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癌变．畸变．突变 2004年第5期16卷 257-259,271页

作者：隋建丽范保星孙敬芬周平坤军事医学科学院放射医学研究所放射毒理与肿瘤研究室北京100850 解放军301医院呼吸内科北京100853

背景与目的 :DNA修复系统在细胞基因组完整性维持中发挥重要作用 ,本研究探讨α粒子辐射诱发人支气管上皮细胞癌变的DNA修复基因表达谱变化。材料与方法 :采用Cy5和Cy3分别标记的癌变细胞BERP35T4和亲本细胞BEP2D的cDNA探针与DNA修复基... 详细信息

背景与目的 :DNA修复系统在细胞基因组完整性维持中发挥重要作用 ,本研究探讨α粒子辐射诱发人支气管上皮细胞癌变的DNA修复基因表达谱变化。材料与方法 :采用Cy5和Cy3分别标记的癌变细胞BERP35T4和亲本细胞BEP2D的cDNA探针与DNA修复基因cDNA微矩阵杂交、ScanArray3000扫描仪扫描和ImaGene3.0软件分析比较基因表达差异。结果 :分析比较了人支气管上皮细胞癌变前(BEP2D)和后(BERP35T4)126个DNA修复相关基因的表达谱 ,发现细胞癌变后有10个修复基因的表达降低 ,这些基因分别参与DNA链断裂修复、核苷酸切除修复和碱基切除修复反应 ,3个基因(DNA_PKcs、SMUG和RAD18)表达上调。结论 :细胞DNA修复表达改变是辐射诱发细胞恶性转化的机制之一。

关键词： α粒子癌变 DNA修复芯片基因表达

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α粒子诱发BEP2D细胞癌变株中多种基因启动子的异常甲基化

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军医进修学院学报 2003年第3期24卷 175-177页

作者：李鹏高德伟耿煜隋建丽孙敬芬周平坤解放军总医院南楼呼吸科北京100853 军事医学科学院放射医学研究所放射毒理研究室北京100850

目的 :研究α 粒子诱发人支气管上皮细胞癌变株中 p14 ARF,p16 INK4a,MGMT ,GSTP1,BUB3和DAPK基因的甲基化情况。方法 :用甲基特异性的PCR(MSP)分析基因启动子区CpG岛的甲基化情况和用RT PCR检测细胞的基因转录水平。结果 :p14 ARF基因... 详细信息

目的 :研究α 粒子诱发人支气管上皮细胞癌变株中 p14 ARF,p16 INK4a,MGMT ,GSTP1,BUB3和DAPK基因的甲基化情况。方法 :用甲基特异性的PCR(MSP)分析基因启动子区CpG岛的甲基化情况和用RT PCR检测细胞的基因转录水平。结果 :p14 ARF基因在BEP2D细胞中没有甲基化 ,但在其癌变细胞BERP35T1中发生了甲基化 ,且甲基化导致 p14 ARF基因的转录水平显著下降。p16 INK4a和BUB3在两种细胞中均没有发生甲基化 ,BUB3经测序证实 ;MGMT在BEP2D细胞和癌变细胞中均发生甲基化 ;DAPK在BEP2D细胞中已有部分甲基化 ,在BERP35T1细胞中完全甲基化 ;GSTP1在BEP2D细胞中没有甲基化 ,在BERP35T1细胞中发生部分甲基化。结论 :在辐射诱发人支气管上皮细胞恶性转化中 ,部分与细胞增殖。

关键词： α粒子诱发 BEP2D细胞癌变株基因启动子异常甲基化

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BEP2D细胞和R15Hp35T-2细胞中60个肺癌相关基因的表达研究

BEP2D细胞和R15Hp35T-2细胞中60个肺癌相关基因的表达研究

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中国癌症研究基金会第六届学术大会

作者：范保星孙敬芬张开泰王升启周平坤吴德昌 100850 北京军事医学科学院放射医学研究所分子毒理研究室

在肿瘤细胞的发生发展中,基因的表达及调控是一个复杂变化的模式(patterns of gene expression regulation).DNA芯片为研究肿瘤发生发展中的基因表达谱及各阶段的关键基因提供了强有力的工具,利用它可动态的获取肿瘤细胞生长各期肿瘤相... 详细信息

在肿瘤细胞的发生发展中,基因的表达及调控是一个复杂变化的模式(patterns of gene expression regulation).DNA芯片为研究肿瘤发生发展中的基因表达谱及各阶段的关键基因提供了强有力的工具,利用它可动态的获取肿瘤细胞生长各期肿瘤相关基因的表达模式.BEP2D细胞是永生化的人支气管上皮细胞,该细胞经1.5 Gy α粒子照射后第20代培养细胞发生形态学改变,但接种裸鼠不成瘤;第35代(R15Hp-35)培养细胞开始发生恶性转化,接种裸鼠后成瘤,组织切片证实为人上皮来源的鳞癌,从该裸鼠成瘤的组织中分离单克隆细胞再培养获得R15Hp35T-2细胞.本研究采用目前最新的cDNA表达阵列技术,检测了BEP2D细胞和R15Hp35T-2细胞中60个肺癌相关基因的表达谱,旨在探讨细胞恶性转化前后肿瘤相关基因的表达特征。

关键词：肺癌基因表达 BEP2D细胞 R15Hp35T-2细胞肿瘤发生

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离子对试剂的选择及其在多肽及蛋白质分析中的应用

离子对试剂的选择及其在多肽及蛋白质分析中的应用

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2011年中国药学大会暨第11届中国药师周

作者：王明媚向慎思王清清宋海峰解放军总医院第一附属医院药剂药理科北京 100048 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京 100850 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京 100850

离子对试剂是实现反相离子对色谱（reversed-phase ion-pair chromato- graphy，RPIC）快速灵敏和高分辨的关键因素。离子对试剂的正确选择和适当的添加，对多肽及蛋白质的分离分析有着显著影响。本文介绍了RPIC 的基本原理及其在蛋白... 详细信息

离子对试剂是实现反相离子对色谱（reversed-phase ion-pair chromato- graphy，RPIC）快速灵敏和高分辨的关键因素。离子对试剂的正确选择和适当的添加，对多肽及蛋白质的分离分析有着显著影响。本文介绍了RPIC 的基本原理及其在蛋白多肽分析中的应用前景，并详细阐述了常用离子对试剂的种类、特点及应用。

关键词：离子对试剂反相离子对色谱多肽蛋白质纯化分析

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基因芯片法测定中国人群细胞色素P450 2D6的基因多态性

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中国临床康复 2006年第24期10卷 39-41页

作者：李芹王睿许力文思远王升启中国海洋大学海洋药物与食品研究所山东省青岛市266003 解放军总医院临床药理室北京市100853 解放军军事医学科学院放射医学研究所北京市100850

目的:根据细胞色素P4502D6基因序列的多态性分布特点,针对在中国人群药物代谢中具有潜在作用的突变位点C188T和G4268C,设计寡核苷酸探针,制备寡核苷酸芯片,探讨基因芯片技术应用于CYP2D6基因分型的可行性,观察中国人群细胞色素P4502D6... 详细信息

目的:根据细胞色素P4502D6基因序列的多态性分布特点,针对在中国人群药物代谢中具有潜在作用的突变位点C188T和G4268C,设计寡核苷酸探针,制备寡核苷酸芯片,探讨基因芯片技术应用于CYP2D6基因分型的可行性,观察中国人群细胞色素P4502D6的基因多态性。方法:实验于2005-02/08进行。以克隆并已测序的细胞色素P4502D6基因重组质粒作为标准样品,扩增产物与芯片进行杂交,制备基因芯片,测定312名中国健康志愿者(已签署知情同意书)细胞色素P4502D6基因分型,并使用直接测序法对结果进行验证。结果:312名全部进入结果分析。①312名中国健康志愿者中CYP2D62和CYP2D610的变异频率分别为CYP2D62W10W8.3%,2H10W13.5%,2M10W10.6%,2M10H17.0%,2M10M34.6%,2H10H9.6%,2H10M6.4%。②对部分样本采用直接测序的方法进行进一步确证,结果完全吻合。结论:①CYP2D62和CYP2D610突变型等位基因在中国人群中出现的频率较高。②基因芯片法简便、快捷,适用于中国人群细胞色素P4502D6基因分型研究。

关键词：细胞色素P450 CYP2D6/遗传学多态现象(遗传学) 寡核苷酸序列分析

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不饱和脂肪酸影响HepG-2细胞PAI-1表达的机制初探

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中国病理生理杂志 2005年第3期21卷 436-440页

作者：贺艳丽叶平周新方红王琼刘永学华中科技大学协和医院干细胞研究中心湖北武汉430022 解放军总医院老年心内科北京100853 武汉大学中南医院基因诊断中心湖北武汉430071 北京放射医学研究所药理毒理室北京100850

目的 :探讨不饱和脂肪酸对HepG - 2细胞纤溶酶原激活物抑制剂 - 1(PAI- 1)表达的影响及其机制。方法 :以发色底物法检测PAI- 1活性 ,RT -PCR法检测PAI- 1mRNA水平 ;构建两个含不同片段缺失的PAI- 1启动子序列控制表达的氯霉素转移乙酰酶... 详细信息

目的 :探讨不饱和脂肪酸对HepG - 2细胞纤溶酶原激活物抑制剂 - 1(PAI- 1)表达的影响及其机制。方法 :以发色底物法检测PAI- 1活性 ,RT -PCR法检测PAI- 1mRNA水平 ;构建两个含不同片段缺失的PAI- 1启动子序列控制表达的氯霉素转移乙酰酶 (CAT)报告基因质粒 ,转染HepG - 2细胞 ,ELISA法检测CAT表达量。结果 :油酸、亚油酸诱导下HepG - 2细胞PAI- 1mRNA表达及蛋白活性显著高于对照组 ;共转染过氧化体增殖物激活型受体表达质粒 (PPARα -pSG5 )PAI- 1转录活性显著增加 ;转染NF -κB样蛋白结合序列缺失的重组质粒 ,亚油酸诱导下PAI- 1转录活性显著增加 ,而转染VLDL/脂肪酸反应元件缺失的重组质粒则无显著变化。结论 :不饱和脂肪酸增强HepG - 2细胞PAI- 1mRNA表达及活性 ;PPARα可能是其上调PAI- 1表达所涉及的转录因子之一 ,且VLDL/脂肪酸反应元件在该调控中具有重要作用 ,但可能并不涉及NF -κB信号转导途径。

关键词：脂肪酸类,不饱和纤溶酶原激活物抑制物1 HepG-2细胞

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气相色谱-质谱选择离子检测法测定Melatonin的血药浓度

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质谱学报 2001年第4期22卷 45-53页

作者：黄丰付良青骆传环田军军事医学科学院附属医院临床药理室北京100039 军事医学科学院放射医学研究所北京100850 海军总医院药剂科北京100037

本文应用GC/MS仪 ,采用内标咖啡因定量 ,选择单离子检测建立了测定Melatonin的方法 ,Melatonin的标准曲线为Y =0 .0 5 82 +0 .6 0 6 7X(r =0 .9994 ) ,其10、2 0、5 0、2 0 0、4 0 0ng/mL五浓度的血样回收率分别为 74 .4 3、93.39、94 ... 详细信息

本文应用GC/MS仪 ,采用内标咖啡因定量 ,选择单离子检测建立了测定Melatonin的方法 ,Melatonin的标准曲线为Y =0 .0 5 82 +0 .6 0 6 7X(r =0 .9994 ) ,其10、2 0、5 0、2 0 0、4 0 0ng/mL五浓度的血样回收率分别为 74 .4 3、93.39、94 .39、81.98、86 .10 % ;日内精密度为 6 .5 5 % ,日间精密度为 14 .5 0 %。此方法可满足测定要求 ,可用于Melatonin的药代动力学研究。应用此法测定了家兔在灌服 30mg/KgMelatonin后的血药浓度。

关键词：气相色谱-质谱离子检测法测定血药浓度 Melatonin GC/MS 单离子检测安眠药药代动力学

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人参皂苷Rg1对TCDD致HepG2细胞CYP1A1诱导的抑制作用

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中国药理学通报 2013年第10期29卷 1382-1386页

作者：王宇光陈强李晗马增春梁乾德肖成荣谭洪玲汤响林高月军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院辽宁沈阳110016 天津市现代中药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地天津300193

目的人参对多种肿瘤具有非器官特异性的预防作用,该文对人参皂苷Rg1与2,3,7,8-四氯代二苯并-对-二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)共同作用HepG2细胞,对CYP1A1在mRNA、蛋白及酶活性3个层面影响进行了研究,同时对CYP1A1... 详细信息

目的人参对多种肿瘤具有非器官特异性的预防作用,该文对人参皂苷Rg1与2,3,7,8-四氯代二苯并-对-二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)共同作用HepG2细胞,对CYP1A1在mRNA、蛋白及酶活性3个层面影响进行了研究,同时对CYP1A1转录调控子芳烃受体(AhR)表达情况亦进行了检测,旨在探索人参皂苷与TCDD共同作用时对CYP1A1影响,为干预前致癌物如TCDD等通过CYP1A1代谢活化产生致癌作用提供线索。方法该实验分别以TCDD 5 nmol·L-1单独作用或与Rg1(1.0、10.0、100.0μmol·L-1)共同作用于HepG2细胞24 h。溶剂对照组为二甲基亚砜(dimethyl suffoxide,DMSO)。利用RT-PCR法和Western blot法检测不同药物处理后HepG2细胞中CYP1A1、AhR的mRNA和蛋白质表达水平的变化,同时采用EROD法测定不同处理组细胞CYP1A1酶活性。结果与溶剂对照组比较,TCDD能使CYP1A1基因、蛋白表达上调及酶活性水平上升;与TCDD单独处理细胞组比较,Rg1与TCDD共处理组CYP1A1、AhR在mRNA和蛋白质表达水平均较TCDD单独处理组明显降低(P<0.01);同时CYP1A1酶活性也较单独TCDD处理组明显降低(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1对TCDD致HepG2细胞CYP1A1诱导在mRNA、蛋白表达及酶活性3个层面均具有抑制作用,为深入研究人参皂苷Rg1对TCDD致肝脏损伤的保护作用提供线索。

关键词：人参皂苷Rg1 7-乙氧基异吩噁唑-O-脱乙氧基酶 CYP1A1 AhR 肝损伤药物代谢酶

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人参与藜芦合用对大鼠肝P450酶活性及mRNA表达的调控作用

人参与藜芦合用对大鼠肝P450酶活性及mRNA表达的调控作用

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第十一届中国科协年会

作者：王宇光高月马增春谭洪玲肖成荣赵永红军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室，北京市 100850

目的：研究中药十八反中人参与藜芦合用对P450同工酶在酶活性及mRNA水平的调控作用。方法:采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素P450与细胞色素b5含量及氨基比林N-脱甲基酶(APND)、对硝基苯酚羟化酶(pNPH)活性。采用RT-PCR技术... 详细信息

目的：研究中药十八反中人参与藜芦合用对P450同工酶在酶活性及mRNA水平的调控作用。方法:采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素P450与细胞色素b5含量及氨基比林N-脱甲基酶(APND)、对硝基苯酚羟化酶(pNPH)活性。采用RT-PCR技术检测大鼠肝中5种P450同工酶CYP1A1，CYP281/2，CYP2C11，CYP2E1及CYP3A1 mRNA的表达。结果：人参与藜芦合用可明显降低P450蛋白含量，可降低细胞色素b5的含量，单药及其与藜芦配伍都能使APND活性下降。在mRNA水平上，藜芦可诱导CYP2C11的基因表达，与人参合用后却使得CYP2C11的表达下降。藜芦与人参配伍诱导了CYP1A1的表达。人参可抑制CYP2B1/2的基因表达，与藜芦合用后却明显诱导了CYP281/2的表达，人参与藜芦合用后也明显诱导了CYP3A1的表达。结论：人参与藜芦配伍前后对一些CYP亚型调控作用发生明显变化，可能存在基于药物代谢酶机理的相反作用，需进一步结合代谢研究加以综合分析，阐明相反作用的机理。

关键词：人参藜芦中药配伍肝P450酶活性 mRNA表达调控作用

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PXR对CYP3A基因表达的调控在药物毒性早期预测中的应用

PXR对CYP3A基因表达的调控在药物毒性早期预测中的应用

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2015年（第五届）药物毒理学年会

作者：李晗王宇光高月军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究室天津中医药大学

毒性早期预测是药物安全性评价的重要组成部分。如何快速地、早期获得药物可能的毒性反应数据,建立一种简单、可靠地毒性早期预测方法,是当今毒理学领域研究的重点之一。相比于化学药在毒性预测与评价研究领域的突飞猛进,中药在此领域... 详细信息

毒性早期预测是药物安全性评价的重要组成部分。如何快速地、早期获得药物可能的毒性反应数据,建立一种简单、可靠地毒性早期预测方法,是当今毒理学领域研究的重点之一。相比于化学药在毒性预测与评价研究领域的突飞猛进,中药在此领域则刚刚起步。随着中药使用的日益广泛,临床使用中其出现毒性甚至引起死亡等报道不断增多,使中药安全性问题逐渐被人们所关注。核受体是一类能与DNA应答元件(DNA-respective element)结合的配体激活性转录调控因子,它们的主要功能是特异性调控发育、生殖、代谢相关基因的表达。孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)属于核受体超家族(NRs)中NR1I亚家族的成员之一,参与大量的内源性和外源性化学物质的生物转化,PXR作为一种配体依赖性转录因子,大量临床药物作为其配体或激活剂通过激活PXR而诱导CYP3A基因表达。PXR介导的CYP 3A调控途径被认为是临床药物相互作用的重要分子基础。同时PXR可被多种中药激活,调控下游靶基因即CYP450的表达,使药物疗效降低或者消失,从而导致意料之外的不利的药物相互作用的产生,因此PXR在药代动力学与药物毒性早期预测方面具有重要作用。本文从PXR-3A途径为药物相互作用的分子机制进行了综述,以及为药物毒性早期预测提供了新思路。

关键词：毒性早期预测细胞色素P450 3A 孕烷X受体药物代谢

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