月季(Rosa spp.)是一种具有重要价值的观赏植物,花色是其最重要的观赏性状之一。为了解析月季花色形成的分子机理,本研究以‘云蒸霞蔚’和‘太阳城’的杂交后代为试验材料,探索类黄酮和类胡萝卜素的提取与测定方法,并且对‘梅朗口红’花瓣中类黄酮和类胡萝卜素进行定性定量分析。结果表明:(1)类黄酮提取的最佳浸提剂为甲醇-水-甲酸-三氟乙酸(70∶27∶2∶1, V/V),采用超声波辅助提取,流动相为0.5%甲酸水溶液(A)和乙腈(B),洗脱梯度为0 min 5%B,5 min 10%B,30 min 19%B,50 min 40%B,50.01~60 min 5%B;(2)类胡萝卜素提取的最佳浸提剂为甲醇(含0.1%BHT),需要皂化,最佳复溶溶剂为甲醇-甲基叔丁基醚(1∶1,V/V,含0.1%BHT);(3)‘梅朗口红’花瓣中总共检测到1种花青苷、8种黄酮醇和6种类胡萝卜素,其中花青苷含量最高,黄酮醇次之,类胡萝卜素最低,开花过程中色素含量变化显著,矢车菊3,5-双氧葡萄糖苷的含量先升高后降低,在S3时期,最大值为1 705.90μg/g FW,槲皮素3-O-鼠李糖苷、槲皮素总含量以及黄酮醇总含量先升高后降低,在S2时期达到最大值,槲皮素7-O-鼠李糖苷和山奈酚总含量逐渐下降;(4)相关分析显示,明度L*与花青苷含量极显著负相关,色相a*与花青苷含量显著正相关。本研究不仅为月季花色的分子育种提供帮助,同时也为月季花瓣中功能物质的开发提供借鉴。
分别用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶制备山杏仁蛋白酶水解物,通过格里斯实验和ELISA方法,研究山杏仁蛋白酶水解物对巨噬细胞产生炎症因子NO、TNF-α和IL-1β的影响。结果表明山杏仁木瓜蛋白酶水解物显著抑制炎症因子NO、TNF-α和IL-1β产生,其抑制率分别为62%、11%和21%,而其它四种蛋白酶水解物没有显示明显的抗炎作用。将山杏仁木瓜蛋白酶水解物分离制备为5~10,3~5,1~3 k Da和小于1 k Da等不同分子量组分,进一步研究其抗炎活性,结果表明小于1 k Da低分子量组分具有较高抗炎活性,其对NO、TNF-α和IL-1β产生的抑制率分别为81%、59%和46%。分析氨基酸组成与含量结果表明,抗炎活性较强的小于1 k Da组分中,疏水性氨基酸和亲水性氨基酸含量均较高,同时谷氨酸、天冬氨酸和精氨酸等具有抗炎作用的氨基酸含量也较高。以上结果表明,山杏仁蛋白被木瓜蛋白酶水解后能够释放抗炎生物活性肽,该活性肽的分子量小于1 k Da,可能是具有两亲性的结构。
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