检索结果-内蒙古大学图书馆

GST-pull down技术筛选毛白杨天冬氨酸蛋白酶PtoAED3互作蛋白

北京林业大学学报 2021年第5期43卷 64-74页

作者：赵杰王兵骆梅莫黎杰李慧刘迪陆海北京林业大学生物科学与技术学院北京林业大学林木育种国家工程实验室北京100083

【目的】天冬氨酸蛋白酶属于蛋白水解酶家族,为了解析毛白杨天冬氨酸蛋白酶PtoAED3在植物生长发育中的分子调节机制,利用GST-pull down联合质谱技术,对PtoAED3的互作蛋白进行鉴定和分析。【方法】通过同源克隆获得了毛白杨PtoAED3的CDS... 详细信息

【目的】天冬氨酸蛋白酶属于蛋白水解酶家族,为了解析毛白杨天冬氨酸蛋白酶PtoAED3在植物生长发育中的分子调节机制,利用GST-pull down联合质谱技术,对PtoAED3的互作蛋白进行鉴定和分析。【方法】通过同源克隆获得了毛白杨PtoAED3的CDS序列,构建含GST标签的原核表达载体pGEX-4T-PtoAED3。使用IPTG诱导GST-PtoAED3融合蛋白表达后,利用GST标签对PtoAED3蛋白进行纯化,纯化后的PtoAED3蛋白与毛白杨植株总蛋白共孵育,应用GST-pull down技术获得毛白杨总蛋白中与PtoAED3蛋白相互作用的候选蛋白,随后通过质谱技术对筛选到的候选蛋白进行鉴定与分析。【结果】通过质谱技术鉴定这些蛋白的氨基酸序列,共筛选出128个与PtoAED3特异性结合的候选互作蛋白,这些互作蛋白涉及到细胞进程、代谢过程、应激反应、生物调节、发育过程等多个生物学过程。【结论】通过GSTpull down实验联合质谱技术,筛选出毛白杨中与PtoAED3互作的候选蛋白,为研究毛白杨PtoAED3与底物或复合物的互作及其影响毛白杨生长发育的分子调节机制提供了初步方向。

关键词： PtoAED3 GST-pull down 质谱互作蛋白

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毛白杨植物络合素合酶(PtPCS)基因克隆及其表达研究

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分子植物育种 2012年第2期10卷 174-183页

作者：柳玉霞王晓桐苏旭东代亮张志毅徐吉臣北京林业大学林木育种国家工程实验室北京100083

植物络合素(PCs)是植物细胞中一类螯合重金属离子的多肽,对细胞解毒和重金属的富集有重要的作用。植物络合素合酶(PCS)是合成PCs途径中的关键酶。本研究克隆了毛白杨的植物络合素合酶基因PtPCS,该基因cDNA序列全长1512bp,可编码503个氨... 详细信息

植物络合素(PCs)是植物细胞中一类螯合重金属离子的多肽,对细胞解毒和重金属的富集有重要的作用。植物络合素合酶(PCS)是合成PCs途径中的关键酶。本研究克隆了毛白杨的植物络合素合酶基因PtPCS,该基因cDNA序列全长1512bp,可编码503个氨基酸;与其它8种植物同源基因比对显示,它们的氨基酸序列相似性在67%～74.1%之间;构建进化树发现,这9种植物明显的分为两大分支,并且两大分支PCS蛋白的高级结构显示出明显的差异,一种呈月牙状,一种为伞状,重金属超富集植物均为月牙状结构。对毛白杨在不同镉浓度处理下PtPCS基因的表达情况分析发现,毛白杨根、茎、叶中PtPCS基因均表现出先升高后缓慢降低的表达趋势,并且在同一镉浓度处理下,毛白杨不同器官PtPCS基因的表达具有规律性,即根表达量最强,茎次之,叶片最弱。研究结果不仅为植物育种提供了重要的基因资源,也为剖析毛白杨的镉抗性和富集特性的研究奠定了良好的基础。

关键词：毛白杨植物络合素合酶(PCS) 基因克隆基因结构基因表达

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一种改良的云杉针叶总RNA提取方法

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分子植物育种 2014年第3期12卷 554-561页

作者：刘洁江静怡徐吉臣北京林业大学林木育种国家工程实验室北京100083

云杉(Picea)是一种重要的绿化和用材树种。根据云杉的特点,本研究提出了改良的云杉RNA提取方法即SDS酚-LiCl法,以不同种云杉(青杄,白杄和红皮)的针叶为试验材料,采用TRIzol法、CTAB法、改进的SDS酚法和SDS酚-LiCl法提取RNA,并进行了质... 详细信息

云杉(Picea)是一种重要的绿化和用材树种。根据云杉的特点,本研究提出了改良的云杉RNA提取方法即SDS酚-LiCl法,以不同种云杉(青杄,白杄和红皮)的针叶为试验材料,采用TRIzol法、CTAB法、改进的SDS酚法和SDS酚-LiCl法提取RNA,并进行了质量验证。结果表明:TRIzol法不能提取云杉针叶总RNA;CTAB法和改进的SDS酚法提取的RNA质量少,并存在不同程度的多糖、多酚和DNA污染。SDS酚-LiCl法适当增加了提取液中SDS、PVP以及β-巯基乙醇的浓度,结合酸性条件、高盐溶液(3 mol/L NaAc)和LiCl等减少DNA、多糖污染的步骤,最终提取的RNA质量好、得率高。进一步反转录后,利用特异引物进行扩增验证,发现扩增的片段条带清晰,得率高,片段大小符合预期。研究结果表明,SDS酚-LiCl法可以较好的提取云杉RNA并进行后续的基因表达及转录组研究,为推动云杉在转录水平上的研究奠定了基础。

关键词：云杉 RNA 多糖多酚 DNA SDS酚-LiCl法

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凤丹愈伤组织培养体系建立及丹皮酚含量测定

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天然产物研究与开发 2020年第7期32卷 1182-1189页

作者：王若馨纪楠楠王华芳北京林业大学林木育种国家工程实验室北京林业大学生物科学与技术学院北京100083

本文旨在建立凤丹(Paeonia ostii ***)愈伤组织培养及制取丹皮酚的技术体系,为细胞工程制药提供技术基础。凤丹去皮种子以70%乙醇(V/V)浸泡2.0 min和有效氯1.0%的二氯异氰尿酸钠溶液浸泡20 min,去污染率高达97.78%;剥取种胚接种在含6-... 详细信息

本文旨在建立凤丹(Paeonia ostii ***)愈伤组织培养及制取丹皮酚的技术体系,为细胞工程制药提供技术基础。凤丹去皮种子以70%乙醇(V/V)浸泡2.0 min和有效氯1.0%的二氯异氰尿酸钠溶液浸泡20 min,去污染率高达97.78%;剥取种胚接种在含6-苄氨基嘌呤1.5 mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸2.0 mg/L的MS培养基上,愈伤组织诱导率达90.00%;愈伤组织在含6-苄氨基嘌呤1.8 mg/L、萘乙酸0.6 mg/L、蔗糖30 g/L、水解酪蛋白0.4 g/L、琼脂5 g/L、pH 7.3的改良WPM培养基上暗培养25天,增殖倍数达3.53,褐化率为11.78%;基于天然产物丹皮酚含量和愈伤组织生长曲线,培养25天时丹皮酚含量达到最高,为最佳收获期。

关键词：凤丹愈伤组织增殖次生代谢物丹皮酚

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银杏扩展蛋白基因的鉴定与特征分析

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分子植物育种 2021年第6期19卷 1741-1749页

作者：王瑞雪杨锐霞尹鹏刘家福徐吉臣北京林业大学林木育种国家工程实验室北京100083

扩展蛋白是植物细胞壁重要的组成部分,在植物生长发育和逆境抗性等方面发挥着重要的作用。为探讨银杏(Ginkgo biloba)中扩展蛋白基因家族的组成和特征,本研究利用扩展蛋白的保守结构域,从银杏基因组中鉴定了28个扩展蛋白基因,包括20个E... 详细信息

扩展蛋白是植物细胞壁重要的组成部分,在植物生长发育和逆境抗性等方面发挥着重要的作用。为探讨银杏(Ginkgo biloba)中扩展蛋白基因家族的组成和特征,本研究利用扩展蛋白的保守结构域,从银杏基因组中鉴定了28个扩展蛋白基因,包括20个EXPA基因、1个EXPB基因、4个EXLA基因和3个EXLB基因。银杏扩展蛋白基因的编码区长度在684~837 bp之间,编码227~278个氨基酸的蛋白质,具有保守的功能域、基序和氨基酸。不同亚家族基因在序列一致性、保守基序及内含子-外显子结构组成上有所不同,呈现亚家族特征。密码子分析显示,扩展蛋白基因具有密码子使用偏性,包含8个高频密码子。银杏扩展蛋白基因信息将有助于理解其在银杏基因组中的地位和作用,为深入研究功能提供基础。

关键词：银杏(Ginkgo biloba) 扩展蛋白亚家族密码子

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不同地点白杨杂种无性系生长和适应性表现分析和评价

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北京林业大学学报 2013年第6期35卷 7-14页

作者：赵曦阳李颖赵丽吴培莉张志毅东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室北京林业大学林木育种国家工程实验室吉林省抚松县露水河林业局

以不同地点30个白杨杂种无性系为材料，对其2—4年生树高、胸径和材积进行调查分析。结果表明：白杨杂种无性系树高、胸径和材积在无性系间、地点间、无性系和地点的交互作用间差异均达极显著水平；树高、胸径和材积的表型变异系数、遗... 详细信息

以不同地点30个白杨杂种无性系为材料，对其2—4年生树高、胸径和材积进行调查分析。结果表明：白杨杂种无性系树高、胸径和材积在无性系间、地点间、无性系和地点的交互作用间差异均达极显著水平；树高、胸径和材积的表型变异系数、遗传变异系数及重复力均随着树龄的增加而增大，且遗传变异系数占表型变异系数的比例随着树龄的增大而增加；随着树龄的增长，白杨杂种无性系变异增大，但这种变异主要由遗传因素控制。相关性分析结果表明，所有性状相关性均达到极显著正相关水平（0．4042～0．9887），表明植株在生长过程中各指标相互联系密切。稳定性分析结果表明，无性系BL28、BL103和BL49是较稳定无性系，而BL106、BL107等无性系稳定性较差，对不同地点有特殊的适应性。利用综合评价法，以20％的人选率对无性系进行选择，不同地点无性系BL104、BL106和BL107均可以入选，表明这3个无性系不仅对不同地点有特殊的适应性，而且在不同地点均表现优良，本研究对后续新品种选育很有价值。

关键词：白杨杂种变异系数

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美洲黑杨木质素生物合成转录因子PdLiml基因的克隆、表达及植物表达载体构建

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北京林业大学学报 2009年第6期31卷 1-8页

作者：王璐李百炼张金凤张德强北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室 100083

在植物体内,Liml基因与木质素生物合成酶基因启动子区域富含AC的Pal盒结合,转录调控木质素的生物合成过程.该研究组合利用生物信息学和realtime PCR方法,首次从美洲黑杨形成层cDNA中分离出PdLimlcDNA全长,并进行了测序和序列分析.结果表... 详细信息

在植物体内,Liml基因与木质素生物合成酶基因启动子区域富含AC的Pal盒结合,转录调控木质素的生物合成过程.该研究组合利用生物信息学和realtime PCR方法,首次从美洲黑杨形成层cDNA中分离出PdLimlcDNA全长,并进行了测序和序列分析.结果表明,克隆的美洲黑杨PdLimlcDNA片段总长为952 bp,基因内部含有完整的开放阅读框架,大小为594 bp,可编码长度为197个氨基酸残基的蛋白质,所推导的蛋白质氨基酸序列与拟南芥AtLiml和水稻OsLiml蛋白的同源性分别为82.1%和78.2%.组织特异性realtime PCR结果显示,PdLiml基因在场树根、茎、叶片和顶端分生组织中均有表达,但其表达模式却不同:PdLiml在成熟叶片和成熟木质部中表达丰度最高,在树皮、根部、韧皮部和形成层表达丰度较高,在未成熟木质部有少量表达,在顶端分生组织中表达丰度最低.在此基础上,以pBI121为表达载体,构建了在CaMV35S启动子驱动下,PdLiml基因的正义(pBI121-CaMV35S-sensePdLiml)和反义(pBI121-CaMV35S-antisense PdLiml)类型的双元植物表达载体.该研究为杨树PdLiml的基因工程改良木材纤维品质性状提供了重要的理论依据,具有潜在的应用价值.

关键词：杨树 Liml转录因子术质素生物合成 realtime PCR 植物表达载体

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刺槐子叶的不定芽诱导及植株再生

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东北林业大学学报 2012年第10期40卷 12-18,21页

作者：姜丹胡瑞阳隋依含文彦忠张晋新孙宇涵李云丁泊元林木育种国家工程实验室(北京林业大学) 北京100083 山西省吉县林木良种繁育场林木育种国家工程实验室(北京林业大学)

以刺槐种子在无菌条件下播种生长7 d的子叶为外植体,研究不同植物生长调节剂和继代培养次数对愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明:生长调节剂种类和质量浓度对刺槐子叶的愈伤组织诱导及愈伤组织再分化有一定影响,刺槐子叶诱导愈伤... 详细信息

以刺槐种子在无菌条件下播种生长7 d的子叶为外植体,研究不同植物生长调节剂和继代培养次数对愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明:生长调节剂种类和质量浓度对刺槐子叶的愈伤组织诱导及愈伤组织再分化有一定影响,刺槐子叶诱导愈伤组织的最佳培养基:MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 0.2 mg/L,诱导率为98.9%,愈伤组织再生不定芽的最佳培养基:MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L,再生率为74.4%。愈伤组织的不定芽诱导率随继代次数的增加呈下降趋势。对刺槐子叶进行了直接诱导不定芽的试验,诱导率最高达87.8%,其培养基为:MS+6-BA 5.0 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L。

关键词：刺槐子叶愈伤组织不定芽诱导植株再生

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云南松天然群体遗传变异与生态因子的相关性

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生态学杂志 2016年第7期35卷 1767-1775页

作者：许玉兰蔡年辉陈诗王大玮何承忠段安安康向阳西南林业大学云南省高校林木遗传改良与繁育重点实验室昆明650224 北京林业大学林木育种国家工程实验室北京100083

采用SSR分子标记分析了云南松主分布区范围内20个天然群体的遗传多样性、遗传分化以及与生态因子间的相关性。结果表明:云南松天然群体SSR遗传多样性指标与地理、气象和土壤因子间存在一定相关关系,表现为低纬度、低海拔、温暖、降水量... 详细信息

采用SSR分子标记分析了云南松主分布区范围内20个天然群体的遗传多样性、遗传分化以及与生态因子间的相关性。结果表明:云南松天然群体SSR遗传多样性指标与地理、气象和土壤因子间存在一定相关关系,表现为低纬度、低海拔、温暖、降水量多的环境下遗传多样性丰富;Mantel检测群体遗传距离的地理变异方式较弱,遗传变异不存在明显的地理隔离,与环境因子间的关系也未达到显著水平,但生态隔离的作用明显高于地理隔离的作用,表明地理、气候和土壤因子对云南松群体间的遗传分化有一定的影响,其中以气候因子对云南松遗传多样性的影响最大。

关键词：云南松遗传多样性遗传结构遗传分化生态因子分异

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毛白杨基因库优树倍性检测及性状对比分析

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北京林业大学学报 2015年第4期37卷 113-119页

作者：白凤莹曾青青康宁索玉静廖婷张平冬康向阳北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室城乡生态环境北京实验室100083

以山东冠县毛白杨基因库内的优树为对象,采用流式细胞仪对基因库内469个毛白杨无性系的染色体倍性进行检测,并对检测出来的毛白杨天然三倍体和邻近的同种源二倍体对照的生长、形质和叶片气孔大小等性状变异进行研究。结果表明:在基因库... 详细信息

以山东冠县毛白杨基因库内的优树为对象,采用流式细胞仪对基因库内469个毛白杨无性系的染色体倍性进行检测,并对检测出来的毛白杨天然三倍体和邻近的同种源二倍体对照的生长、形质和叶片气孔大小等性状变异进行研究。结果表明:在基因库内共检测出28个毛白杨天然三倍体无性系,占基因库无性系总数的6.0%,包括24个雌性三倍体无性系、4个雄性三倍体无性系,其中北京2个、河北12个、山东1个、山西2个、陕西11个,分别占基因库无性系总数的0.4%、2.6%、0.2%、0.4%和2.3%;毛白杨天然三倍体在生长、形质和叶片气孔特性等性状上存在共性,与二倍体相比,具有生长量大、侧枝粗、气孔大而稀疏等特点;天然三倍体无性系和二倍体无性系在胸径、材积、侧枝粗、气孔长度、气孔宽度、气孔密度等均存在极显著差异,树高存在显著差异,且不同天然三倍体无性系间的叶片气孔长度、气孔宽度、气孔密度间的差异也达到了极显著性水平;此外,毛白杨天然三倍体群体中也有部分个体表现出类似二倍体的特征,其中存在一些在生长等性状表现较差的无性系,表明天然三倍体无性系并非株株均优,毛白杨天然三倍体应用时同样有必要进行选择。

关键词：毛白杨天然三倍体生长性状气孔性状遗传变异

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