检索结果-内蒙古大学图书馆

感染．炎症．修复 2007年第3期8卷 140-143,F0002页

作者：李金凤段海峰吴彬毕建进孙同柱付小兵王立生吴祖泽军事医学科学院放射与辐射研究所实验血液学实验室北京100850 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的:采用携带肝细胞生长因子(HGF)腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞(NFB)和增生性瘢痕成纤维细胞(HFB)后,观察HGF对这两种细胞作用的差异,为HGF基因治疗病理性瘢痕提供理论基础。方法:分离培养HFB和NFB,以不同感染复数(multiplicity of in... 详细信息

目的:采用携带肝细胞生长因子(HGF)腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞(NFB)和增生性瘢痕成纤维细胞(HFB)后,观察HGF对这两种细胞作用的差异,为HGF基因治疗病理性瘢痕提供理论基础。方法:分离培养HFB和NFB,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP)转染细胞,用流式细胞仪检测转染效率;以MOI为100携带HGF基因的腺病毒(Ad-HGF)转染HFB和NFB48h后,酶联免疫吸附法检测细胞上清中HGF、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;应用免疫组织化学方法检测正常皮肤和增生性瘢痕组织中MMP-1和TGF-β1的分布。结果:NFB和HFB在腺病毒转染效率和HGF表达方面差异无显著性,但HGF能明显促进HFB分泌MMP-1,抑制HFB表达TGF-β1。结论:促进HFB分泌MMP-1和抑制HFB表达TGF-β1可能是HGF治疗病理性瘢痕的细胞和分子生物学基础。

关键词：肝细胞生长因子增生性瘢痕成纤维细胞腺病毒

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CK10、CK14、p63在移植至裸鼠皮下的人表皮的表达

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解剖科学进展 2007年第3期13卷 200-202页

作者：郭永峰付小兵蔡飒李海红王玉新中国医科大学附属口腔医院口腔颌面外科辽宁沈阳110002 解放军总医院附属第一医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的研究人表皮移植至裸鼠皮下后表皮细胞的表型变化。方法将制备的人包皮表皮皮片移植到裸鼠背部皮下,7d取材。移植前后人表皮皮片标本行HE染色及细胞角蛋白10(CK10)、细胞角蛋白14(CK14)、p63免疫组织化学染色镜下观察。结果人表皮皮... 详细信息

目的研究人表皮移植至裸鼠皮下后表皮细胞的表型变化。方法将制备的人包皮表皮皮片移植到裸鼠背部皮下,7d取材。移植前后人表皮皮片标本行HE染色及细胞角蛋白10(CK10)、细胞角蛋白14(CK14)、p63免疫组织化学染色镜下观察。结果人表皮皮片移植到裸鼠皮下成活率达70%,移植成活的表皮基底层细胞增殖,细胞数增多,新生表皮增厚。免疫组化结果显示,与移植前相比,CK10表达减弱,CK14和p63表达增强,这与人皮肤创伤愈合过程中表皮细胞表型变化一致。结论移植人表皮到裸鼠皮下的方法可以模拟人皮肤创伤愈合过程,是一种可行的在体研究人表皮细胞的实验方法。

关键词：细胞角蛋白10 细胞角蛋白14 p63 人表皮裸鼠

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大鼠脂肪干细胞(rADSCs)转运VEGF基因促进随意皮瓣成活率的研究

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中国美容医学 2007年第1期16卷 7-10页

作者：雷永红付小兵盛志勇鲁开化赵京禹孙同柱韩冰陈伟解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037 第四军医大学西京医院整形外科陕西西安710032 内蒙古医学院呼和浩特100059

目的:探讨人血管内皮细胞生长因子(VEGF165)基因转染大鼠脂肪干细胞(rADSCs)的稳定表达系统对皮瓣成活的影响。方法:①培养和鉴定大鼠ADSCs,脂质体介导pcDNA3.1-VEGF165质粒转染大鼠(rADSCs),经G418筛选抗性rADSCs并继续培养4周,用ELIS... 详细信息

目的:探讨人血管内皮细胞生长因子(VEGF165)基因转染大鼠脂肪干细胞(rADSCs)的稳定表达系统对皮瓣成活的影响。方法:①培养和鉴定大鼠ADSCs,脂质体介导pcDNA3.1-VEGF165质粒转染大鼠(rADSCs),经G418筛选抗性rADSCs并继续培养4周,用ELISA法检测转染后细胞培养上清中VEGF浓度。②Brdu标记被转染rADSCs后,在大鼠背部制备8.0cm×2.5cm的随意型皮瓣模型,实验组(10只大鼠)为注射pcDNA3.1-VEGF165质粒转染的rADSCs悬液到大鼠腹腔,对照组(8只大鼠)为注射2ml被空载体pcDNA3.1(-)转染的rADSCs悬液,术后7天用透明纸描记法记录皮瓣成活范围,记数坐标纸格子并换算为成活面积百分率。分别于术后3天、5天、7天在成活皮瓣的远端切取皮瓣组织标本行免疫组化染色。结果:①ELISA检测4株转染和经G418筛选抗性并继续培养2周的第二代rADSCs上清中VEGF浓度多达(4.21±0.35)pmol VEGF/1×106细胞/48h(x±s,n=4),有2株细胞培养液上清分泌VEGF较强,其余2株细胞相对较弱,均大于对照的空载体转染组和未转染组rADSCs培养液上清中的(0.49±0.15)pmol VEGF/1×106细胞/48h(x±s,n=3)和(0.62±0.86)pmol VEGF/1×106细胞/48h(x±s,n=3),均P<0.01,差异有统计学意义。分泌VEGF较强的rADSCs经Brdu标记后阳性率达到70%以上。②将获得的稳定表达VEGF165的rADSCs移植到随意型皮瓣动物模型体内,7天后实验组皮瓣的成活面积为(59.6±0.52)%,大于对照组的皮瓣成活面积(40.5±0.27)(%P<0.01)。成活皮瓣的远端组织标本切片在显微镜下可见皮下脂肪中有大量核仁深染棕黄色的细胞。结论:ADSCs可以作为载体细胞运送VEGF基因到达皮瓣远端并通过分泌VEGF提高皮瓣的成活面积。

关键词：成体干细胞基因治疗随意型皮瓣

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烧伤血清对大鼠骨髓间充质干细胞基因表达的动态影响

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中国临床康复 2006年第37期10卷 7-10页

作者：韩冰付小兵陈伟周岗孙同柱白晓东解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的:观察烧伤大鼠血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞基因表达的影响。方法:实验于2003-06/2004-4在解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室完成。①断头法处死Wistar大鼠,取股骨并暴露骨髓腔,用培养基冲洗骨髓腔,将骨髓... 详细信息

目的:观察烧伤大鼠血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞基因表达的影响。方法:实验于2003-06/2004-4在解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室完成。①断头法处死Wistar大鼠,取股骨并暴露骨髓腔,用培养基冲洗骨髓腔,将骨髓细胞悬液用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞并接种于培养瓶,贴壁法培养骨髓间充质干细胞。②用沸水烫伤的方法制作15%TBSAⅢ度烧伤模型。③烧伤3d后经腹主动脉取烧伤大鼠血液,分离血清备用。④同样取正常大鼠血液,分离血清备用。⑤骨髓间充质干细胞传代后分别用含有体积分数为0.1的正常大鼠血清(正常血清组)和烧伤后3d大鼠血清(烧伤血清组)的F-12培养基培养24h及72h。⑥从处理过的间充质干细胞内提取RNA,反转录为cDNA并以cy3-dUTP和cy5-dUT进行标记为荧光探针。⑦以含有5705种基因的寡核苷酸微阵列检测两组细胞基因表达的差异。结果:①烧伤血清处理不同时间后,两组间充质干细胞对比,均有不同数量的基因表达存在明显差异。②烧伤血清处理24h后,两组相比较有4条基因表达存在明显差异。③烧伤血清处理72h后,两组相比较有11条基因表达存在明显差异。④两个时间点差异表达的基因无相同基因。结论:烧伤后大鼠血清刺激间充质干细胞,使其基因表达发生了改变,且随着烧伤血清处理时间的不同,差异表达的基因也发生动态变化。这种改变可能与间充质干细胞受到刺激后参与创面修复有关。

关键词：间质干细胞基因表达烧伤

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人骨髓间充质干细胞表型转化为汗腺细胞的体外研究

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中华创伤杂志 2006年第2期22卷 81-86页

作者：李海红付小兵欧阳云淑周岗陈伟孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的研究体外人骨髓间充质干细胞(MSCs)和汗腺细胞(SGCs)直接和间接共培养条件下骨髓间充质干细胞的表型转化及其机制。方法体外分别分离培养、扩增并鉴定MSCs和汗腺细胞。将培养的MSCs和经47℃高温处理造成热休克的SGCs直接和间接共培... 详细信息

目的研究体外人骨髓间充质干细胞(MSCs)和汗腺细胞(SGCs)直接和间接共培养条件下骨髓间充质干细胞的表型转化及其机制。方法体外分别分离培养、扩增并鉴定MSCs和汗腺细胞。将培养的MSCs和经47℃高温处理造成热休克的SGCs直接和间接共培养,1周后,采用免疫细胞化学染色法和流式细胞仪法检测共培养体系中MSCs的表型改变,W estern b lot测定细胞外信号调节激酶(ERK)和磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)表达。结果MSCs和SGCs均呈克隆样生长,MSCs表达CD44、CD105和CD29,不表达CD34、CEA、CK19和CK7;SGCs表达CEA、CK19、CK8和CK7。MSCs与经高温损伤后的SGCs共培养1周后,部分MSCs呈汗腺细胞表型,间接共培养结果示各组MSCs均表达水平相当的ERK,但pERK水平表达不同。结论成人MSCs和热休克的SGCs直接和间接共培养均可诱导MSCs向SGCs表型转化,pERK途径参与这一过程。

关键词：干细胞细胞,汗腺 Ca(2+)-calmodulin dependent protein kinase 表型转化

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重视神经、内分泌与免疫机制在皮肤修复与再生中作用的研究

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中国修复重建外科杂志 2006年第4期20卷 331-335页

作者：付小兵程飚解放军总医院基础医学研究所解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100853 广州军区总医院整形外科

目的概述神经、内分泌与免疫学机制的变化对皮肤修复的影响,以及近年来的研究进展,为深入开展这一领域的研究和临床治疗提供依据。方法广泛阅读国内外相关文献,并进行分析、综合,确定神经、内分泌与免疫机制在皮肤修复中的作用。结果皮... 详细信息

目的概述神经、内分泌与免疫学机制的变化对皮肤修复的影响,以及近年来的研究进展,为深入开展这一领域的研究和临床治疗提供依据。方法广泛阅读国内外相关文献,并进行分析、综合,确定神经、内分泌与免疫机制在皮肤修复中的作用。结果皮肤作为神经依赖性器官、内分泌器官及免疫器官,在皮肤损伤修复与再生中发挥重要作用。结论目前对这一领域研究较少,应加强相关基础研究。

关键词：皮肤再生神经支配内分泌器官免疫功能

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病理性瘢痕治疗现状与展望

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中华整形外科杂志 2006年第2期22卷 146-149页

作者：付小兵程飚解放军总医院基础医学研究所北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目前瘢痕的治疗可分为侵袭性和非侵袭性两种[1-4],具体治疗要根据瘢痕的情况而定.本文综述病理性瘢痕的治疗现状及未来治疗有可能突破的方向。

关键词：病理性瘢痕治疗现状非侵袭性

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成体表皮干细胞的分离培养与鉴定

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中国危重病急救医学 2006年第1期18卷 46-48,T0001页

作者：谢晓繁贾赤宇付小兵刘虎仙第四军医大学西京医院烧伤科西安710032 解放军总医院第一附属医院(原解放军第三○四医院)全军创伤修复重点实验室北京100037

目的探讨成体表皮干细胞体外分离、培养和鉴定的技术方法。为组织工程皮肤的构建提供种子细胞。方法通过中性蛋白酶消化成人包皮获得表皮细胞，再通过胰蛋白酶与乙二胺四乙酸（EDTA）消化并制成单个表皮细胞悬液，接种至人胎盘Ⅳ型胶... 详细信息

目的探讨成体表皮干细胞体外分离、培养和鉴定的技术方法。为组织工程皮肤的构建提供种子细胞。方法通过中性蛋白酶消化成人包皮获得表皮细胞，再通过胰蛋白酶与乙二胺四乙酸（EDTA）消化并制成单个表皮细胞悬液，接种至人胎盘Ⅳ型胶原包被的培养瓶内．以Dulbecco改良Eagle培养基／F12（DMEM／F12，1：1）作为表皮干细胞培养基置培养箱内培养，37℃静置10～l5min，留用快速贴壁细胞继续培养，所得细胞分别以能否呈克隆状生长、流式细胞仪测细胞周期、透射电镜观察其超微结构及β1-整合素、角蛋白19（K19）免疫细胞化学染色进行鉴定。结果人胎盘Ⅳ型胶原包被的培养瓶内快速贴壁细胞继续培养24h后细胞呈克隆状生长；电镜观察其超微结构示非成熟细胞特征；细胞周期分析示，第2代中静息期／DNA合成前期（G0／G1期）细胞占86．83％。β1-整合素、K19免疫细胞化学染色呈阳性。结论成体表皮干细胞在体外得到成功分离与培养。

关键词：成体表皮干细胞细胞培养细胞分离鉴定表皮干细胞分离培养免疫细胞化学染色表皮细胞悬液 β1-整合素

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诱导脂肪干细胞向表皮细胞表型的转分化研究

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中华实验外科杂志 2006年第12期23卷 1536-1538页

作者：雷永红付小兵盛志勇孙同柱董晓红于勇解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室内蒙古医学院基础医学院

目的探讨脂肪干细胞(ADSCs)经诱导向表皮细胞转分化的可能性。方法(1)切取12例SD大鼠脂肪组织,用酶消化法分离和培养ADSCs,流式细胞仪检测第3代细胞的CD49d、CD44和CD106的表达以鉴定ADSCs;(2)诱导大鼠ADSCs向表皮细胞转分化的实验分组... 详细信息

目的探讨脂肪干细胞(ADSCs)经诱导向表皮细胞转分化的可能性。方法(1)切取12例SD大鼠脂肪组织,用酶消化法分离和培养ADSCs,流式细胞仪检测第3代细胞的CD49d、CD44和CD106的表达以鉴定ADSCs;(2)诱导大鼠ADSCs向表皮细胞转分化的实验分组和处理:①含30％大鼠皮肤匀浆液的条件培养基组;②条件培养基中加入EGF(20μg／L)组;③含EGF(20μg／L)的10％FBS DMEM组;④10％FBS DMEM为对照组,各组诱导3 d。(3)诱导后经流式细胞仪检测:①各组ADSCs CK19、CK14的表达。②条件培养基组诱导前、3 d后ADSCs细胞周期。结果流式细胞仪检测CD49d、CD44和CD106阳性率分别为98．32％、90．38％和0．06％;各诱导组细胞CK19阳性率分别为10．44％、8．22％、4．49％,CK14阳性率分别为12．46％、8．19％、4．37％,均较对照组CK19阳性率1．38％、CK14阳性率1．7％升高(P<0．01),差异有统计学意义。条件培养基诱导前ADSCs细胞周期:G1:67．25％、G2:2．46％、S:30．29％,诱导3 d后ADSCs细胞周期: G1:35．04％、G2:0．00％、S:64．96％,细胞分裂增殖速度加快。结论ADSCs可以被诱导向表皮细胞表型转分化,提示ADSCs具有参与皮肤创面修复的潜能。

关键词：成体干细胞细胞培养分化

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干细胞可塑性与细胞融合

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中国危重病急救医学 2006年第4期18卷 255-256页

作者：李海红付小兵解放军总医院第一附属医院(原解放军第三○四医院)全军创伤修复重点实验室北京100037 湖北省郧阳医学院附属太和医院

成体干细胞可塑性指成体组织源性的干细胞除了能分化为居留组织细胞的表型外,还具有分化为其他组织细胞表型的潜能.虽然很多实验证实了干细胞可塑性的存在,但仍有许多学者对此提出质疑,认为干细胞可塑性实际上是移植的供体细胞和不同的... 详细信息

成体干细胞可塑性指成体组织源性的干细胞除了能分化为居留组织细胞的表型外,还具有分化为其他组织细胞表型的潜能.虽然很多实验证实了干细胞可塑性的存在,但仍有许多学者对此提出质疑,认为干细胞可塑性实际上是移植的供体细胞和不同的组织细胞融合后细胞基因组重组的结果.将提供关于干细胞可塑性的争议综述如下。

关键词：干细胞细胞融合干细胞可塑性

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