检索结果-内蒙古大学图书馆

中国药理学通报 2014年第10期30卷 1357-1361页

作者：安映红贾娜李琳娜韩苏杨德宣袁守军空军总医院临床检验中心生化室北京100142 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理北京100850 南开大学药学院天津300071

目的探讨TP对肿瘤相关的趋化因子巨噬细胞炎性蛋白1-α(MIP-1α)表达的影响。方法使用RT-PCR的试验方法,检测小鼠巨噬细胞Ana-1细胞和肿瘤组织中提取的巨噬细胞中MIP-1α的表达;建立小鼠S180肉瘤细胞皮下移植瘤双瘤模型,待肿瘤体积生长... 详细信息

目的探讨TP对肿瘤相关的趋化因子巨噬细胞炎性蛋白1-α(MIP-1α)表达的影响。方法使用RT-PCR的试验方法,检测小鼠巨噬细胞Ana-1细胞和肿瘤组织中提取的巨噬细胞中MIP-1α的表达;建立小鼠S180肉瘤细胞皮下移植瘤双瘤模型,待肿瘤体积生长至约250 mm3时,将其中一侧建立术后残瘤模型,并开始以8 mg·kg-1剂量的TP给药,隔天1次,给药4次后,分离肿瘤组织,免疫组化检测MIP-1α的表达。结果不同浓度TP对小鼠TAMs的MIP-1α表达较空白对照组明显减少,并呈剂量依赖性;体内试验中,TP处理组的荷瘤小鼠的肿瘤组织MIP-1α与对照组相比表达明显降低,接近于阳性药环磷酰胺组;但是MIP-1α在小鼠Ana-1细胞和TAMs中的mRNA表达量差异没有统计学意义;不同浓度TP对小鼠Ana-1细胞的MIP-1α表达差异也没有统计学意义。结论 TP不能影响小鼠Ana-1细胞系的MIP-1α表达,但TP对肿瘤组织中的巨噬细胞MIP-1α的表达有明显影响;MIP-1α有可能是TP抗癌作用机制的新靶点。

关键词：免疫增强剂 T肽(TP) 巨噬细胞炎性蛋白1-α(MIP-1α) 术后残瘤模型肿瘤相关巨噬细胞(TAMs) 双瘤模型

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中药安全性关键技术研究与应用

中药安全性关键技术研究与应用

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第二届岐黄论坛

作者：高月军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室

中药安全性是中医药现代化和国际化的重大科学问题,毒性成分复杂,致毒机制不清,综合系统的技术平台缺乏是制约中药产业的瓶颈.本项目历时10余年,在国家多个重大项目的资助下,最早创建了中药安全性研究关键技术平台并成功用于中药的毒性... 详细信息

中药安全性是中医药现代化和国际化的重大科学问题,毒性成分复杂,致毒机制不清,综合系统的技术平台缺乏是制约中药产业的瓶颈.本项目历时10余年,在国家多个重大项目的资助下,最早创建了中药安全性研究关键技术平台并成功用于中药的毒性成分确认、致毒机制解析、经典理论实证、创新药物研发,促进了中药毒理学的学科发展.主要创新点有:(1)率先创建了系统配套的中药安全性研究关键技术平台;(2)系统揭示了常见不良反应中药产生毒性的物质基础、代谢特征、配伍禁忌和毒性机制;(3)揭示了中药毒性的分子生物学机制;(4)实证了中药配伍禁忌的经典理论;(5)支撑了创新药物的研发并研制了7个中药新药。

关键词：中药安全性毒性成分致毒机制药物研发

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基于PXR受体的天然产物筛选及相关药理毒理研究

基于PXR受体的天然产物筛选及相关药理毒理研究

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中国毒理学会第四届中青年学者科技论坛

作者：王宇光陆倍倍张娴勰周建明刘浩生胡东华马增春梁乾德汤响林肖成荣谭洪玲高月军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室安徽医科大学

目的孕烷X受体(PXR)作为关键的转录因子调控CYP3A基因的诱导表达,在分子水平上揭示了PXR保护机体免受外源性物质的机制,同时也揭示了一类最主要的药物相互作用模式。同时PXR除了在药物代谢及药物相互作用中扮演重要角色外,越来越多的研... 详细信息

目的孕烷X受体(PXR)作为关键的转录因子调控CYP3A基因的诱导表达,在分子水平上揭示了PXR保护机体免受外源性物质的机制,同时也揭示了一类最主要的药物相互作用模式。同时PXR除了在药物代谢及药物相互作用中扮演重要角色外,越来越多的研究显示PXR及其调控的靶基因在维持机体内环境稳态,发挥重要生理功能方面扮演重要角色。因此有必要研究中药及天然产物对细胞色素P450酶调节及相关药理作用研究,为挖掘新的药理作用途径提供新的线索。方法通过构建新颖的双远端增强子和近端启动子线性串联的分泌型荧光素酶报告基因并稳定转染HepG2细胞,实现直接检测上清即能预测化合物的PXR激活及CYP3A4诱导或抑制能力。对150种中药单体化合物进行PXR激活特性筛选,挑选出具有明显激活作用的中药单体,进一步对其肝脏保护和治疗溃疡性结肠炎药理毒理机制与PXR激活的关系进行了研究。采用RT-PCR及Western-blot技术分别用于检测中药单体对CYP3A4 mRNA及蛋白表达的影响;瞬时共转染荧光素酶报告基因和凝胶电泳迁移技术(EMSA)用于对CYP3A4诱导表达调控机制的研究;利用过量石胆酸造成小鼠肝脏损伤的病理模型观察具备PXR激活特性天然产物对肝脏损伤的保护作用。采用葡聚糖硫酸钠(DSS)造炎症性肠病模型,观察探讨青蒿素治疗炎症性肠病的分子机制。结果该稳定细胞株对RIF响应良好,EC50为2.51μM,酮康唑(KCZ)10μM与RIF5μM共处理明显削弱了RIF对PXR的激活效应。筛选到化合物甘草酸能浓度和时间依赖性地使HepG2细胞中CYP3A4 mRNA和蛋白的表达上调。报告基因和EMSA结果显示,甘草酸可通过直接激活PXR受体,进而诱导CYP3A4基因及蛋白表达的增加。整体动物实验的结果显示,甘草及甘草酸各剂量组能有效逆转LCA所致肝损伤小鼠外周血ALT及AST的升高,组织学检查发现,小鼠在给予甘草和甘草酸后,肝细胞的坏死程度得到明显改善,而甘草和甘草酸对LCA所致小鼠肝损伤的保护作用可能与其调控LCA合成及代谢的关键基因SHP,CYP7A1及CYP3A11的表达有关。青蒿素在细胞水平上可浓度和时间依赖性的诱导CYP3A4和PXR mRNA表达。EMSA实验,结果提示PXR与CYP3A4转录调控区的结合为特异性结合,也说明青蒿素对CYP3A4的诱导效应始于PXR与CYP3A4调控区的结合阶段。青蒿素的低剂量、中剂量和高剂量可以减轻炎症性肠病的临床症状。病理切片结果表明青蒿素可以改善溃疡情况,有一定的好转。提示青蒿素对DSS造成的炎症性肠病模型有治疗效果。青蒿索作为外源性配体有可能通过激活PXR受体进而通过诱导CYP3a11、CYP3a13、GSα1和MDR1α,而减轻炎症性肠病症状,同时抑制CCR2、ICAM、IL-1β、IL-6、IL-10、iNOS、MCP-1和TNFa mRNA的表达,而达到治疗目的。结论本研究选择PXR,CYP3A作为主要的作用靶点,建立基于PXR-CYP3A通路的药物相互作用快速筛选细胞筛选模型符合建立早期、灵敏、快速、可靠的药物安全性评价的新技术、新方法和新模型,有利于提高药物安全性评价的准确性。筛选到PXR激动剂甘草酸具有对CYP3A4酶的诱导效应,甘草调和诸药的配伍机制可能与其参与对细胞色素P450 3A4的诱导表达进而使与其同服的其它中药或中药复方中的毒性成分的代谢加速而起到缓和药性,进而达到调和诸药的目的,而对CYP3A4的诱导表达作用可能是通过甘草-PXR-CYP3A4核受体激活途径来发挥效应的。青蒿素可以通过激活PXR而诱导CYP3A4的表达。在DSS造炎症性肠病模型上,PXR受体是治疗炎症性肠病的关键因子,当一种化合物能诱导PXR的表达就具有潜在的治疗该疾病的能力,而青蒿素可能就是通过激活PXR从而达到治疗炎症性肠病的目的。

关键词：孕烷X受体 CYP3A4 肝脏损伤,溃疡性结肠炎

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CHD4蛋白截短体融合蛋白的表达、纯化和鉴定

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西安交通大学学报（医学版） 2014年第1期35卷 12-15页

作者：徐涛张金莉曾妍王攀郎慧芳万传君顾永清军事医学科学院放射与辐射医学研究所放射毒理与辐射危害评价研究室北京100850 石河子大学医学院生化教研室新疆石河子832000 南通大学附属医学院消化科实验室江苏南通226000 驻马店卫生学校微生物免疫教研室河南驻马店463000

目的构建CHD4/Mi-2β基因的截短体原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达并对GST融合蛋白进行纯化和初步鉴定。方法采用PCR方法扩增CHD4/Mi-2β的染色质调节区(CHD4-C)、解螺旋酶模序(CHD4-H)及DNA结合区(CHD4-D)基因片段,将目的基因... 详细信息

目的构建CHD4/Mi-2β基因的截短体原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达并对GST融合蛋白进行纯化和初步鉴定。方法采用PCR方法扩增CHD4/Mi-2β的染色质调节区(CHD4-C)、解螺旋酶模序(CHD4-H)及DNA结合区(CHD4-D)基因片段,将目的基因片段插入原核表达载体pGEX-5T构建带GST标签的重组质粒,阳性克隆行DNA序列测定。IPTG诱导GST-CHD4-C、GST-CHD4-D和GST-CHD4-H原核表达,谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白,并对融合蛋白Western blot鉴定。结果构建了3个CHD4/Mi-2β基因的截短体重组质粒;IPTG诱导显示,GST-CHD4-C、GST-CHD4-D和GST-CHD4-H融合蛋白主要以可溶性蛋白形式在细胞裂解液上清中表达,表达产物的相对分子质量分别为130、110、90ku。谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白,纯化产物的纯度最高可达94.5%。Western blot证实各融合蛋白与抗GST单克隆抗体发生特异性结合反应,分子质量与估计值相符,提示为GST融合表达的CHD4/Mi-2β截短体蛋白。结论成功纯化了较高纯度的GST-CHD4-C、GST-CHD4-D和GST-CHD4-H融合蛋白,为进一步研究CHD4蛋白在染色质重塑中的作用奠定了实验基础。

关键词： CHD4 Mi-2β pGEX ST 融合蛋白蛋白表达纯化

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青蒿素通过激活PXR诱导CYP3A4的表达及对DSS诱导的炎症性肠病的保护作用

青蒿素通过激活PXR诱导CYP3A4的表达及对DSS诱导的炎症性肠病的保...

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第二届岐黄论坛

作者：王宇光胡东华谭洪玲肖成荣马增春梁乾德汤响林高月军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850 安徽医科大学药理学教研室安徽合肥230032

本实验选择青篙素作为研究对象，以葡聚糖硫酸钠(Dextran sodium sulfate DSS) (MW 36-50 KDa)造炎症性肠病模型，初步探讨青篙素治疗炎症性肠病的分子机制，为进一步研究青篙素功能提供实验依据和为更进一步考察PXR诱导化合物在治炎症... 详细信息

本实验选择青篙素作为研究对象，以葡聚糖硫酸钠(Dextran sodium sulfate DSS) (MW 36-50 KDa)造炎症性肠病模型，初步探讨青篙素治疗炎症性肠病的分子机制，为进一步研究青篙素功能提供实验依据和为更进一步考察PXR诱导化合物在治炎症性肠病的作用提供依据。

关键词：炎症性肠病青篙素葡聚糖硫酸钠分子机制

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人参水提物在Caco-2模型的吸收特征

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中国药理学通报 2013年第12期29卷 1711-1716页

作者：尤青马增春谭洪玲王宇光梁乾德肖成荣汤响林高月中南大学药学院湖南长沙410013 军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究室北京100850

目的建立Caco-2细胞单层模型,探讨人参水提物的吸收特征。方法将Caco-2细胞以1×105个/cm2的密度接种于Millicell小室,培养21 d,以TEER值、阳性对照药荧光黄和普萘洛尔的P app值来评价模型的完整性、紧密性和通透性。进行人参水提物... 详细信息

目的建立Caco-2细胞单层模型,探讨人参水提物的吸收特征。方法将Caco-2细胞以1×105个/cm2的密度接种于Millicell小室,培养21 d,以TEER值、阳性对照药荧光黄和普萘洛尔的P app值来评价模型的完整性、紧密性和通透性。进行人参水提物AP-BL和BL-AP两个方向的转运实验,用HPLC/MS对标志性成分进行分析,计算P app、外排比(Efflux ratio)和转运量。结果 TEER值和阳性对照药的P app值均达到要求。水提物中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Ro的P app AP-BL分别为(4.97±1.28)×10-6、(3.88±0.93)×10-6、(2.54±0.18)×10-6、(2.51±0.44)×10-6、(2.21±0.46)×10-6和(0.65±0.09)×10-6cm·s-1,P app BL-AP分别为(4.61±0.67)×10-6、(4.32±0.83)×10-6、(3.05±0.37)×10-6、(3.53±0.27)×10-6、(3.24±0.24)×10-6和(1.45±0.16)×10-6cm·s-1。人参皂苷Rg1单体的P app AP-BL为(0.39±0.02)×10-6cm·s-1,P app BL-AP为(0.47±0.01)×10-6cm·s-1。结论 Caco-2细胞单层模型建立成功。水提物中三醇型人参皂苷的吸收优于二醇型,吸收一般;齐墩果烷型人参皂苷Ro吸收差,可能存在主动外排作用。水提物中其它成分可促进人参皂苷Rg1的吸收。

关键词： Caco-2细胞人参水提物人参皂苷Rg 人参皂苷 Rf 人参皂苷Rb 人参皂苷Rc 人参皂苷Ro 人参皂苷Rb

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血管内皮生长因子全长抗体在毕赤酵母中的表达与活性鉴定

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生物技术通讯 2014年第4期25卷 492-496页

作者：陈薇张晶刘强华玲刘蕴慧莫嫣娉高新付洁宋海峰解放军医学院病理科北京100853 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850 安徽医科大学研究生学院安徽合肥230032 解放军第309医院北京100091

目的:构建血管内皮生长因子(VEGF)全长抗体表达载体pPICZαA-VH-CH-VL-CL,评价其在毕赤酵母中的表达产物与抗原的结合特性,及其抑制细胞增殖的活性。方法:利用基因合成分别获得VEGF抗体CL和CH序列,分别构建pPICZαA-CH和pPICZαA-CL重... 详细信息

目的:构建血管内皮生长因子(VEGF)全长抗体表达载体pPICZαA-VH-CH-VL-CL,评价其在毕赤酵母中的表达产物与抗原的结合特性,及其抑制细胞增殖的活性。方法:利用基因合成分别获得VEGF抗体CL和CH序列,分别构建pPICZαA-CH和pPICZαA-CL重组质粒,再利用同尾酶特性构建双启动子表达盒的重组pPICZαA-CH-CL载体,用Westen印迹对其进行表达鉴定后将VH和VL序列插入该载体,获得VEGF的全长抗体表达载体pPICZαA-VH-CH-VL-CL;通过膜筛和ELISA进行菌株筛选,并对VEGF抗体表达阳性菌株进行小量表达和纯化,采用CCK-8法对其抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的活性进行初步评价。结果:获得表达轻、重链的VEGF抗体表达载体,ELISA实验证明pPICZαA-VH-CH-VL-CL具有一定的VEGF抗原结合特性;体外增殖实验表明,该抗体可以以剂量依赖性抑制HUVEC增殖。结论:在毕赤酵母中表达、纯化了具有一定功能活性的VEGF全长抗体,为后续比较研究酵母糖基化改造对VEGF抗体的药效学和药代学的影响提供了基础。

关键词：血管内皮生长因子毕赤酵母抗体肿瘤增殖

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三七总皂苷对H9c2细胞P450酶mRNA表达的影响

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中国药理学通报 2013年第11期29卷 1563-1567页

作者：胡东华王宇光陈志武马增春梁乾德肖成荣谭洪玲汤响林高月军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究室北京100850 安徽医科大学药理学教研室安徽合肥230032

目的研究三七总皂苷(PNS)对H9c2心肌细胞P450酶主要亚型表达的影响。方法不同浓度的PNS处理H9c2细胞48h,MTS法检测细胞的存活率,测定LDH释放率评价细胞损伤程度,Real Time PCR法检测PNS各处理组对CYP450酶各亚型mRNA表达的变化。结果 MT... 详细信息

目的研究三七总皂苷(PNS)对H9c2心肌细胞P450酶主要亚型表达的影响。方法不同浓度的PNS处理H9c2细胞48h,MTS法检测细胞的存活率,测定LDH释放率评价细胞损伤程度,Real Time PCR法检测PNS各处理组对CYP450酶各亚型mRNA表达的变化。结果 MTS结果表明随着PNS浓度的增大,细胞的存活率逐渐降低并呈浓度依赖性,IC50(5.28±0.08)g·L-1,同时LDH的释放率也逐渐增大。在对P450酶mRNA表达影响层面,PNS使CYP2J3、CYP4A1、CYP4A2、CYP4F1和CYP4F5表达上调(P<0.05或P<0.01);对CYP2C11、CYP4A3和CYP4F4表达下调(P<0.05或P<0.01),但高浓度时(5 g·L-1)对CYP4A3和CYP4F4有上调作用(P<0.01)。结论 PNS对心脏和血管有一定的保护作用,高浓度(5 g·L-1)的PNS对H9c2细胞有一定细胞毒作用,因此使用PNS时应注意用药剂量,使其发挥疗效而尽量减少药物不良反应的发生。

关键词： PNS 血栓通 H9c2 CYP450 细胞毒性用药剂量

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异鼠李素和阿魏酸在大鼠原代肝细胞的肝摄取性质

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中国药理学与毒理学杂志 2013年第3期27卷 411-417页

作者：沈国林庄笑梅谭妍原梅李桦高月军事医学科学院毒物药物研究所药物代谢研究室北京100850 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850

目的建立大鼠原代肝细胞摄取模型,评价异鼠李素和阿魏酸的肝细胞摄取性质。方法应用RT-qPCR技术测定0,0.5,2和4h悬浮培养原代大鼠肝细胞上摄取转运体有机阴离子转运多肽(Oatp)1和Oatp2,有机阴离子转运体(Oat)2和有机阳离子转运体(Oct)1... 详细信息

目的建立大鼠原代肝细胞摄取模型,评价异鼠李素和阿魏酸的肝细胞摄取性质。方法应用RT-qPCR技术测定0,0.5,2和4h悬浮培养原代大鼠肝细胞上摄取转运体有机阴离子转运多肽(Oatp)1和Oatp2,有机阴离子转运体(Oat)2和有机阳离子转运体(Oct)1的mRNA表达。应用已知底物非索非那定、普伐他汀、甲氨蝶呤和阿昔洛韦评价转运体的功能。将已知底物或受试药物在4℃和37℃分别与肝细胞孵育不同时间,LC-MS/MS定量测定细胞摄取量,考察温度和时间对底物摄取的影响。由浓度依赖的摄取实验,计算得到Km、Vmax和主动摄取率等参数。在肝细胞模型上,将转运体的阳性抑制剂与异鼠李素10μmol·L-1和阿魏酸50μmol·L-1共孵育2min,观察抑制剂对受试药转运的影响。结果悬浮培养大鼠原代肝细胞上表达有转运体Oatp1,Oatp2,Oat2和Oct1,并能介导已知底物的主动摄取。转运体的mRNA表达水平随着时间的延长而快速下降,4h的表达水平约为0h的10%。转运体对已知底物摄取活性也随时间呈下降趋势,但程度显著低于表达水平,4h的活性约为0h的28.7%～71.4%。在经验证的肝细胞模型上,异鼠李素的4℃和37℃摄取无显著差异,主动转运率为14.6%。阿魏酸在37℃的摄取量显著高于4℃,主动转运率为84.1%;Oct阳性抑制剂奎尼丁100μmol·L-1能显著抑制阿魏酸的肝摄取,抑制率为64.9%。结论成功建立了大鼠原代肝细胞摄取模型,并用底物进行了验证。异鼠李素通过被动扩散进入肝细胞,阿魏酸的肝细胞摄取则以主动转运为主。

关键词：异鼠李素阿魏酸肝细胞生物转运主动

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毕赤酵母电转化方法的探索

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生物技术通报 2013年第12期29卷 156-161页

作者：杨小盼董立厚万德有华玲刘蕴慧高新军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850

旨在通过优化转化条件提高毕赤酵母电转化效率。采用不同的酵母细胞预处理液成分及浓度、不同的细胞体积、不同的质粒DNA用量,在不同的电压下进行转化,计数转化后在平板上产生的克隆数,通过计算每微克DNA获得的克隆数来评价转化效率。... 详细信息

旨在通过优化转化条件提高毕赤酵母电转化效率。采用不同的酵母细胞预处理液成分及浓度、不同的细胞体积、不同的质粒DNA用量,在不同的电压下进行转化,计数转化后在平板上产生的克隆数,通过计算每微克DNA获得的克隆数来评价转化效率。研究表明,用0.1 mol/L LiAc,0.01 mol/L DTT,0.6 mol/L sorbitol,0.01 mol/L Tris-HCl处理细胞可获得最佳转化效率;质粒DNA用量为10 ng时转化效率最高。使用0.1 cm电转杯,采用0.6 kV电压,对80μL细胞进行转化,转化效率最高,可达9.6×105/μg DNA;而使用0.2 cm电转杯,采用1.1 kV电压,对150μL细胞进行转化,转化效率最高,可达8.8×105/μg DNA。采用优化后条件,用10μg pPIC9K质粒DNA转化GS115,可获得1.1×106个转化子。此外通过对3种常用毕赤酵母载体转化效率的比较,发现pPIC9K的转化效率约是pPICZαA的160倍,是pGAPZαA的2 900倍。采用优化后的转化条件,毕赤酵母的电转化效率从103-4提升到了106。采用单个电转杯最多可获得1.1×106个转化子。

关键词：毕赤酵母电转化转化效率

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