检索结果-内蒙古大学图书馆

中国临床康复 2006年第37期10卷 7-10页

作者：韩冰付小兵陈伟周岗孙同柱白晓东解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的:观察烧伤大鼠血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞基因表达的影响。方法:实验于2003-06/2004-4在解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室完成。①断头法处死Wistar大鼠,取股骨并暴露骨髓腔,用培养基冲洗骨髓腔,将骨髓... 详细信息

目的:观察烧伤大鼠血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞基因表达的影响。方法:实验于2003-06/2004-4在解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室完成。①断头法处死Wistar大鼠,取股骨并暴露骨髓腔,用培养基冲洗骨髓腔,将骨髓细胞悬液用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞并接种于培养瓶,贴壁法培养骨髓间充质干细胞。②用沸水烫伤的方法制作15%TBSAⅢ度烧伤模型。③烧伤3d后经腹主动脉取烧伤大鼠血液,分离血清备用。④同样取正常大鼠血液,分离血清备用。⑤骨髓间充质干细胞传代后分别用含有体积分数为0.1的正常大鼠血清(正常血清组)和烧伤后3d大鼠血清(烧伤血清组)的F-12培养基培养24h及72h。⑥从处理过的间充质干细胞内提取RNA,反转录为cDNA并以cy3-dUTP和cy5-dUT进行标记为荧光探针。⑦以含有5705种基因的寡核苷酸微阵列检测两组细胞基因表达的差异。结果:①烧伤血清处理不同时间后,两组间充质干细胞对比,均有不同数量的基因表达存在明显差异。②烧伤血清处理24h后,两组相比较有4条基因表达存在明显差异。③烧伤血清处理72h后,两组相比较有11条基因表达存在明显差异。④两个时间点差异表达的基因无相同基因。结论:烧伤后大鼠血清刺激间充质干细胞,使其基因表达发生了改变,且随着烧伤血清处理时间的不同,差异表达的基因也发生动态变化。这种改变可能与间充质干细胞受到刺激后参与创面修复有关。

关键词：间质干细胞基因表达烧伤

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人骨髓间充质干细胞表型转化为汗腺细胞的体外研究

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中华创伤杂志 2006年第2期22卷 81-86页

作者：李海红付小兵欧阳云淑周岗陈伟孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的研究体外人骨髓间充质干细胞(MSCs)和汗腺细胞(SGCs)直接和间接共培养条件下骨髓间充质干细胞的表型转化及其机制。方法体外分别分离培养、扩增并鉴定MSCs和汗腺细胞。将培养的MSCs和经47℃高温处理造成热休克的SGCs直接和间接共培... 详细信息

目的研究体外人骨髓间充质干细胞(MSCs)和汗腺细胞(SGCs)直接和间接共培养条件下骨髓间充质干细胞的表型转化及其机制。方法体外分别分离培养、扩增并鉴定MSCs和汗腺细胞。将培养的MSCs和经47℃高温处理造成热休克的SGCs直接和间接共培养,1周后,采用免疫细胞化学染色法和流式细胞仪法检测共培养体系中MSCs的表型改变,W estern b lot测定细胞外信号调节激酶(ERK)和磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)表达。结果MSCs和SGCs均呈克隆样生长,MSCs表达CD44、CD105和CD29,不表达CD34、CEA、CK19和CK7;SGCs表达CEA、CK19、CK8和CK7。MSCs与经高温损伤后的SGCs共培养1周后,部分MSCs呈汗腺细胞表型,间接共培养结果示各组MSCs均表达水平相当的ERK,但pERK水平表达不同。结论成人MSCs和热休克的SGCs直接和间接共培养均可诱导MSCs向SGCs表型转化,pERK途径参与这一过程。

关键词：干细胞细胞,汗腺 Ca(2+)-calmodulin dependent protein kinase 表型转化

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创面治疗中的转化医学：部分成果的研发和转化应用与思考

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中华烧伤杂志 2014年第1期30卷 3-5页

作者：付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室北京100048

创伤是一种古老的疾病形式，创面贯穿于整个治疗的始终，是创伤治疗的核心之一。经过几千年的发展，创面治疗的理论、技术和方法已基本形成并逐步完善。20余年来，随着对创伤发生机制研究的深入和相关领域高科技的应用，特别是一些创面... 详细信息

创伤是一种古老的疾病形式，创面贯穿于整个治疗的始终，是创伤治疗的核心之一。经过几千年的发展，创面治疗的理论、技术和方法已基本形成并逐步完善。20余年来，随着对创伤发生机制研究的深入和相关领域高科技的应用，特别是一些创面治疗理论的创新，使得创面治疗的技术和方法有了新发展，许多新理论和新技术的转化应用，有力促进了创面治疗水平的提高。。

关键词：伤口愈合蛋白质工程转化医学

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诱导脂肪干细胞向血管内皮细胞分化的实验研究

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中华外科杂志 2010年第14期48卷 1106-1109页

作者：雷永红付小兵盛志勇周学萍解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100448 解放军总医院第一附属医院烧伤科北京100448

目的探讨诱导脂肪干细胞（ADSCs）向血管内皮细胞（ECs）分化的可能性,为ADSCs应用于创伤修复的理论提供实验依据.方法切取大鼠脂肪组织,用酶消化法分离、培养ADSCs,流式细胞仪检测第3代ADSCs的CD49d和CD106的表达以鉴定ADSCs.实验组... 详细信息

目的探讨诱导脂肪干细胞（ADSCs）向血管内皮细胞（ECs）分化的可能性,为ADSCs应用于创伤修复的理论提供实验依据.方法切取大鼠脂肪组织,用酶消化法分离、培养ADSCs,流式细胞仪检测第3代ADSCs的CD49d和CD106的表达以鉴定ADSCs.实验组用含30%大鼠血管匀浆液的条件培养液诱导大鼠ADSCs,空白对照组用含10%胎牛血清DMEM培养液培养大鼠ADSCs,各组诱导3 d后经免疫组化和流式细胞仪检测ADSCs中CD34和血管性假血友病因子（vWF）相关抗原的表达变化.结果流式细胞仪检测ADSCs的CD49d和CD106阳性率分别为（98.32±0.37）%和（1.67±0.61）%;血管条件培养液诱导组细胞CD34和vWF阳性率分别为（77.14±0.76）%和（75.46±0.37）%,较空白对照组（1.38±0.31）%和（1.70±0.23）%均升高,差异有统计学意义（P〈0.01）.结论 ADSCs可以被诱导向ECs表型分化,提示ADSCs具有参与创伤后血管形成的潜能,可以应用于创伤修复的治疗.

关键词：干细胞脂肪组织内皮细胞细胞分化

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体外诱导表皮细胞去分化的初步实验研究

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解放军医学杂志 2007年第10期32卷 1023-1027页

作者：蔡飒付小兵孙同柱王君韩冰韩兵盛志勇解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的建立表皮细胞去分化体外模型,探索与去分化过程有关的信号通路。方法分离培养人表皮细胞,分别用双氧水、ERK阻断剂PD98059加双氧水处理细胞,采用免疫细胞化学染色法和Western blot法检测不同方式处理后表皮细胞表型的变化情况,Weste... 详细信息

目的建立表皮细胞去分化体外模型,探索与去分化过程有关的信号通路。方法分离培养人表皮细胞,分别用双氧水、ERK阻断剂PD98059加双氧水处理细胞,采用免疫细胞化学染色法和Western blot法检测不同方式处理后表皮细胞表型的变化情况,Western blot法检测双氧水处理后ERK信号通路相关蛋白的表达情况。结果双氧水处理后,表皮细胞干细胞标志物(CK19、β1整合素、Oct4和p63)表达增加,分化细胞标记物(CK10)表达减少,ERK信号通路中相关的磷酸化蛋白表达增强。以PD98059阻断ERK通路的活化后,双氧水诱导的表皮细胞表型逆转受到了抑制。结论ERK通路参与了双氧水诱导的表皮细胞去分化过程。

关键词：去分化表皮细胞有丝分裂素激活蛋白激酶类

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去分化:一种新的干细胞来源

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中华医学杂志 2007年第8期87卷 573-575页

作者：蔡飒付小兵盛志勇解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

修复与再生是生物界中普遍存在的现象。当生物体某一组织或器官发生损伤或丢失时，机体在一定条件下能够形成一个新的组织或器官，二者在结构和功能上几乎完全一样，这个过程称为再生。在不同的生物种群中，再生的潜能和机制存在很大差... 详细信息

修复与再生是生物界中普遍存在的现象。当生物体某一组织或器官发生损伤或丢失时，机体在一定条件下能够形成一个新的组织或器官，二者在结构和功能上几乎完全一样，这个过程称为再生。在不同的生物种群中，再生的潜能和机制存在很大差异。对于一些低等的无脊椎动物，如蚯蚓，当身体被切成两截之后，它们能轻而易举再生出两个新的，遗传性完全相同的个体。两栖动物，如蝾螈，也具有强大的再生能力，它们能通过去分化过程产生完整的四肢，脊柱，尾巴，视网膜，晶状体以及上下颌等。哺乳动物的再生能力则非常有限，由于发育过程中，细胞发生不可逆的定向分化，他们只能依靠体内为数不多的干细胞储备来对受损的组织进行修复。目前，研究者正探索从三个途径提高哺乳动物的再生能力：（1）将干细胞、祖细胞或分化细胞直接移植于受损组织；（2）将细胞种子支架植入受损组织；（3）通过激活体内现存的干细胞或促进损伤组织周围分化细胞发生去分化以获得多分化潜能细胞来诱导机体自身的再生能力。其中，通过外部干预提高自身再生能力具有更重要的应用价值。因此，本文将集中阐述这方面的工作和已取得的进展。

关键词：干细胞来源去分化再生能力受损组织哺乳动物细胞发生分化潜能损伤组织

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在体诱导表皮细胞去分化的初步实验研究

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第三军医大学学报 2008年第21期30卷 1998-2002页

作者：蔡飒付小兵雷永红韩冰郭永峰孙同柱王君李海红解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的在体诱导表皮细胞去分化,探索与表皮细胞去分化有关的信号通路。方法包皮皮片去除皮下组织,用中性蛋白酶分离表皮,Ⅳ型胶原反复粘贴并牵拉表皮去除基底细胞层。处理后表皮片移植于裸鼠全层皮肤下,分别于3、5、7d取出移植皮片,采用... 详细信息

目的在体诱导表皮细胞去分化,探索与表皮细胞去分化有关的信号通路。方法包皮皮片去除皮下组织,用中性蛋白酶分离表皮,Ⅳ型胶原反复粘贴并牵拉表皮去除基底细胞层。处理后表皮片移植于裸鼠全层皮肤下,分别于3、5、7d取出移植皮片,采用免疫组织化学染色、流式细胞仪检测、Western blot和RT-PCR等方法检测皮片移植前后表型的改变和ERK MAPK通路各信号分子表达的变化情况。结果去基底细胞层处理的表皮片干细胞标志物CK19和β1整合素染色阴性;移植后5d,存活皮片CK19和β1整合素染色呈多层分布,而不是正常表皮中的单层分布。流式细胞仪检测结果显示,表皮片移植后CK19阳性细胞和β1整合素阳性细胞由移植前的0.00%分别增加到7.54%和5.24%,而CK10阳性细胞由99.62%下降为86.56%。Western blot和PCR检测也证实CK19和β1整合素蛋白水平和mRNA水平表达在移植后明显增强。ERK及上下游信号分子(p-Raf、p-MEK1/2、p-ERK1/2和c-myc)表达增强。t-MEK1/2和t-ERK1/2移植前后表达无显著差异(P>0.05)。结论处于终末分化阶段的表皮细胞可以向干细胞状态逆转,这个过程可能与ERK MAPK信号通路有关。

关键词：去分化异种移植表皮细胞表皮干细胞胞外信号调节激酶

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建立一种快速分离人汗腺细胞的实验方法

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中华实验外科杂志 2011年第1期28卷 54-56页

作者：许永安黄沙付小兵张翠萍孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048

目的通过与传统汗腺分离方法进行对比，建立一种新的快速分离、获取人汗腺方法。方法采用制作微粒皮（直径0．5～1．0mm^3）、提高胶原酶Ⅱ型的浓度（2．5g／L）以及改变温度条件（37．5℃）来与传统方法比较，对比两种方法获取汗腺的... 详细信息

目的通过与传统汗腺分离方法进行对比，建立一种新的快速分离、获取人汗腺方法。方法采用制作微粒皮（直径0．5～1．0mm^3）、提高胶原酶Ⅱ型的浓度（2．5g／L）以及改变温度条件（37．5℃）来与传统方法比较，对比两种方法获取汗腺的时间、细胞的形态及增殖情况。结果由此方法分离、获取汗腺细胞所需要的时间明显缩短（由12h以上缩短为3～5h），其形态及增殖特性无明显差异（P〉0．05）。结论一种更加便捷、高效的汗腺细胞分离方法的建立为汗腺的修复与再生研究提供一种快速、大量获取汗腺细胞的新策略。

关键词：汗腺细胞分离培养皮肤再生

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Wnt信号通路在创伤微环境诱导的表皮细胞去分化过程中的作用

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中华创伤杂志 2009年第9期25卷 774-778页

作者：张翠萍付小兵孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的研究创伤微环境对表皮细胞的去分化诱导作用，并探讨Wnt通路在这一过程中的作用。方法包皮皮片去除皮下脂肪后，中性蛋白酶消化过夜，分离表皮和真皮。分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮干细胞。处理后的表皮片经免疫... 详细信息

目的研究创伤微环境对表皮细胞的去分化诱导作用，并探讨Wnt通路在这一过程中的作用。方法包皮皮片去除皮下脂肪后，中性蛋白酶消化过夜，分离表皮和真皮。分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮干细胞。处理后的表皮片经免疫组化鉴定后移植到BALB／c裸鼠背部全层皮肤缺损创面，5d后用免疫组化法检测皮片内细胞的表型特征，RT—PCR和Western blot检测表皮细胞表型转化过程中Wnts分子及下游分子的表达变化。结果未经处理的表皮片基底部细胞呈CK10染色阴性，CK19和β1整合素染色阳性；Ⅳ型胶原处理后的表皮片内细胞全呈CK10染色阳性。而去基底皮片移植后5d，在皮片的基底侧重新出现CK10染色阴性、CK19和β1整合素染色阳性的细胞。同时在移植皮片内Wnt-10b、Wnt-4和Wnt-7a mR—NA的表达分别增加了3．1倍、2．2倍和1．4倍，而Wnt通路下游β-catenin、cyclin D1和c—myc蛋白表达分别增加了3倍、1．5倍和2倍（P〈0．01）。结论创伤微环境可诱导表皮细胞去分化，Wnt／β-catenin信号通路可能在这一过程中起关键性的调控作用。

关键词：创伤和损伤表皮去分化信号传导 Wnt/β-catenin信号通路

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人成纤维细胞生长因子7的基因克隆和蛋白鉴定

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第14期11卷 2629-2632页

作者：韩兵陈伟付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京市100037

目的:构建人成纤维细胞生长因子7的重组原核表达质粒pGEX-4T-3-FGF7,并诱导其基因在大肠杆菌DH5α中大量表达,纯化蛋白并检验生物学活性。方法:实验于2006-12在本实验室完成。采用逆转录-聚合酶链反应技术,从人皮肤成纤维细胞内扩增编... 详细信息

目的:构建人成纤维细胞生长因子7的重组原核表达质粒pGEX-4T-3-FGF7,并诱导其基因在大肠杆菌DH5α中大量表达,纯化蛋白并检验生物学活性。方法:实验于2006-12在本实验室完成。采用逆转录-聚合酶链反应技术,从人皮肤成纤维细胞内扩增编码人成纤维细胞生长因子7的cDNA序列,以DNA重组技术将获得的目的基因片段连接至原核表达载体pGEX-4T-3上,经抗生素筛选挑取阳性克隆扩增后,提取DNA进行酶切鉴定和测序。同时应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹方法对其表达产物进行特异性鉴定。超滤纯化蛋白后以四甲基偶氮唑盐法测定其在不同浓度作用下对人表皮角化细胞系生长的影响。结果:克隆出的成纤维细胞生长因子7基因的cDNA包括翻译起始密码子、编码序列和终止密码子等部分,含有成纤维细胞生长因子7基因的cDNA的表达质粒pGEX-4T-3-hFGF7在DH5α细菌体内能够表达,并且随着诱导时间的延长,成纤维细胞生长因子7基因的表达量增加,重组人成纤维细胞生长因子7蛋白主要存在于包涵体中。在所测浓度范围内该蛋白可以剂量依赖模式促进人表皮角化细胞系细胞在体外分裂增殖。结论:人成纤维细胞生长因子7基因可以在原核细胞中获得表达并具有促角质细胞增殖的生物活性,为深入研究该蛋白在皮肤创伤愈合中的具体作用奠定了基础。

关键词： FGF7基因原核表达载体融合克隆纯化组织构建

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