检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农学通报 2014年第16期30卷 12-17页

作者：赵健李旦张金凤林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室国家林业局树木花卉育种生物工程重点开放实验室北京林业大学生物科学与技术学院北京100083 西南林业大学云南生物多样性研究院昆明650224

本研究以华北落叶松成熟合子胚为外植体,进行华北落叶松离体器官发生的初步探究.试验采用不同消毒方法对华北落叶松成熟合子胚进行消毒,设计了以6-BA、NAA及蔗糖为试验因素的L934正交试验进行华北落叶松不定芽的诱导研究,并且在不定芽... 详细信息

本研究以华北落叶松成熟合子胚为外植体,进行华北落叶松离体器官发生的初步探究.试验采用不同消毒方法对华北落叶松成熟合子胚进行消毒,设计了以6-BA、NAA及蔗糖为试验因素的L934正交试验进行华北落叶松不定芽的诱导研究,并且在不定芽伸长试验中添加了少量活性炭.试验结果表明,(1)将种子在用流水冲洗12h,75％酒精消毒3 min,再转入0.1％升汞消毒10min所获得的综合效果较好;(2)光照条件下(约2000lx),DCR培养基+4 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+40 g/L蔗糖为诱导不定芽的最佳组合,其中6-BA影响作用显著,NAA、蔗糖则无显著影响;(3) 1.0 g/L活性炭对不定芽伸长有显著的促进作用,平均伸长达0.43 cm.以上研究为华北落叶松组培器官发生及进一步的遗传转化研究奠定了良好的理论与实践基础.

关键词：华北落叶松成熟合子胚外植体消毒不定芽诱导与伸长

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刺槐实时定量PCR分析中内参基因的选择

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林业科学 2014年第9期50卷 167-172页

作者：王金星张利军廖资亿张运根邱乾栋孙鹏孙宇涵胡瑞阳卢楠李云林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室北京林业大学生物科学与技术学院北京100083 北京风沙源育苗中心北京102115 福建省三明市国有林场管理处三明365000 福建省宁化国有林场宁化365413 中国林业科学研究院经济林研究开发中心郑州450003

实时荧光定量PCR 是由美国Applied Biosystems 公司于1996年在传统的PCR 技术基础上发展起来的一种新的核酸定量技术（ Mackay，2004），具有定量准确、灵敏度高、特异性强、重复性好及高通量等优点（Huggett et al．，2005），已成为... 详细信息

实时荧光定量PCR 是由美国Applied Biosystems 公司于1996年在传统的PCR 技术基础上发展起来的一种新的核酸定量技术（ Mackay，2004），具有定量准确、灵敏度高、特异性强、重复性好及高通量等优点（Huggett et al．，2005），已成为医学、农学、林学、微生物学等众多领域中进行基因表达和转录组分析的常用技术之一（ Postollec et al．，2011；袁亚男等，2008）。

关键词：刺槐内参基因实时荧光定量PCR GeNorm NormFinder

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枣和酸枣基因组大小测定

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北京林业大学学报 2013年第3期35卷 77-83页

作者：吴丽萍唐岩李颖岳尹丹妮庞晓明北京林业大学生物科学与技术学院林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室计算生物学中心

本研究旨在找出最适合枣和酸枣的流式细胞术流程,进而测定它们的基因组大小。结果显示,在所对比的5种裂解液中,WPB最适合枣属植物细胞裂解。以毛果杨为内标,通过比较待测样品和内参G0/G1期峰,计算得出6种枣属植物基因组大小。各枣品种... 详细信息

本研究旨在找出最适合枣和酸枣的流式细胞术流程,进而测定它们的基因组大小。结果显示,在所对比的5种裂解液中,WPB最适合枣属植物细胞裂解。以毛果杨为内标,通过比较待测样品和内参G0/G1期峰,计算得出6种枣属植物基因组大小。各枣品种的基因组大小有一定差异,平均基因组大小约为418.56Mb,其中:‘冬枣’的基因组大小为(393.60±4.72)Mb,即C-值为(0.40±0.01)pg;‘鲁枣2号’的基因组大小为(428.00±3.61)Mb,即C-值为(0.44±0.00)pg;‘金丝小枣’的基因组大小为(424.00±5.81)Mb,即C-值为(0.44±0.01)pg;‘孔府酥脆枣’的基因组大小为(429.60±5.03)Mb,即C-值为(0.44±0.01)pg;‘无核小枣’的基因组大小为(413.60±7.07)Mb,即C-值为(0.42±0.01)pg;酸枣的基因组大小为(441.60±4.29)Mb,即C-值为(0.45±0.01)pg。优化的枣属植物流式细胞术流程,为枣属植物的倍性鉴定奠定了基础。

关键词：流式细胞术基因组大小细胞裂解液毛果杨枣

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甘蓝型油菜热激转录因子的克隆及表达分析

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西北植物学报 2013年第4期33卷 649-655页

作者：沈久源李煦汪晓峰北京林业大学生物学院林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室北京100083

以甘蓝型纯系油菜为试材,用RT-PCR和RACE方法首次从油菜种子中获得油菜热激转录因子的cDNA全长序列,命名为BnHSFA4a,GenBank登录号为HQ435241。结果表明:该cDNA长1 667bp,编码1个具有389aa的蛋白质,该基因编码的氨基酸序列与拟南芥热激... 详细信息

以甘蓝型纯系油菜为试材,用RT-PCR和RACE方法首次从油菜种子中获得油菜热激转录因子的cDNA全长序列,命名为BnHSFA4a,GenBank登录号为HQ435241。结果表明:该cDNA长1 667bp,编码1个具有389aa的蛋白质,该基因编码的氨基酸序列与拟南芥热激转录因子AtHSFA4a编码的氨基酸序列间相似度为82%。对34条编码不同热激转录因子的氨基酸序列进行多重比对,结果在100～190aa处序列间氨基酸总相似性超过60%,显示出较高的保守性。构建原核表达载体并成功表达出预期蛋白。半定量RT-PCR结果显示,该基因的表达先于油菜肌醇半乳糖苷合成酶(BnGOLS1)基因,符合该基因调控BnGOLS1的假设。推测AtHSFA4a基因可能通过调控BnGOLS1的表达量进而在油菜种子脱水耐性获得过程中发挥一定的作用。

关键词：甘蓝型油菜 BnHSFA4a 基因克隆基因表达分析

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沙棘微扦插不定根发生的形态解剖学研究

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北京林业大学学报 2013年第2期35卷 130-133页

作者：姚景瀚李伟北京林业大学生物科学与技术学院林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室

利用石蜡切片法对沙棘微扦插不定根的发生进行形态解剖学研究。结果表明:沙棘属于诱导型生根,观察到其不定根原基起源于2个区域,一部分根原基起源于维管形成层细胞,另一部分起源于韧皮部薄壁细胞区域。沙棘不定根原基继续发育时,一部分... 详细信息

利用石蜡切片法对沙棘微扦插不定根的发生进行形态解剖学研究。结果表明:沙棘属于诱导型生根,观察到其不定根原基起源于2个区域,一部分根原基起源于维管形成层细胞,另一部分起源于韧皮部薄壁细胞区域。沙棘不定根原基继续发育时,一部分沿射线向外生长,另一部分向外生长的同时会与茎段的髓连接起来,这种现象在其他树种中尚未发现。沙棘插穗不定根的发生整体上可分为4个阶段:1)维管形成层细胞和韧皮部薄壁细胞分裂出一些排列紧密、细胞质浓、具有分生组织特点的薄壁细胞团;2)新形成的薄壁细胞团不断分裂并且脱分化,形成具有很强分生能力的不定根原基发端细胞;3)根原基发端细胞继续分裂,沿着射线向远离轴心的方向伸展,从而形成根原基;4)根原基穿过韧皮射线和皮层,向外继续朝皮孔方向发展,最终从皮孔伸出形成不定根,不定根伸出皮孔前内部维管系统发育完善并与茎部维管系统相连接。

关键词：沙棘不定根发育解剖学

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赤霉素对根尖径向生长的调节作用研究

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北京林业大学学报 2013年第3期35卷 71-76页

作者：钮世辉李伟陈晓阳北京林业大学生物科学与技术学院林木育种国家工程实验室华南农业大学林学院

通过转基因与RNAi基因沉默技术,获得了由35S组成型启动子和TobRB7根尖特异表达型启动子分别启动表达的PtGA20ox、PtGA2ox1烟草转基因株系和NtGA20oxRNAi株系,对转基因植株根尖进行大样本(n>100)显微观察。统计结果显示:转基因植株根... 详细信息

通过转基因与RNAi基因沉默技术,获得了由35S组成型启动子和TobRB7根尖特异表达型启动子分别启动表达的PtGA20ox、PtGA2ox1烟草转基因株系和NtGA20oxRNAi株系,对转基因植株根尖进行大样本(n>100)显微观察。统计结果显示:转基因植株根尖径向生长与对照相比具有极显著差异,外源施用GA3与赤霉素合成抑制剂PAC可以逆转这种差异,表明赤霉素对根尖径向生长具有负调控作用;此外,利用TobRB7启动子在根尖分生组织特异上调和下调内源赤霉素水平可以得到与组成型调控转基因植株相似的表型,表明赤霉素对根尖径向生长的负调控作用主要是通过对根尖分生组织生长发育的调控实现的。

关键词：赤霉素根径径向生长根尖分生组织

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杨树花药激光显微切割体系的建立

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北京林业大学学报 2013年第1期35卷 139-143页

作者：张文超曹媛武佳叶郝瑞芝荆艳萍北京林业大学生物科学与技术学院、林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室 100083

鉴于以往对于杨树雄配子发育的分子调控机制的研究都基于整个花药甚至整个花序的取材,无法提供细胞特异性的表达信息,本研究建立了冷冻切片技术和激光显微切割技术联用分离杨树花药中不同发育时期的小孢子和花粉细胞的技术体系,并对其RN... 详细信息

鉴于以往对于杨树雄配子发育的分子调控机制的研究都基于整个花药甚至整个花序的取材,无法提供细胞特异性的表达信息,本研究建立了冷冻切片技术和激光显微切割技术联用分离杨树花药中不同发育时期的小孢子和花粉细胞的技术体系,并对其RNA进行了提取和检测。结果显示RNA的纯度、完整度均达到线性扩增的要求。这可以为更精确地研究杨树雄性生殖细胞发育的分子调控机制甚至为全面解析杨树雄配子发育的调控机制提供丰富的信息。

关键词：杨树花药冷冻切片激光显微切割

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华北落叶松胚性愈伤组织诱导影响因子的研究

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林业科学研究 2013年第4期26卷 454-458页

作者：韩登媛李旦赵健李慧张金凤林木育种国家工程实验室/林木花卉遗传育种教育部重点实验室/国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室/北京林业大学生物科学与技术学院北京100083

以成熟合子胚为外植体,用完全随机、正交设计等试验方法加之组培技术来研究影响华北落叶松(Larix princi-pis-rupprechtii)胚性愈伤组织诱导的几种主要因子。结果表明:诱导胚性愈伤组织过程中的最佳灭菌方式为2%Na-ClO灭菌30 min,剥皮... 详细信息

以成熟合子胚为外植体,用完全随机、正交设计等试验方法加之组培技术来研究影响华北落叶松(Larix princi-pis-rupprechtii)胚性愈伤组织诱导的几种主要因子。结果表明:诱导胚性愈伤组织过程中的最佳灭菌方式为2%Na-ClO灭菌30 min,剥皮、去胚乳处理。其中污染率和NaClO的灭菌时间呈负相关:NaClO灭菌时间越长,污染率越低。诱导胚性愈伤组织的最佳琼脂浓度为4 g·L-1,且过高和过低的琼脂浓度不仅降低了其诱导率,提高了愈伤组织的褐化水平,也影响了外植体的发育形态。外源激素的正交试验结果表明:2,4-D是主要影响因子,对诱导率的影响显著,其次是KT,最后是6-BA。最佳的植物外源激素配比是2,4-D 1.8 mg·L-1+6-BA 0.3 mg·L-1+KT 0.3 mg·L-1。

关键词：华北落叶松体细胞胚胎发生诱导培养基胚性愈伤组织

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樟子松SSR反应体系优化

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基因组学与应用生物学 2013年第3期32卷 413-419页

作者：方攀张运城袁虎威刘玉林李伟林木育种国家工程实验室北京林业大学生物科学与技术学院北京100083

从模板DNA、Taq酶含量、dNTP浓度、引物浓度、退火温度、循环次数6个方面,分别设置单因素多水平试验,观察条带的亮度及清晰度,以确定合适的反应体系。然后利用L16(45)正交试验,对DNA模板浓度、Taq酶含量、dNTP浓度、引物浓度这4个因素在... 详细信息

从模板DNA、Taq酶含量、dNTP浓度、引物浓度、退火温度、循环次数6个方面,分别设置单因素多水平试验,观察条带的亮度及清晰度,以确定合适的反应体系。然后利用L16(45)正交试验,对DNA模板浓度、Taq酶含量、dNTP浓度、引物浓度这4个因素在4个水平上做进一步优化。建立了樟子松SSR最佳反应体系:25μL的反应体系中包含模板DNA50ng,Taq酶1.0U,dNTP0.3mmol/L,引物0.15μmol/L,10×TaqBuffer(含Mg2+)2.5μL。樟子松SSR反应体系的优化,有助于对樟子松SSR分子标记的研究,为分析樟子松天然群体和人工群体的遗传结构多样性,构建遗传图谱和定位功能基因奠定了基础。

关键词：樟子松 SSR反应体系正交试验

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刺槐EST-SSR标记PCR反应体系的优化

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中国农学通报 2014年第22期30卷 45-52页

作者：赵克奇董黎王少明孙宇涵孙文婷袁存权荀守华张江涛王玉玲李云林木育种国家工程实验室/北京林业大学生物科学与技术学院北京100083 国有洛宁县吕村林场河南洛宁471700 山东省林业科学研究院济南250014 河南省林业科学研究院郑州450008 北京风沙源育苗中心北京102115

为建立一套适用于刺槐EST-SSR标记的PCR反应体系,采用L16(45)正交试验设计结合单因素试验,对刺槐EST-SSR PCR反应体系中的5个主要因素:引物、DNA模板、dNTPs、Mg2+和Taq DNA聚合酶进行优化试验。结果表明:在20μL反应体系中,各反应因素... 详细信息

为建立一套适用于刺槐EST-SSR标记的PCR反应体系,采用L16(45)正交试验设计结合单因素试验,对刺槐EST-SSR PCR反应体系中的5个主要因素:引物、DNA模板、dNTPs、Mg2+和Taq DNA聚合酶进行优化试验。结果表明:在20μL反应体系中,各反应因素的最佳水平为0.5μmol/L引物、30 ng模板DNA、0.15 mmol/L dNTP、0.5 mmol/L Mg2+、1.0 UTaq DNA聚合酶。利用随机挑选的3个刺槐优良无性系品种和7对EST-SSR引物对优化体系进行验证,结果均能获得稳定、清晰的条带,证明该体系稳定可靠。此优化体系的建立为刺槐EST-SSR标记的开发以及利用EST-SSR标记深入研究和利用中国刺槐种质资源奠定基础。

关键词：刺槐 EST-SSR PCR反应体系

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