纯化肝癌

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DNA-PKcs反义核酸增强HeLa细胞对辐射及化疗药物顺铂的敏感性

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中国现代医学杂志 2005年第8期15卷 1148-1151页

作者：余子建孙敬芬隋建丽吴德昌周平坤南华大学附属第一医院湖南衡阳421001 军事医学科学院放射医学研究所放射毒理研究室北京100850

目的构建表达DNA-PKcs反义核酸的真核表达载体,建立DNA-PKcs表达被反义核酸抑制的细胞模型。方法采用RT-PCR扩增DNA-PKcs的cDNA片段,DNA重组技术构建四环素控制表达的真核表达载体;利用Lipofectamine介导基因转染,Westernblot分析鉴定... 详细信息

目的构建表达DNA-PKcs反义核酸的真核表达载体,建立DNA-PKcs表达被反义核酸抑制的细胞模型。方法采用RT-PCR扩增DNA-PKcs的cDNA片段,DNA重组技术构建四环素控制表达的真核表达载体;利用Lipofectamine介导基因转染,Westernblot分析鉴定反义核酸抑制DNA-PKcs表达的细胞模型;细胞克隆形成法和细胞生长曲线分析细胞对UV和顺铂的敏感性。结果克隆了DNA-PKcs5'端320bpcDNA片段,重组于tet启动子控制表达质粒pCIneo-Tet-splice,转染Hela细胞,获得3个稳定转化克隆;Westernblot结果表明细胞中DNA-PKcs表达受到反义核酸的抑制,并且细胞对紫外线辐射和顺铂敏感性增加。结论成功建立了DNA-PKcs表达受到反义核酸抑制的细胞模型,抑制DNA-PKcs表达提高了细胞的辐射和顺铂的敏感性。

关键词： DNA—PKcs 反义核酸基因表达辐射敏感性

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美罗华单抗的^(90)Y标记的实验研究

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第二军医大学学报 2005年第12期26卷 1412-1414页

作者：贾海威聂青张伟京宋海峰刘秀文朱宝珍海军总医院放射肿瘤科北京100037 军事医学科学院附属医院肿瘤二科北京100039 军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究室北京100850

目的:使用新型DOTA类螯合剂p-SCN-BZ-DOTA对进口人鼠嵌合型抗CD20单抗美罗华进行90Y标记,确定最佳标记条件。方法:采用先螯合抗体再标记核素的方法制备放免复合物,在固定抗体、螯合剂、核素用量及缓冲液的前提下,采用正交设计考察标记... 详细信息

目的:使用新型DOTA类螯合剂p-SCN-BZ-DOTA对进口人鼠嵌合型抗CD20单抗美罗华进行90Y标记,确定最佳标记条件。方法:采用先螯合抗体再标记核素的方法制备放免复合物,在固定抗体、螯合剂、核素用量及缓冲液的前提下,采用正交设计考察标记反应中的3个关键因素pH值、温度、标记时间对其比活度的影响,确定最佳标记条件。结果:不同标记条件下,放免复合物的比活度波动在0.122~0.327 mCi/mg之间,统计分析后发现,最佳标记条件为:pH值7.5,4℃反应2 h。结论:使用新型螯合剂p-SCN-BZ-DOTA可成功制备90Y-抗CD20单抗放射免疫药物,其放化纯度可满足临床研究使用。

关键词： ^90Y 抗CD20单抗 p-SCN—BZ—DOTA

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阿托伐他汀对体外心肌细胞肥大的抑制作用

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中国药理学通报 2006年第1期22卷 23-27页

作者：盛莉叶平黄火高刘永学军事医学科学院放射医学研究所药理毒理室北京100850 解放军总医院老年心肾科北京100853 海军总医院内分泌风湿科北京100037

目的探讨阿托伐他汀体外抑制心肌肥厚的药理作用。方法体外培养新生大鼠的心室肌细胞,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥厚模型,以不同浓度的阿托伐他汀作用于心肌细胞,用软件分析测量心肌细胞表面积,3H-亮氨酸参入法检测心肌细胞蛋... 详细信息

目的探讨阿托伐他汀体外抑制心肌肥厚的药理作用。方法体外培养新生大鼠的心室肌细胞,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥厚模型,以不同浓度的阿托伐他汀作用于心肌细胞,用软件分析测量心肌细胞表面积,3H-亮氨酸参入法检测心肌细胞蛋白合成速率及使用RT-PCR半定量测定心钠素(ANP),脑钠素(BNP)和特异分布于心脏的丝氨酸蛋白酶(Corin)的表达变化。结果AngⅡ可成功诱导体外培养的新生大鼠心室肌细胞肥大,表现为心肌细胞面积和3H-亮氨酸的参入增加,ANP、BNP、Corin表达升高等特征性改变,从而分析阿托伐他汀对心肌肥厚的作用。阿托伐他汀可逆转上述变化并呈剂量依赖性,而作为溶剂的DM-SO对肥大的心肌细胞差异无显著性。结论阿托伐他汀抑制AngⅡ介导的体外心肌细胞肥大,预示其具有降脂以外的其他重要药理作用。

关键词：阿托伐他汀心肌细胞肥大心钠素脑钠素 Corin

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多反应监测方法评估丹参和人参对大鼠肝药酶的调控作用

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中草药 2016年第20期47卷 3647-3655页

作者：程汉兴孙爱华王宇光高月姜颖安徽医科大学合肥安徽230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京102206 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850

目的建立新型特异性强的高通量细胞色素P450(CYP)丰度测定方法,以人参和丹参为工具药考察药物对肝药酶的调控作用。方法采用基于质谱多反应监测(MRM)模式方法,以串联配体法(QconCAT)表达合成的重标肽段作为内标对丹参与人参处理后,对9... 详细信息

目的建立新型特异性强的高通量细胞色素P450(CYP)丰度测定方法,以人参和丹参为工具药考察药物对肝药酶的调控作用。方法采用基于质谱多反应监测(MRM)模式方法,以串联配体法(QconCAT)表达合成的重标肽段作为内标对丹参与人参处理后,对9种大鼠肝脏CYP(CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1、CYP2B2、CYP2C6、CYP2C11、CYP3A1、CYP3A2、CYP17A1)蛋白特异肽段进行定量,探讨丹参和人参对肝脏CYP酶的表达上调或者下调作用。结果 QconCAT重标合成内标肽段与肝脏样品肽段质谱表征一致,与对照组相比,丹参与人参作用后,对大鼠肝内CYP1A1、CYP2B2的表达均具有下调作用,对CYP1A2、CYP2B1的表达均具有上调作用。丹参同时下调CYP3A2、CYP2C11和CYP17A1的表达,而人参则上调这3种蛋白的表达。建立了MRM方法对大鼠肝脏CYP蛋白定量方法,定量方法相对标准偏差在5.9%以内,相对误差在6.8%以内,定量标准曲线的线性系数大于0.9。结论对9种大鼠肝脏CYP酶进行定量研究,其中CYP2B1、CYP2B2和CYP17A1是首次进行蛋白质定量研究。丹参与人参对CYP亚型产生的调控作用存在差异性,为药物配伍实践中提供临床参考价值,避免不良药物相互作用反应。

关键词：人参丹参 CYP450 多反应监测药物配伍

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表皮生长因子受体-3真核表达质粒的构建及其免疫小鼠抗体滴度的检测

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中国生物制品学杂志 2014年第3期27卷 391-396页

作者：张晶刘强马忠辉万德友王瑜付洁宋海峰安徽医科大学研究生学院安徽合肥230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850

目的构建表皮生长因子受体-3(v-erb-b2 avian erythroblastic leukemia viral oncogene homolog 3,ErbB3)真核表达质粒,并检测其免疫小鼠血清抗体滴度。方法以乳腺cDNA文库为模板,PCR扩增ErbB3全长基因,插入pcDNA3.1-myc/His载体,构建重组表达质粒pcDNA3.1-myc/His-ErbB3。同时以质粒pcDNA3.1-myc/His-ErbB3为模板,PCR扩增ErbB3-ECD和ErbB3-RLD基因,插入pET-28a(+)和pGEX-KG载体中,构建重组表达质粒pET-28a(+)-ECD和pGEX-KG-RLD;将质粒pET-28a(+)-ECD和pGEX-KG-RLD转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定后,经GST柱或镍亲和柱纯化,BCA法定量纯化后蛋白。以60μg质粒pcDNA3.1-myc/His-ErbB3免疫BALB/c小鼠,4次免疫后,经小鼠尾静脉采血,分离血清,以纯化后的ErbB3-ECD和ErbB3-RLD蛋白为包被抗原,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体滴度。结果 3种质粒经双酶切及测序鉴定,证明构建正确。表达的重组蛋白ErbB3-ECD和ErbB3-RLD在相对分子质量约76 000和46 000处可见特异蛋白条带,浓度分别为2和1 mg/ml,免疫后的小鼠血清抗体滴度分别为1︰400和1︰10 000。结论 ErbB3全长质粒免疫BALB/c小鼠后,经ErbB3-ECD和ErbB3-RLD蛋白初步筛选,已获得ErbB3的多克隆抗体,为后期ErbB3单抗的制备以及以ErbB3为靶点的核酸免疫治疗奠定了基础。

关键词：表皮生长因子受体核酸免疫多克隆抗体基因治疗

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人胎盘肝细胞生长素对大鼠肝纤维化的治疗作用

人胎盘肝细胞生长素对大鼠肝纤维化的治疗作用

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海峡两岸三地药理学学术报告会

作者：吕秋军郭绍明温利青李元敏陈媛媛军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究室军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究室军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究室军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究室军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究室

目的:观察人胎盘肝细胞生长素对大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:给大鼠皮下注射人血白蛋白制备成免疫性大鼠肝纤维化模型。实验分正常对照组、模型对照组、人胎盘肝细胞生长素50mg·kg、100mg·kg和200mg·kg三个剂量组。每... 详细信息

目的:观察人胎盘肝细胞生长素对大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:给大鼠皮下注射人血白蛋白制备成免疫性大鼠肝纤维化模型。实验分正常对照组、模型对照组、人胎盘肝细胞生长素50mg·kg、100mg·kg和200mg·kg三个剂量组。每天给药一次,尾静脈注射,连续用药4周。给药结束後检测各组血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、白蛋白（ALB）、

关键词：人胎盘肝细胞生长素大鼠肝纖维化

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