检索结果-内蒙古大学图书馆

中国药理学通报 2014年第1期30卷 25-30页

作者：王骏宣自学王珊珊杨德宣袁守军军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850

目的研究阿可拉定在体内外对急性髓性白血病(AML)的抗肿瘤作用及其对AML的重要靶点的影响。方法用MTT法测定阿可拉定在体外对MV-4-11细胞生长抑制作用,流式细胞分析不同浓度阿可拉定对MV-4-11细胞的凋亡和周期的影响,RT-PCR检测阿可拉定... 详细信息

目的研究阿可拉定在体内外对急性髓性白血病(AML)的抗肿瘤作用及其对AML的重要靶点的影响。方法用MTT法测定阿可拉定在体外对MV-4-11细胞生长抑制作用,流式细胞分析不同浓度阿可拉定对MV-4-11细胞的凋亡和周期的影响,RT-PCR检测阿可拉定对FLT3和STAT5基因表达的影响,采用MV-4-11细胞NOD/SCID小鼠皮下移植瘤模型评价阿可拉定在体内抑制肿瘤生长的作用。结果MTT结果表明,阿可拉定能够明显抑制MV-4-11细胞生长,IC50为7.48μmol·L-1;在体外不同浓度的阿可拉定能够明显诱导MV-4-11细胞凋亡,使G0/G1期细胞比例升高且呈现浓度依赖性;体内实验表明,阿可拉定明显抑制荷瘤小鼠皮下瘤块的生长,且用药时间越早对控制肿瘤进展越有利。结论阿可拉定明显下调STAT5基因的表达,在体外能够明显抑制含FLT3-ITD突变体的MV-4-11细胞生长,在体内也表现出良好的抑制肿瘤生长的作用。

关键词：阿可拉定 STAT5 FLT3 FLT3-ITD 急性髓性白血病 MV-4-11细胞

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ELISA法测定食蟹猴血清中抗BLyS抗体的抗药抗体

ELISA法测定食蟹猴血清中抗BLyS抗体的抗药抗体

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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会

作者：高柳村李黎王绪甲陈方董立厚欧伦宋海峰军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850 军科正源(北京)药物研究有限责任公司北京102206 上海众合医药科技股份有限公司上海201203

目的:建立测定食蟹猴血清中抗BLyS抗体抗药抗体(ADA)的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法并进行验证,用于测定该药的抗药抗体. 方法:在96孔板中包被治疗药物,以捕获食蟹猴血清中的抗药抗体,之后加入生物素标记的治疗药物与被捕获的抗药抗... 详细信息

目的:建立测定食蟹猴血清中抗BLyS抗体抗药抗体(ADA)的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法并进行验证,用于测定该药的抗药抗体. 方法:在96孔板中包被治疗药物,以捕获食蟹猴血清中的抗药抗体,之后加入生物素标记的治疗药物与被捕获的抗药抗体结合,最后用链霉亲和素—辣根过氧化物酶偶联试剂作为检测试剂.以羊抗人的IgG作为对照品,对食蟹猴血清中的抗药抗体进行半定量. 结果:筛选判断阈值SNR为1.158,批内批间精密度小于20％,样品复孔OD值变异小于20％,确证判断阈值为38.4％游离药物抑制率.抗BLyS抗体连续给药13周食蟹猴体内产生抗药抗体. 结论:成功建立、验证并应用该方法测定了抗BLyS抗体的抗药抗体,为该药申请临床实验报批提供数据支持.

关键词： B淋巴细胞刺激因子单克隆抗体药物抗药抗体酶联免疫吸附分析免疫原性

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藜芦与人参配伍连续8周给药对大鼠心脏毒性的影响

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中华中医药杂志 2014年第3期29卷 840-843页

作者：孟浩王宇光肖成荣谭洪玲赵永红马增春梁乾德汤响林高月军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850

目的:比较藜芦与人参配伍及藜芦单用对大鼠心脏毒性的差异。方法:SD大鼠分为空白对照组,藜芦单药组,人参配伍藜芦的低、中、高剂量组;每日灌胃给药1次,连续8周后取大鼠血清,测定血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶... 详细信息

目的:比较藜芦与人参配伍及藜芦单用对大鼠心脏毒性的差异。方法:SD大鼠分为空白对照组,藜芦单药组,人参配伍藜芦的低、中、高剂量组;每日灌胃给药1次,连续8周后取大鼠血清,测定血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)及α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)活性,同时取各组大鼠心脏进行组织病理学检查。结果:配伍低、中剂量组心肌酶学指标与藜芦单药组比较具有显著性差异(P<0.05,P<0.01);各组间心脏重量、心脏系数无统计学差异;配伍后大鼠心脏组织出现明显损伤,可导致心肌散在性坏死和炎细胞浸润灶,量效关系明显。结论:病理观察结合生化酶活性测定结果显示,配伍合用时,低、中、高3个剂量对大鼠心脏毒性影响程度均明显高于藜芦单药,显示藜芦人参配伍合用可明显增强藜芦的心脏毒性,提示临床两药合用应谨慎。

关键词：藜芦人参十八反心脏毒性组织病理学

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复方丹参方对大鼠心脏细胞色素P450酶的影响

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中草药 2014年第1期45卷 75-80页

作者：胡东华王宇光陈志武马增春梁乾德肖成荣谭洪玲汤响林张伯礼高月安徽医科大学药理教研室安徽合肥230032 军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究所北京100850 天津中医药大学天津300193

目的研究复方丹参方及其单味药对大鼠心脏细胞色素P450酶(CYPs)主要亚型的影响。方法雄性SD大鼠随机分为5组,分别用复方丹参方[0.32 g/(kg·d)]、丹参[0.27 g/(kg·d)]、三七[0.05 g/(kg·d)]、冰片[0.003 g/(kg·d)]... 详细信息

目的研究复方丹参方及其单味药对大鼠心脏细胞色素P450酶(CYPs)主要亚型的影响。方法雄性SD大鼠随机分为5组,分别用复方丹参方[0.32 g/(kg·d)]、丹参[0.27 g/(kg·d)]、三七[0.05 g/(kg·d)]、冰片[0.003 g/(kg·d)]或生理盐水连续ig诱导处理28 d,取各组大鼠心脏组织,利用Real Time荧光定量PCR技术检测各组大鼠心脏CYPs各亚型mRNA表达水平的变化。结果与对照组比较,复方丹参方对大鼠心脏CYP1B1、CYP2B1、CYP2E1、CYP4A1和CYP4F4的mRNA表达有下调趋势(P<0.05)。丹参对CYP1A1、CYP1B1、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP2J3、CYP4A1、CYP4F4和CYP4F5的mRNA表达有下调趋势(P<0.05、0.01),而对CYP4A3、CYP4F1和CYP4F6的mRNA表达有上调趋势(P<0.05)。三七对CYP1A1、CYP1B1、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP2J3、CYP4A1、CYP4A3、CYP4F4、CYP4F5和CYP4F6的mRNA表达均有不同程度的抑制趋势(P<0.05、0.01)。冰片对CYP1A1、CYP1B1、CYP2B1、CYP2C11、CYP4A1和CYP4F4的mRNA表达有下调作用(P<0.01)。结论复方丹参方全方对心脏CYPs亚型mRNA表达影响弱于方中各单味药对CYPs的影响,显示复方对CYPs影响可能是各单味药作用的综合和叠加,同时全方及单味药对CYP2家族和CYP4家族的影响显示其对心脏均有双向调节作用。

关键词：复方丹参方细胞色素P450酶丹参三七冰片

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白三烯B4受体2在结肠炎向结肠癌转变过程中mRNA及蛋白表达变化

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国际药学研究杂志 2014年第5期41卷 580-584页

作者：韩春光杜丽胡明孙晓丽原美茹刘永学军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850 海军总医院海战伤救治研究室北京100048

目的通过建立结肠炎相关的结肠癌小鼠动物模型,观察白三烯B4受体2(leukotriene B4 receptor 2,BLT2)在结肠炎向结肠癌转变过程中mRNA和蛋白表达的变化。方法建立ICR小鼠结肠炎相关的结肠癌模型,实验分为正常组和模型组,其中模型组以第1... 详细信息

目的通过建立结肠炎相关的结肠癌小鼠动物模型,观察白三烯B4受体2(leukotriene B4 receptor 2,BLT2)在结肠炎向结肠癌转变过程中mRNA和蛋白表达的变化。方法建立ICR小鼠结肠炎相关的结肠癌模型,实验分为正常组和模型组,其中模型组以第1次给诱导剂作为d0,分别于给药后2、3、5、7、9、13和18周不同时间点处死小鼠,取结肠组织,HE染色观察结肠组织病理学变化,免疫组化法检测小鼠结肠组织BLT2蛋白的表达,实时定量PCR检测小鼠结肠组织BLT2 mRNA的表达。结果组织病理学观察发现随着时间的增长,小鼠结肠由轻度炎症逐渐加重,向异型增生转变,最后转变为结肠癌。免疫组化结果显示BLT2蛋白在正常结肠组织中表达很少,而在炎性病变部位高表达,炎细胞颜色深染;在异型性增生与癌细胞中表达不明显,但在癌组织的间充质及管腔中表达极高。与正常对照组相比,建模后2、13和18周小鼠结肠组织中BLT2 mRNA的表达增强(P<0.05),3、5、7和9周表达明显增强(P<0.01)。结论本实验成功复制了小鼠结肠炎相关的结肠癌模型。BLT2在结肠炎发展的过程中表现出规律性变化。由此推测,BLT2在结肠炎向结肠癌转变过程可能发挥着重要的作用。

关键词：白三烯B4受体2 结肠炎结肠癌

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藜芦碱对HepG2细胞的毒性作用及其机制

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中国药理学与毒理学杂志 2014年第3期28卷 391-397页

作者：刘苍龙王宇光马增春梁乾德肖成荣谭洪玲汤响林高月广西医科大学药学院广西南宁530000 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850

目的研究藜芦碱对人肝癌HepG2的细胞毒作用及其诱导细胞凋亡的机制,为开发安全有效的临床用药提供依据。方法藜芦碱0.1～0.6 g·L^-1作用于HepG2细胞24 h,CCK-8法检测细胞存活率并计算IC50值;藜芦碱0.1～0.5 g·L^-1作用于HepG... 详细信息

目的研究藜芦碱对人肝癌HepG2的细胞毒作用及其诱导细胞凋亡的机制,为开发安全有效的临床用药提供依据。方法藜芦碱0.1～0.6 g·L^-1作用于HepG2细胞24 h,CCK-8法检测细胞存活率并计算IC50值;藜芦碱0.1～0.5 g·L^-1作用于HepG2细胞24 h,观察细胞形态变化,乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测细胞膜损伤;流式细胞仪检测活性氧（ROS）的生成量、线粒体膜电位的变化以及细胞凋亡的变化;实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因p53、Bax、细胞色素c、胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3 mRNA表达。结果藜芦碱0.1～0.6 g·L^-1作用于HepG2细胞可以显著抑制细胞活性（P〈0.05,P〈0.01）,IC50值为0.4 g·L^-1,95%的可信限为0.2558～0.6965 g·L^-1。藜芦碱0.1,0.2,0.3,0.4和0.5 g·L^-1给药组,与正常对照组相比,LDH释放量显著升高（P〈0.05,P〈0.01）,ROS的生成量显著增大（P〈0.05,P〈0.01）,线粒体膜电位显著降低（P〈0.05,P〈0.01）,细胞凋亡率显著升高（P〈0.05,P〈0.01）。实时荧光定量PCR检测显示,凋亡相关基因p53、Bax、细胞色素c、胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3 mRNA表达升高（P〈0.05,P〈0.01）。结论藜芦碱具有潜在的细胞毒性,能抑制HepG2细胞增殖,损伤细胞膜和线粒体进而启动凋亡基因胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3 mRNA表达,这可能是其最终导致细胞凋亡的作用机制。

关键词：藜芦碱 HepG2细胞毒性作用

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基于核酸杂交-酶联桥接分析法在siRNA药物定量分析中的应用

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中国药理学与毒理学杂志 2014年第5期28卷 743-747页

作者：付洁刘潜欧伦孙云娟李梦怡张晶宋海峰军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理学研究室北京100850 湘乡市人民医院临床药学科湖南湘乡411400

目的：考察基于核酸的酶联桥接分析（ELBA）法定量分析生物基质中双链siRNA药物的反义链RNA的可行性，为研究siRNA药物提供可靠的检测方法。方法在LNCap细胞空白基质中采用ELBA方法建立siRNA反义链的标准曲线（5-50000pmol·L-1）。... 详细信息

目的：考察基于核酸的酶联桥接分析（ELBA）法定量分析生物基质中双链siRNA药物的反义链RNA的可行性，为研究siRNA药物提供可靠的检测方法。方法在LNCap细胞空白基质中采用ELBA方法建立siRNA反义链的标准曲线（5-50000pmol·L-1）。LNCap细胞中转染双链siRNA（终浓度100nmol·L-1），24h后取上清、细胞裂解物及RNA诱导沉默复合体（RlSC），根据标准曲线对各组分中反义链RNA浓度进行定量。分别配制含双链siRNA5-25000pmol·L-1或反义siRNA5-25000pmol·L-1的小鼠全血浆样品，用小鼠肝、心、肾和脾生物基质配制反义siRNA3-6250pmol·L-1样品，考察ELBA方法对血浆和生物基质中siRNA反义链进行定量的特异性和定量范围。sc给予C57小鼠LNCap细胞制备移植瘤模型，iv给予双链siRNA药物15nmol·kg-1，30min后ELBA法测定血浆、肿瘤组织、肝、肾、心和脾中反义链siRNA浓度。结果基于ELBA方法对细胞基质中反义链siRNA定量范围为5-50000pmol·L-1，且ELBA可以对转染双链siRNA的细胞裂解物和RlSC复合物中的反义链siRNA进行特异定量。ELBA对血浆中双链siRNA中的反义链无响应，对血浆和组织中siRNA反义链的定量分析范围分别为5-25000pmol·L-1和3-3125pmol·L-1。双链siRNA在前列腺特异膜抗原-适配子递送系统下静脉给药30min后，ELBA检测发现，反义链RNA分布丰度依次为肿瘤组织、肝、肾、血和脾。结论ELBA方法可用于siRNA药物的反义链的定量分析及组织分布研究。

关键词：核酸杂交-酶联桥接分析法 siRNA 药代动力学组织分布

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GCF低表达宫颈癌HeLa细胞系的构建及辐射对其调控IER5基因表达的初步探究

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医学研究杂志 2015年第4期44卷 37-41页

作者：史海敏丁库克周平坤陈丹郭冬梅赵春丽张新辽宁省肿瘤医院妇一科沈阳110042 中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全研究所北京100883 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所放射毒理与辐射危害评价研究室北京100850

目的构建GCF低表达的宫颈癌He La细胞系,在60Coγ射线照射下初步探究其细胞增殖以及调控宫颈癌放射敏感基因IER5的表达。方法经带有荧光标记的GCF低表达的质粒稳定转染He La细胞,G418筛选,蛋白印迹法、实时定量PCR法鉴定得到GCF-shRNA-H... 详细信息

目的构建GCF低表达的宫颈癌He La细胞系,在60Coγ射线照射下初步探究其细胞增殖以及调控宫颈癌放射敏感基因IER5的表达。方法经带有荧光标记的GCF低表达的质粒稳定转染He La细胞,G418筛选,蛋白印迹法、实时定量PCR法鉴定得到GCF-shRNA-He La单克隆细胞系。倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法探究不同剂量照射后的细胞增殖情况,在不同照射剂量下用蛋白印迹法检测GCF-shRNA-He La及对照细胞中IER5蛋白的表达情况。结果成功构建稳定表达的GCF-shRNA-He La单克隆细胞系,显微镜下观察GCF-shRNA-He La细胞比正常He La细胞体积小,细胞间隙较大,其中梭形细胞较多。蛋白印迹法及实时定量PCR验证了GCF-shRNA-He La的蛋白表达及mRNA转录水平均低于对照组(P<0.05)。辐射情况下实验结果显示在同一照射剂量、同一时间下GCF-shRNA-He La细胞比control对照细胞增殖缓慢(P=0.014)。不同剂量照射情况下蛋白印迹法检测He La细胞、control-shRNA-He La与GCF-shRNA-He La细胞IER5蛋白表达情况,结果同一辐照剂量下GCF沉默的细胞系中IER5的表达量比对照细胞高,4Gy照射的GCF-shRNA-HeLa的IER5表达量最高(P<0.05)。结论本实验构建了低表达GCF的He La细胞系,初步探讨GCF作为IER5基因抑制性转录因子的作用。结合临床基因靶向治疗,可寻求可以降低GCF表达的方式,通过上调IER5表达这一双效途径来加速宫颈癌细胞凋亡。

关键词： GCF IER5 HeLa细胞细胞增殖

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表皮生长因子受体-3真核表达质粒的构建及其免疫小鼠抗体滴度的检测

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中国生物制品学杂志 2014年第3期27卷 391-396页

作者：张晶刘强马忠辉万德友王瑜付洁宋海峰安徽医科大学研究生学院安徽合肥230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850

目的构建表皮生长因子受体-3(v-erb-b2 avian erythroblastic leukemia viral oncogene homolog 3,ErbB3)真核表达质粒,并检测其免疫小鼠血清抗体滴度。方法以乳腺cDNA文库为模板,PCR扩增ErbB3全长基因,插入pcDNA3.1-myc/His载体,构建重组表达质粒pcDNA3.1-myc/His-ErbB3。同时以质粒pcDNA3.1-myc/His-ErbB3为模板,PCR扩增ErbB3-ECD和ErbB3-RLD基因,插入pET-28a(+)和pGEX-KG载体中,构建重组表达质粒pET-28a(+)-ECD和pGEX-KG-RLD;将质粒pET-28a(+)-ECD和pGEX-KG-RLD转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定后,经GST柱或镍亲和柱纯化,BCA法定量纯化后蛋白。以60μg质粒pcDNA3.1-myc/His-ErbB3免疫BALB/c小鼠,4次免疫后,经小鼠尾静脉采血,分离血清,以纯化后的ErbB3-ECD和ErbB3-RLD蛋白为包被抗原,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体滴度。结果 3种质粒经双酶切及测序鉴定,证明构建正确。表达的重组蛋白ErbB3-ECD和ErbB3-RLD在相对分子质量约76 000和46 000处可见特异蛋白条带,浓度分别为2和1 mg/ml,免疫后的小鼠血清抗体滴度分别为1︰400和1︰10 000。结论 ErbB3全长质粒免疫BALB/c小鼠后,经ErbB3-ECD和ErbB3-RLD蛋白初步筛选,已获得ErbB3的多克隆抗体,为后期ErbB3单抗的制备以及以ErbB3为靶点的核酸免疫治疗奠定了基础。

关键词：表皮生长因子受体核酸免疫多克隆抗体基因治疗

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分泌型毕赤酵母人全长抗体库的构建与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第1期30卷 58-62页

作者：刘强张晶张小爱杨小盼华玲高新付洁宋海峰军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的基于N-糖基化部分改造毕赤酵母构建表达分泌型人全长抗体库。方法基于酵母分泌型表达载体pPICZαA构建双启动子串联表达重链和轻链恒定区基因的载体pPICZαA-C H-C L,经基因序列分析和Western blot分析验证。设计44对简并引物经逆... 详细信息

目的基于N-糖基化部分改造毕赤酵母构建表达分泌型人全长抗体库。方法基于酵母分泌型表达载体pPICZαA构建双启动子串联表达重链和轻链恒定区基因的载体pPICZαA-C H-C L,经基因序列分析和Western blot分析验证。设计44对简并引物经逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从人外周血单个核细胞(PBMC)中扩增获得轻链可变区V L和重链可变区V H基因库。通过PCR将其插入上述恒定区表达载体构建全长抗体表达库pPICZαA-V H-C H-V L-C L。将该库电转化N-糖基化部分改造后宿主菌株GS115Y。随机挑取20个平板克隆进行菌液PCR鉴定、基因分析,并提交IgBLAST-imgt数据库鉴定抗体库正确性与多样性。结果获得表达重链和轻链恒定区的表达载体pPICZαA-C H-C L,并在此基础上初步获得全长抗体表达库pPICZαA-V H-C H-V L-C L,库容量为105。结论成功构建了分泌型N-糖基化毕赤酵母人全长抗体库。

关键词：毕赤酵母人全长抗体 N-糖基化改造抗体库分泌表达

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