检索结果-内蒙古大学图书馆

中华结核和呼吸杂志 1996年第6期19卷 342-345页

作者：吴雪琼庄玉辉何秀云李国利张晓刚北京解放军第三○九医院结核病研究室

目的了解结核分支杆菌链霉素（Ｓｍ）耐药基因突变情况，建立快速检测耐药突变株的方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析了２２株结核分支杆菌临床分离株的ｒｐｓＬ基因，并应用ＰＣＲ－限制性片段长度... 详细信息

目的了解结核分支杆菌链霉素（Ｓｍ）耐药基因突变情况，建立快速检测耐药突变株的方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析了２２株结核分支杆菌临床分离株的ｒｐｓＬ基因，并应用ＰＣＲ－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）进一步分析其突变的部位和性质。结果以Ｈ３７Ｒｖ标准株为对照，５株敏感株的ｒｐｓＬ基因未见ＳＳＣＰ泳动异常、有ＭｂｏⅡ酶切位点；１３株耐Ｓｍ株中，１１株（８６％）有ｒｐｓＬ基因泳动异常、无ＭｂｏⅡ酶切位点；４株耐其它抗结核药物株中，也有１株ＳＳＣＰ泳动异常、并无ＭｂｏⅡ酶切位点。结论大多数结核分支杆菌Ｓｍ耐药分离株有ｒｐｓＬ突变，而突变位点大多位于第４３位密码子。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ可能成为快速检测结核分支杆菌耐药突变株的新方法。

关键词：结核分支杆菌聚合酶链反应药物耐受性

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聚合酶链反应－单链构象多态性用于耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变的研究

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中华结核和呼吸杂志 1996年第6期19卷 338-341页

作者：何秀云庄玉辉李国利吴雪琼张晓刚北京解放军第三○九医院结核病研究室

目的研究结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变及其与利福平（ＲＦＰ）耐药性的关系。方法以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法分析了４０株结核分支杆菌临床分离株。ＰＣＲ－Ｓ... 详细信息

目的研究结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变及其与利福平（ＲＦＰ）耐药性的关系。方法以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法分析了４０株结核分支杆菌临床分离株。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法由ＰＣＲ扩增和扩增产物ＤＮＡ单链多态性分析组成。结果两对引物ＰＣＲ扩增产物分别为４１１和２５８ｂｐ，其敏感性分别为５ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ和１ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ；均为属特异性。４０株结核分支杆菌临床分离株２５８ｂｐ扩增片段ＳＳＣＰ图谱的特点：以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，１０株敏感株均无区别；单耐ＲＦＰ或包括ＲＦＰ多种抗结核药３０株，除３株外，其余２７株ＳＳＣＰ图谱有明显的区别；检测阳性率为９０％，特异性为１００％。结论ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可检测出耐ＲＦＰ结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变；该基因是ＲＦＰ的药物靶编码基因，它的突变与ＲＦＰ耐药性有密切关系。

关键词：利福平结核分支杆菌聚合酶链反应基因突变

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结核分支杆菌利福平耐药基因突变的研究

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中华结核和呼吸杂志 1998年第6期21卷 329-332页

作者：吴雪琼张俊仙庄玉辉张晓刚李国利何秀云张军芝贾树林解放军第三○九医院结核病研究室

目的了解我国结核分支杆菌耐利福平（ＲＦＰ）分离株ｒｐｏＢ基因突变情况，建立快速检测结核分支杆菌耐药基因型的分子药敏试验方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ－直接测序法（ＰＣＲ－ＤＳ）... 详细信息

目的了解我国结核分支杆菌耐利福平（ＲＦＰ）分离株ｒｐｏＢ基因突变情况，建立快速检测结核分支杆菌耐药基因型的分子药敏试验方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ－直接测序法（ＰＣＲ－ＤＳ）分析５０株结核分支杆菌临床分离株的ｒｐｏＢ基因。结果３株结核分支杆菌药物敏感株和２株非ＲＦＰ耐药株中，仅１株ｒｐｏＢＳＳＣＰ图谱异常的药物敏感株出现５３１位密码子ＴＣＧ→ＴＴＧ突变。４５株ＲＦＰ耐药株中，１０株ＳＳＣＰ和ＤＳ分析均未见ｒｐｏＢ突变，３５株ＳＳＣＰ和ＤＳ分析异常，其中１４株为５３１位密码子ＴＣＧ→ＴＴＧ或ＴＧＧ或ＴＡＣ突变，１４株为５２６位ＣＡＣ→ＴＡＣ或ＧＡＣ或ＣＣＣ或ＣＴＣ或ＧＴＣ突变，２株为５１６位ＧＡＣ→ＧＴＣ或ＴＡＣ突变，２株为５１６位和５２６位及５１５位和５１６位密码子双点突变，３株ｒｐｏＢ序列与结核分支杆菌不同。结论大多数结核分支杆菌耐ＲＦＰ是由于其ｒｐｏＢ基因突变所致。

关键词：结核杆菌利福平结核病抗药性药物疗法

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分枝杆菌噬菌体应用研究展望

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中华结核和呼吸杂志 2004年第12期27卷 799-800页

作者：庄玉辉解放军第三○九医院结核病研究室北京100091

噬菌体是微生物学的一个重要分支,是一种专性感染并寄生于相应活的细菌体内的非细胞原生物,称为细菌病毒.噬菌体基本上包括裂解型和温和(溶原)型两类,与其他病毒有一些共同的生物学特性[1]:个体小,结构简单,有滤过性;没有独立的代谢酶系... 详细信息

噬菌体是微生物学的一个重要分支,是一种专性感染并寄生于相应活的细菌体内的非细胞原生物,称为细菌病毒.噬菌体基本上包括裂解型和温和(溶原)型两类,与其他病毒有一些共同的生物学特性[1]:个体小,结构简单,有滤过性;没有独立的代谢酶系,只能在活的处于代谢状态的宿主菌体内繁殖;噬菌体感染细菌具有种属特异性,即一种噬菌体只能感染一个细菌种属,甚至于一个种属的几株细菌.噬菌体技术在各种细菌感染性疾病的诊断、治疗与预防方面已成功得到应用.从首次分离分枝杆菌噬菌体至今已有50多年历史,从不同来源分离出噬菌体达250种之多.尽管在分枝杆菌噬菌体的分类、结核病流行病学以及实验治疗、分子遗传学的应用等方面做过一些研究[2],但是在这期间所发表的论文和应用实例并不多.近几年来,由于结核病诊断、治疗与预防领域仍然存在着一些亟待解决的棘手问题,国外研究者又开始探索研究分枝杆菌噬菌体在结核病快速诊断、药敏试验及实验性治疗中的应用,取得了若干进展.

关键词：噬菌体体内分枝杆菌感染病毒代谢酶滤过生物独立个体

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聚合酶链反应和DNA探针联合检测临床标本中结核杆菌的研究

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中华结核和呼吸杂志 1996年第1期19卷 37-40页

作者：吴雪琼庄玉辉张晓刚李国利解放军第三○九医院结核病研究室北京100091

目的为提高聚合酶链反应(PCR)检测未培养临床标本中结核杆菌的敏感性和特异性。方法首先通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,然后用Southern法转移至膜上,与地高辛标记的人型结核杆菌DNA探针杂交。结果 PCR电泳检测的灵敏度为1pg,而DNA... 详细信息

目的为提高聚合酶链反应(PCR)检测未培养临床标本中结核杆菌的敏感性和特异性。方法首先通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,然后用Southern法转移至膜上,与地高辛标记的人型结核杆菌DNA探针杂交。结果 PCR电泳检测的灵敏度为1pg,而DNA探针检测将灵敏度提高到100fg。24种受试菌株中,只有结核分支杆菌复合体和蟾分支杆菌有245hp扩增带,其中牛型结核分支杆菌与188bp探针不杂交。对225例临床标本进行涂片、PCR电泳和探针检测,51例非结核性标本三者均阴性;1例非结核分支杆菌感染者的痰标本涂片和培养均阳性,PCR电泳和探针检测均阴性。菌种鉴定为快生长分支杆菌;173例结核性标本三者阳性率分别为16.2%、37.6%和50.3%。此外,将PCR电泳图谱分为四型,并探讨了其影响因素。结论结果表明PCR是结核病早期诊断和鉴别诊断的一种有价值的检测手段,而与探针联合检测可提高阳性检出率,避免漏判和误判。

关键词：结核杆菌痰液检验聚合酶链反应 DNA探针

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耐多药结核病耐药分子机制的研究

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中华结核和呼吸杂志 1997年第6期20卷 332-335页

作者：吴雪琼庄玉辉张俊仙张晓刚何秀云李国利解放军第三O九医院结核病研究室

目的研究耐多药结核分支杆菌耐药的分子机理，建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法。方法通过ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析结核分支杆菌耐多药临床分离株的ｒｐｏＢ、ｒｐｓＬ、ｋａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列。结果ＰＣＲ分析... 详细信息

目的研究耐多药结核分支杆菌耐药的分子机理，建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法。方法通过ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析结核分支杆菌耐多药临床分离株的ｒｐｏＢ、ｒｐｓＬ、ｋａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列。结果ＰＣＲ分析耐药基因的敏感性为１～１０ｐｇＤＮＡ；除ｒｐｏＢ基因引物ＰＣＲ扩增为属特异性外，余耐药基因引物ＰＣＲ扩增都具有较高的特异性。２０株耐多药分离株中，９０％有２种以上耐药遗传标志改变，１０％只有ｒｐｏＢ基因突变。结论耐多药是各种药物靶基因逐步突变所致，少数由一个耐多药位点突变所致，通过ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ可简便、快速地检测大部分结核分支杆菌耐多药分离株的耐药基因型。

关键词：结核病耐多药结核病耐药分子机制 PCR

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结核分枝杆菌保护性抗原的研究进展

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中华结核和呼吸杂志 2006年第5期29卷 340-342页

作者：吴雪琼解放军第三○九医院全军结核病中心结核病研究室北京100091

结核分枝杆菌(MTB)蛋白根据蛋白分布的位置可分为分泌蛋白、胞质蛋白和膜蛋白.分泌蛋白是MTB在早、中期分泌释放于菌体外的一组蛋白,游离于培养基中或在感染细胞的吞噬小体内,在菌体内仅有微量存在;而胞质蛋白主要存在于细菌的细胞质中... 详细信息

结核分枝杆菌(MTB)蛋白根据蛋白分布的位置可分为分泌蛋白、胞质蛋白和膜蛋白.分泌蛋白是MTB在早、中期分泌释放于菌体外的一组蛋白,游离于培养基中或在感染细胞的吞噬小体内,在菌体内仅有微量存在;而胞质蛋白主要存在于细菌的细胞质中,在细菌对数生长的晚期细菌死亡后才释放到培养基中.将培养不超过5 d的滤液蛋白称为短期培养滤液蛋白,这是记忆性免疫CD+4T淋巴细胞的靶分子;将培养7 d以上的滤液蛋白称为长期培养滤液蛋白,随着培养时间的延长,滤液中蛋白越来越多,由于部分MTB开始裂解死亡,释放胞质蛋白,培养42 d时滤液中已有100多种蛋白质.结核病保护性免疫主要是细胞免疫,诱导细胞免疫反应的抗原主要存在于细胞壁、细胞质和培养滤液中,其中分泌蛋白和细胞壁表面的蛋白是主要的免疫保护性抗原,将成为新疫苗研究的首选靶抗原.现将保护性抗原的编码基因、生物学特性、免疫学功能等介绍如下.

关键词：免疫保护性抗原结核分枝杆菌 CD4^+T淋巴细胞细胞免疫反应分泌蛋白胞质蛋白培养基保护性免疫生物学特性免疫学功能

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结核分支杆菌耐吡嗪酰胺分离株pncA基因突变的研究

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中华结核和呼吸杂志 2000年第1期23卷 40-42页

作者：吴雪琼张俊仙钟敏俞伟丁北川张军芝贾树林解放军第三○九医院结核病研究室北京100091 北京市结核病防治所解放军第三○九医院北京100091

目的　了解我国结核分支杆菌耐吡嗪酰胺 (PZA)分离株pncA基因突变情况 ,研究其与耐PZA之间的关系。方法　通过聚合酶链反应 (PCR) -单链构象多态性 (SSCP)和PCR -循环测序法(AS)分析 74株结核分支杆菌临床分离株的pncA基因。以结核分支... 详细信息

目的　了解我国结核分支杆菌耐吡嗪酰胺 (PZA)分离株pncA基因突变情况 ,研究其与耐PZA之间的关系。方法　通过聚合酶链反应 (PCR) -单链构象多态性 (SSCP)和PCR -循环测序法(AS)分析 74株结核分支杆菌临床分离株的pncA基因。以结核分支杆菌H37RV 标准株为对照。结果　 3 2株药物敏感株pncA基因SSCP分析未发现异常。 2 0株耐非PZA药物的分离株中 ,16株pncA基因SSCP泳动正常 ;4株异常 ,其中 2株测序分析分别为 5 8位密码子TTC→TTA突变和 68位密码子TGG→CGG突变。 2 2株耐PZA分离株中 ,10株pncA基因SSCP泳动异常 ,其中 2株测序分析均为 5 8位密码子TTC→TTA突变 ;12株未发现异常。结论　PncA基因突变是结核分支杆菌耐PZA产生的一种分子机制 ,通过检测pncA基因突变可快速检测部分结核分支杆菌耐PZA基因型。

关键词：分支杆菌药物耐受性吡嗪酰胺肺结核

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结核病实验室诊断新技术研究应用中值得重视的问题

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中华结核和呼吸杂志 1999年第3期22卷 133-134页

作者：庄玉辉北京解放军第三○九医院结核病研究室

在结核病传统实验室诊断方法中，抗酸染色镜检阳性率仅３０％左右；结核菌素皮肤试验阳性率约为７５％，但有假阳性问题；培养结果虽可靠，但需时３～８周。因此，多年来国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法。... 详细信息

在结核病传统实验室诊断方法中，抗酸染色镜检阳性率仅３０％左右；结核菌素皮肤试验阳性率约为７５％，但有假阳性问题；培养结果虽可靠，但需时３～８周。因此，多年来国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法。在应用新的实验技术过程中，也发现存...

关键词：结核病诊断实验室诊断

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重症继发性肺结核患者基因表达谱的分析和验证

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中华医学杂志 2014年第42期94卷 3304-3309页

作者：苏瑾文刘艳华杨秉芬程小星解放军医学院北京100853 解放军第三○九医院结核病研究室

目的分析和验证重症继发性肺结核患者基因表达谱.方法收集解放军三○九医院结核病研究所2012年5月至2013年10月住院患者中符合入选标准的继发性肺结核患者103例,根据病情严重程度分为重症组（57例）和轻症组（46例）,并以同期进行健... 详细信息

目的分析和验证重症继发性肺结核患者基因表达谱.方法收集解放军三○九医院结核病研究所2012年5月至2013年10月住院患者中符合入选标准的继发性肺结核患者103例,根据病情严重程度分为重症组（57例）和轻症组（46例）,并以同期进行健康体检且年龄相匹配的45名健康人为对照组.选取重症组4例、轻症组3例和对照组5名用Affymetrix基因表达谱芯片进行全基因组检测和分析,对重症组比对轻症组筛选的差异基因做聚类分析和生物信息学分析;对以上各组剩余的53例、43例和40名用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）验证芯片结果,其中验证代表基因原癌基因（JUN）表达水平是重症组、轻症组各20例,对照组8名;用方差分析和非参数检验统计方法判断组间的统计学差异.结果芯片结果显示重症组比对轻症组差异基因为406条,下调基因264条,上调基因142条,差异基因以表达下调为主;聚类分析显示同组样本表达谱有相似性,提示芯片试验有一定重复性,结果可靠;基因本体论注释显示差异基因主要参与了生物学过程,包括免疫反应、信号转导、DNA依赖的转录调节、炎症反应、抗原处理与提呈、趋化作用等;信号通路分析显示差异基因参与了22条炎症和免疫反应相关通路,主要有B细胞受体信号通路、抗原处理与提呈、Toll样受体信号通路、丝裂原活化蛋白激酶通路、转化生长因子-β通路等;RT-PCR验证JUN吸光度值在组间比较的统计学结果为重症组比轻症组P ＜0.001,重症组表达下调,与表达谱芯片结果相符.结论重症继发性肺结核与轻症继发性肺结核患者相比对有大量差异表达基因,其肺结构严重损害与基因水平差异有关.

关键词：结核,肺基因表达谱信号通路聚合酶链反应

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