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辐射研究与辐射工艺学报 2012年第5期30卷 291-296页

作者：邹佳杨伟志王清清付洁董立厚向慎思高新孙云娟宋海峰军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850 同济大学附属上海第十人民医院骨科上海200072

为探讨新型抗氧化剂SS31在体外对细胞的辐射防护作用和初步机制,用60Coγ射线照射细胞,用不同浓度的SS31对细胞进行干预,观察照射后细胞的增殖、生存状态、细胞内ROS水平和线粒体膜电位的改变,并将药物干预组和阴性对照组进行比较。结... 详细信息

为探讨新型抗氧化剂SS31在体外对细胞的辐射防护作用和初步机制,用60Coγ射线照射细胞,用不同浓度的SS31对细胞进行干预,观察照射后细胞的增殖、生存状态、细胞内ROS水平和线粒体膜电位的改变,并将药物干预组和阴性对照组进行比较。结果发现:7.5 Gy的γ射线照射后24–72 h,细胞增殖活性显著降低;48 h内细胞凋亡和坏死比率显著增加,并伴随胞内ROS增长、线粒体膜电位下降和细胞周期阻滞。SS31能明显改善这些反应,药物干预组与阴性对照相比有统计学差异。通过本实验,观察到了SS31具有明显的体外辐射防护作用,提示其有潜力作为一种新型的辐射防护剂。

关键词： SS31 抗氧化辐射防护

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运用Bridging-ELISA法评价蛋白药物mAbY在食蟹猴体内的免疫原性

运用Bridging-ELISA法评价蛋白药物mAbY在食蟹猴体内的免疫原性

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作者：谢新遥王变珍欧伦王清清宋海峰北京和实康明医药科技有限公司军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室

目的阐述临床前与临床研究中抗药性抗体(ADA)检测方法的建立与验证并用于评估治疗性蛋白免疫原性的基本策略。方法建立并验证经典的免疫分析法-桥式酶联免疫吸附法(Bridging-ELISA)来检测抗药性抗体;该方法原理描述如下:预先包被治疗性... 详细信息

目的阐述临床前与临床研究中抗药性抗体(ADA)检测方法的建立与验证并用于评估治疗性蛋白免疫原性的基本策略。方法建立并验证经典的免疫分析法-桥式酶联免疫吸附法(Bridging-ELISA)来检测抗药性抗体;该方法原理描述如下:预先包被治疗性蛋白(mAbY),同时加入阳性对照抗mAbY多抗(ADA)与生物素标记的mAbY(B-mAbY),充分反应并洗涤后加入SA-HRP,最后加入底物显色,终止反应并读取光吸收值。首先进行初步筛选,初筛为潜在阳性的样品再经竞争免疫抑制试验进行确认。结果检测ADA免疫分析法验证包括:初步筛选临界值(SCP)的信噪比为1.169;灵敏度为45 ng·ml~(-1);批间精密度小于20%;阴性、低浓度与高浓度三个水平的质控中的阴性质控假阳性率为8.3%、低、高浓度的假阴性率均为0,高浓度质控的回算浓度%RE与%CV分别为-4.5%与13.5%;耐药性为在5μg·ml~(-1)药物干扰条件下,样品均能检测到阳性;抑制试验临界值(DCP)为42.3%;稀释线性在ADA浓度高至128μg·ml~(-1)条件下均呈线性,且无Hook效应;稳定性分别在室温、2～8℃、-60℃条件下为48 h、5 d与2 y。运用该分析方法对18只受试食蟹猴进行免疫原性测定,结果表明8只个体呈现ADA阳性,阳性率为44.4%。结论利用已建立的BRIDGING-ELISA方法,可以在高浓度受试品干扰条件下准确检测ADA。

关键词：蛋白药物mAbY 食蟹猴免疫原性

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异鼠李素和阿魏酸在大鼠原代肝细胞的肝摄取性质

异鼠李素和阿魏酸在大鼠原代肝细胞的肝摄取性质

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2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛

作者：沈国林庄笑梅谭妍原梅李桦高月军事医学科学院毒物药物研究所药物代谢研究室军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室

目的建立大鼠原代肝细胞摄取模型,评价异鼠李素和阿魏酸的肝细胞摄取性质。方法应用RT-qPCR技术测定0,0.5,2和4 h悬浮培养原代大鼠肝细胞上摄取转运体有机阴离子转运多肽（Oatp）1和Oatp2,有机阴离子转运体（Oat）2和有机阳离子转运体（... 详细信息

目的建立大鼠原代肝细胞摄取模型,评价异鼠李素和阿魏酸的肝细胞摄取性质。方法应用RT-qPCR技术测定0,0.5,2和4 h悬浮培养原代大鼠肝细胞上摄取转运体有机阴离子转运多肽（Oatp）1和Oatp2,有机阴离子转运体（Oat）2和有机阳离子转运体（Oct）1的mRNA表达。应用已知底物非索非那定、普伐他汀、甲氨蝶呤和阿昔洛韦评价转运体的功能。将已知底物或受试药物在4℃和37℃分别与肝细胞孵育不同时间,LC-MS/MS定量测定细胞摄取量,考察温度和时间对底物摄取的影响。由浓度依赖的摄取实验,计算得到K、V和主动摄取率等参数。在肝细胞模型上,将转运体的阳性抑制剂与异鼠李素10μmol·L和阿魏酸50μmol·L共孵育2 min,观察抑制剂对受试药转运的影响。结果悬浮培养大鼠原代肝细胞上表达有转运体Oatp1,Oatp2,Oat2和Oct1,并能介导已知底物的主动摄取。转运体的mRNA表达水平随着时间的延长而快速下降,4 h的表达水平约为0 h的10%。转运体对已知底物摄取活性也随时间呈下降趋势,但程度显著低于表达水平,4 h的活性约为0 h的28.7%～71.4%。在经验证的肝细胞模型上,异鼠李素的4℃和37℃摄取无显著差异,主动转运率为14.6%。阿魏酸在37℃的摄取量显著高于4℃,主动转运率为84.1%;Oct阳性抑制剂奎尼丁100μmol·L能显著抑制阿魏酸的肝摄取,抑制率为64.9%。结论成功建立了大鼠原代肝细胞摄取模型,并用底物进行了验证。异鼠李素通过被动扩散进入肝细胞,阿魏酸的肝细胞摄取则以主动转运为主。

关键词：异鼠李素阿魏酸肝细胞生物转运,主动

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60Coγ射线对小鼠胸腺损伤效应及四物汤保护作用的代谢组学研究

60Coγ射线对小鼠胸腺损伤效应及四物汤保护作用的代谢组学研究

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第七届中国核学会“三核”论坛中国放射医学教育五十年暨中国毒理学会放射毒理委员会第八次全国会议

作者：王穆马增春黄波王宇光唐艳让蔚清高月南华大学公共卫生学院环境医学与放射卫生研究所军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理与毒理研究室

目的:用基于NMR的代谢组学的方法探讨Coγ射线对小鼠胸腺损伤效应及四物汤保护作用。方法:雄性C57小鼠30只,按体重随机分为3组:正常对照组、Co-γ射线3.5Gy照射组以及四物汤药物处理组,每组10只动物。四物汤给药剂量为***-1.d-1,连续给... 详细信息

目的:用基于NMR的代谢组学的方法探讨Coγ射线对小鼠胸腺损伤效应及四物汤保护作用。方法:雄性C57小鼠30只,按体重随机分为3组:正常对照组、Co-γ射线3.5Gy照射组以及四物汤药物处理组,每组10只动物。四物汤给药剂量为***-1.d-1,连续给药7d后处死动物,同时取胸腺,经过离心、提取、真空抽干以及氘化后,用600 M Hz超导傅立叶变化核磁共振波谱仪检测,对所得到的1H谱按默认值分别进行分段积分,将积分数据归一化之后,用SIMIC-P10.0软件进行主成分分析。结果:3.5GyCo-γ射线照射小鼠胸腺提取物中的胆碱、磷酸化胆碱以及谷氨酰胺的相对含量下降,乳酸、牛磺酸、组氨酸、极低密度脂蛋白的相对含量上升;给予四物汤***-1.d-1,连续给药7天后,发现胸腺提取物中乳酸、牛磺酸、极低密度脂蛋白、谷氨酰胺的相对含量在射线照射的基础上有所逆转。结论:3.5CyCo-γ射线照射能造成胸腺能量代谢紊乱,四物汤能够改善胸腺细胞能量代谢,促进细胞内环境稳定。

关键词：四物汤小鼠胸腺代谢组学 γ射线损伤效应

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60Coγ射线对小鼠胸腺损伤效应及四物汤保护作用的代谢组学研究

60Coγ射线对小鼠胸腺损伤效应及四物汤保护作用的代谢组学研究

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第七届中国核学会"三核"论坛中国放射医学教育五十年暨中国毒理学会放射毒理委员会第八次全国会议

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甘草与海藻提取液合用对CYP3A1/2酶活性及mRNA表达的影响

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中国药师 2007年第6期10卷 515-518页

作者：徐芝秀石苏英金科涛高月诸暨市人民医院药剂科浙江诸暨311800 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室

目的:研究甘草与海藻提取液合用对CYP3A1/2酶活性的影响及在mRNA水平的调控作用。方法:采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;采用RT-PCR评价药物对CYP3A1、CYP3A2 mRNA水平的影响。结果:甘草、海藻提取液合用后诱导了CYP3A1/2的酶... 详细信息

目的:研究甘草与海藻提取液合用对CYP3A1/2酶活性的影响及在mRNA水平的调控作用。方法:采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;采用RT-PCR评价药物对CYP3A1、CYP3A2 mRNA水平的影响。结果:甘草、海藻提取液合用后诱导了CYP3A1/2的酶活性;合用后诱导CYP3A1、CYP3A2 mRNA表达。结论:甘草、海藻提取液合用后诱导CYP3A1/2酶活性,酶活性增强可能主要由诱导其mRNA水平来实现。

关键词：甘草海藻细胞色素P450同工酶3A1/2 酶活性反转录聚合酶链式反应

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白蔹配伍乌头对大鼠肝脏CYP450的调节作用

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医药导报 2007年第9期26卷 975-979页

作者：石苏英金科涛王宇光高月浙江省诸暨市人民医院药剂科 311800 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850

目的研究乌头、白蔹配伍对主要药物代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2在酶活性、mRNA水平和蛋白质水平的影响。方法采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-P... 详细信息

目的研究乌头、白蔹配伍对主要药物代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2在酶活性、mRNA水平和蛋白质水平的影响。方法采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blot方法评价药物对CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2mRNA及蛋白水平的影响。结果乌头、白蔹配伍后CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2的酶活性均有下降;Western Blot检测显示CYP1A2、CYP3A1的蛋白质表达水平上升;CYP2E1、CYP3A2的蛋白质表达水平下降。RT-PCR检测显示CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2的mRNA水平均上升。结论乌头、白蔹配伍后抑制CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2的酶活性,CYP2E1酶活性下降可能主要通过影响基因转录进而影响其蛋白水平来实现;CYP1A2、CYP3A1/2酶活性下降则与基因和蛋白水平不相关。

关键词：白蔹乌头细胞色素P450 酶活性蛋白质免疫印迹逆转录-聚合酶链式反应

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血卟啉衍生物对癌细胞作用的超微结构研究

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中国医学科学院学报 1985年第4期 244-247+333-334页

作者：司静懿蒋铁男赵维敏李昆鲍家驹张卫盛齐韩锐徐承熊战洪生中国医学科学院基础医学研究所生物物理学研究室中国医学科学院放射医学研究所中国医学科学院药物研究所药理室中国医学科学院药物研究所药理室北京

应用血卟啉衍生物(HpD)作用于人宫颈鳞癌细胞,当剂量为16μg/ml再光照2分钟后,透射电镜下即出现线粒体基质的灶性空化,5分钟后线粒体肿胀,核基质凝聚。光照10分钟再持续作用30分钟,上述改变更加明显,又出现粗面内质网扩张及核肿胀;60分... 详细信息

应用血卟啉衍生物(HpD)作用于人宫颈鳞癌细胞,当剂量为16μg/ml再光照2分钟后,透射电镜下即出现线粒体基质的灶性空化,5分钟后线粒体肿胀,核基质凝聚。光照10分钟再持续作用30分钟,上述改变更加明显,又出现粗面内质网扩张及核肿胀;60分钟后线粒体嵴呈球状嵴消失,内质网呈现空泡样结构,细胞膜裂解。扫描电镜下于光照2分钟后细胞肿大;10分钟后表面绒毛减少,泡状突起增加,有的断裂呈指状突;90分钟细胞裂解成大小不等的团块。作者认这线粒体是HpD光敏作用最早的靶细胞器,其他改变可能是线粒体损伤导致的继发效应。

关键词：线粒体损伤光照血卟啉衍生物扫描电镜宫颈鳞癌超微结构细胞

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建立骨质疏松症模型的研究与进展

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中国临床康复 2004年第33期8卷 7478-7480页

作者：马增春王道福邱贞琴高月谭洪玲解放军第八十九医院药剂科山东省潍坊市261043 军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究室北京市100850

目的:骨质疏松症的学术研究领域目前仍有许多问题存在争论,其主要原因是因为缺少确实有效的实验模型。最近的一些研究抻出了骨质疏松症模型的制作方法和机制。资料来源:应用计算机检索Medline1995-01/2004-01期间的骨质疏松症模型相关文... 详细信息

目的:骨质疏松症的学术研究领域目前仍有许多问题存在争论,其主要原因是因为缺少确实有效的实验模型。最近的一些研究抻出了骨质疏松症模型的制作方法和机制。资料来源:应用计算机检索Medline1995-01/2004-01期间的骨质疏松症模型相关文章,检索词“osteoporosis;model;biology;review,并限定文章语言种类为English。计算机检索CMCC数据库1995-01/2004-01期间的骨质疏松症模型相关文章,检索词“骨质疏松,模型,生物学,并限定文章语言种类为中文。计算机检索《中国临床康复》杂志1990-01/2004-05期间的相关文章,限定文章语言种类为中文,检索词“骨质疏松症,模型”。资料选择:选择与骨质疏松症动物模型、细胞模型和现代分子模型的相关文献150篇,中文80篇,英文70篇。资料提炼:按骨质疏松症模型制作和机制研究的最新进展对相关文献进行提炼。纳入标准:与骨质疏松症动物模型、细胞模型和现代分子模型相关文献,不排除未随机试验以及盲法对照的文献。资料综合:综合资料发现近几年骨质疏松症的制作方式增多,特别是细胞模型、基因敲除模型和转基因模型的研究使得对骨质疏松症发病机理的认识深入到分子水平,研究发现其机制主要涉及细胞因子。

关键词：骨质疏松,模型生物学综述文献

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ELISA法测定食蟹猴血清中抗BLyS抗体的抗药抗体

ELISA法测定食蟹猴血清中抗BLyS抗体的抗药抗体

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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会

作者：高柳村李黎王绪甲陈方董立厚欧伦宋海峰军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850 军科正源(北京)药物研究有限责任公司北京102206 上海众合医药科技股份有限公司上海201203

目的:建立测定食蟹猴血清中抗BLyS抗体抗药抗体(ADA)的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法并进行验证,用于测定该药的抗药抗体. 方法:在96孔板中包被治疗药物,以捕获食蟹猴血清中的抗药抗体,之后加入生物素标记的治疗药物与被捕获的抗药抗... 详细信息

目的:建立测定食蟹猴血清中抗BLyS抗体抗药抗体(ADA)的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法并进行验证,用于测定该药的抗药抗体. 方法:在96孔板中包被治疗药物,以捕获食蟹猴血清中的抗药抗体,之后加入生物素标记的治疗药物与被捕获的抗药抗体结合,最后用链霉亲和素—辣根过氧化物酶偶联试剂作为检测试剂.以羊抗人的IgG作为对照品,对食蟹猴血清中的抗药抗体进行半定量. 结果:筛选判断阈值SNR为1.158,批内批间精密度小于20％,样品复孔OD值变异小于20％,确证判断阈值为38.4％游离药物抑制率.抗BLyS抗体连续给药13周食蟹猴体内产生抗药抗体. 结论:成功建立、验证并应用该方法测定了抗BLyS抗体的抗药抗体,为该药申请临床实验报批提供数据支持.

关键词： B淋巴细胞刺激因子单克隆抗体药物抗药抗体酶联免疫吸附分析免疫原性

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