检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2002年第1期16卷 85-87页

作者：成军钟彦伟刘妍董菁杨继珍杨守纯解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的　构建丙型肝炎病毒 (HCV)NS3基因的原核细胞表达载体 ,实现在大肠埃希菌中的可诱导性表达。方法　应用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,以美国HCV H株全长cDNA质粒为模板 ,扩增获得NS3基因片段 ,克隆到原核表达载体pET 30C(+)中 ,构建原... 详细信息

目的　构建丙型肝炎病毒 (HCV)NS3基因的原核细胞表达载体 ,实现在大肠埃希菌中的可诱导性表达。方法　应用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,以美国HCV H株全长cDNA质粒为模板 ,扩增获得NS3基因片段 ,克隆到原核表达载体pET 30C(+)中 ,构建原核表达载体pET NS3,转化BL2 1(DE3)宿主菌 ,以IPTG诱导 ,获得NS3蛋白的可诱导性表达 ,以HCVNS3的单链可变区抗体 (ScFv)证实表达的NS3蛋白的特异性。结果　以HCVNS3基因序列特异性引物 ,PCR扩增获得 1893bp的NS3DNA片段 ,插入pET 30C(+)表达载体。转化BL 2 1(DE3)受体菌 ,经培养、IPTG诱导 ,获得了重组HCVNS3蛋白的表达 ,以HCVNS3的ScFv证实了表达的重组蛋白HCVNS3的特异性。

关键词：丙型肝炎病毒 NS3 基因表达聚合酶链反应大肠埃希菌

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HCV核心蛋白与HBV X蛋白协同反式激活作用的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2003年第1期17卷 70-72页

作者：刘妍成军邵得志王琳钟彦伟董菁李克李莉解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的　探讨HCV核心蛋白与HBVX蛋白的协同反式激活作用。方法　构建表达HCV核心蛋白的重组质粒pcDNA3 .1( )core和表达HBVX蛋白的重组质粒pcDNA3 .1( )X ;转染HepG2 细胞 ,从转录和翻译水平鉴定病毒基因的瞬时表达 ;与报告质粒pSV lacZ... 详细信息

目的　探讨HCV核心蛋白与HBVX蛋白的协同反式激活作用。方法　构建表达HCV核心蛋白的重组质粒pcDNA3 .1( )core和表达HBVX蛋白的重组质粒pcDNA3 .1( )X ;转染HepG2 细胞 ,从转录和翻译水平鉴定病毒基因的瞬时表达 ;与报告质粒pSV lacZ共转染HepG2 细胞 ,检测 β 半乳糖苷酶表达活性 ,酶的活性反映了表达的肝炎病毒蛋白对SV40病毒早期启动子增强子功能的影响。结果　构建成HCV核心蛋白及HBVX蛋白的重组表达载体pcDNA3 .1( )core、pcDNA3 .1( )X ;在HepG2 细胞均能瞬时表达相应的肝炎病毒蛋白 ;单独共转染试验中pcDNA3 .1( )core、pcDNA3 .1( )X组的 β 半乳糖苷酶的表达分别是对照的 4.9、3 .5倍 ,两种质粒共同转染时酶的表达是对照的 9倍 ;表达质粒对 β 半乳糖苷酶表达的激活作用呈剂量依赖性。结论　HepG2 细胞中表达的HCV核心蛋白和HBVX蛋白均具有反式激活SV40早期启动子增强子的功能 ,并且两种蛋白的反式激活功能具有协同特性。本试验有助于解释HCV、HBV感染 ,尤其是共同感染的致病

关键词：丙型肝炎病毒病毒核心蛋白类乙型肝炎病毒反式激活启动区

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HCV核心蛋白结合蛋白基因6的克隆

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中华实验和临床病毒学杂志 2002年第4期16卷 351-353页

作者：李克王琳成军张玲霞段惠娟陆荫英杨继珍刘妍夏小兵王刚董菁李莉钟彦伟洪源陈菊梅解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的　克隆与丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白结合的肝细胞中的未知蛋白基因。方法　应用酵母双杂交系统 ,构建丙型肝炎病毒核心蛋白诱饵质粒 ,转化酵母AH10 9后与含文库质粒的酵母Y187进行配合 ,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选。筛选出... 详细信息

目的　克隆与丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白结合的肝细胞中的未知蛋白基因。方法　应用酵母双杂交系统 ,构建丙型肝炎病毒核心蛋白诱饵质粒 ,转化酵母AH10 9后与含文库质粒的酵母Y187进行配合 ,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选。筛选出 30个克隆 ,既能在四缺营养缺陷培养基上生长 (SD Trp Leu Ade His)又能在涂有x α gal的四缺培养平皿上长出蓝色菌落 ,提取此酵母克隆的质粒 ,转化大肠埃希菌后进行测序 ,进行生物信息学分析。结果　分析结果显示 ,其中 6号克隆的测序结果与Genbank中的 2个未知功能序列有 98%的同源性 ,初步证明了此基因与丙型肝炎病毒核心蛋白有结合性。结论　丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白肝基因克隆成功。

关键词：丙型肝炎病毒病毒核心蛋白类杂交酵母菌基因克隆丙型肝炎

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硕大利什曼原虫激活蛋白激酶C受体的基因克隆与序列分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2001年第6期19卷 373-374页

作者：成军夏小兵王刚刘妍钟彦伟王琳杨继珍解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

激活蛋白激酶C受体(receptor for activated protem ***)基因家族的成员在目前已知的所有生物类型中普遍存在,在利什曼原虫体内也不例外[1].利什曼原虫表达的RACK蛋白具有很强的抗原性,能够诱导感染机体的免疫系统,产生针对RACK蛋白很... 详细信息

激活蛋白激酶C受体(receptor for activated protem ***)基因家族的成员在目前已知的所有生物类型中普遍存在,在利什曼原虫体内也不例外[1].利什曼原虫表达的RACK蛋白具有很强的抗原性,能够诱导感染机体的免疫系统,产生针对RACK蛋白很强的细胞免疫应答反应[2].为了研究硕大利什曼原虫RACK的基因结构特点,及其作为候选疫苗的应用前景,我们从体外培养的硕大利什曼原虫的基因组DNA中,应用多聚酶链反应(PCR)技术扩增获得了该原虫的RACK基因,并对该基因和编码产物的序列进行了分析.

关键词：利什曼原虫蛋白激酶C受体基因克隆多聚酶链反应 RACK基因

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丙型肝炎病毒核心蛋白与转位蛋白相互作用的研究

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中华医学杂志 2002年第10期82卷 673-677页

作者：李克王琳成军陆荫英张玲霞牟劲松洪源刘妍段惠娟王刚李莉陈菊梅北京解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心 100039

目的　本文为了探讨丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白 (core)在肝肿瘤中起作用的分子机制 ,研究核心蛋白是否与肿瘤相关蛋白的相互作用。方法　应用酵母双杂交系统 3构建HCV核心蛋白诱饵质粒 ,转化酵母AH10 9后与含文库质粒的酵母Y187进行配... 详细信息

目的　本文为了探讨丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白 (core)在肝肿瘤中起作用的分子机制 ,研究核心蛋白是否与肿瘤相关蛋白的相互作用。方法　应用酵母双杂交系统 3构建HCV核心蛋白诱饵质粒 ,转化酵母AH10 9后与含文库质粒的酵母Y187进行配合 ,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选。筛选出 30个克隆 ,对既能在四缺营养缺陷培养基上生长 (SD/ Trp Leu His Ade) ,又能在涂有x α gal的四缺培养平皿上长出蓝色菌落 ,提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌后测序 ,进行生物信息学分析。发现一个可以引起染色体转位的基因即与肿瘤发生有关的基因转位蛋白基因 (Translin)同源。为了进一步证实转位蛋白基因所表达蛋白能与HCV核心蛋白相互作用 ,网织红细胞裂解物进行体外翻译、蛋白之间的免疫共沉淀。结果　结果显示 ,转位蛋白不但在酵母双杂交中能与HCV核心蛋白相互作用 ,而且在体外翻译后也能相互作用。结论　HCV核心蛋白可以和转位蛋白相互作用 ,推测此蛋白可能在HCV致癌中起一定作用 ,部分解释了HCV引起肿瘤的发病机制。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白转位蛋白相互作用研究

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丙型肝炎病毒非结构蛋白5A调节新生多肽复合物启动子转录活性的研究

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中华肝脏病杂志 2005年第8期13卷 579-581页

作者：戴久增成军曲建慧纪冬解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)对新生多肽相关复合物(NACA) 启动子转录活性的影响。方法以我室构建的能够表达NS5A蛋白的pcDNA3.1(-)-NS5A质粒和含有NACA 基因启动子的pCAT3-NACA报告基因质粒共转染HepG2细胞系设为实验... 详细信息

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)对新生多肽相关复合物(NACA) 启动子转录活性的影响。方法以我室构建的能够表达NS5A蛋白的pcDNA3.1(-)-NS5A质粒和含有NACA 基因启动子的pCAT3-NACA报告基因质粒共转染HepG2细胞系设为实验组,同时pCAT3-NACA单独转染HepG2细胞系作为对照组。用酶联免疫吸附法检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果pCAT3-NACA单独转染HepG2细胞的CAT酶表达活性与pCAT3-NACA和pcDNA3.1(-)-NS5A共转染组HepG2细胞的CAT酶表达活性比较,共转染组A值下降了79.3%。结论HCV NS5A能够抑制NACA 启动子的活性,对NACA的表达具有下调作用。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白5A 调节作用多肽复合物启动子转录活性 NACA HCV

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人肝再生增强因子基因组DNA的克隆化与序列分析

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中华肝脏病杂志 2000年第1期8卷 12-14页

作者：成军钟彦伟刘妍董菁杨继珍陈菊梅解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的克隆人肝再生增强因子（ａｕｇｎｅｎｔｅｒｏｆｌｉｖｅｒｒｅｇｒｎｅｒａｔｉｏｎ，ＡＬＲ）的基因组ＤＮＡ，并进行序列分析。方法采用人肝再生增强因子ｃＤＮＡ及其编码序列，对基因的核苷酸序列数据库（ＧｅｎＢａｎｋ）... 详细信息

目的克隆人肝再生增强因子（ａｕｇｎｅｎｔｅｒｏｆｌｉｖｅｒｒｅｇｒｎｅｒａｔｉｏｎ，ＡＬＲ）的基因组ＤＮＡ，并进行序列分析。方法采用人肝再生增强因子ｃＤＮＡ及其编码序列，对基因的核苷酸序列数据库（ＧｅｎＢａｎｋ）以Ｂｌａｓｔ为工具进行核苷酸同源性比较分析，寻找相应的ＡＬＲ基因组ＤＮＡ序列。结果从ＧｅｎＢａｎｋ核苷酸序列数据库中寻找到人ＡＬＲ基因组ＤＮＡ全序列，由１８１３个核苦酸组成。人ＡＬＲ基因组ＤＮＡ序列由３段外显子（ｅｘｏｎ）组成，分别为１８ｎｔ、１９７ｎｔ和１６３ｎｔ。基因的编码产物由１２５个氨基酸残基组成，与小鼠ＡＬＲ基因组ＤＮＡ结构类似。基因组ＤＮＡ定位于染色体的１６ｐ１３．３位点上。结论获得人ＡＬＲ基因组ＤＮＡ全序列克隆。

关键词：克隆肝再生增强因子肝再生 DNA

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杜氏利什曼原虫蛋白磷酸酶-2C的基因克隆化与序列分析

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中国人兽共患病杂志 2001年第3期17卷 37-39页

作者：成军夏小兵王刚刘妍钟彦伟王琳杨继珍解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心

目的　克隆杜氏利什曼原虫 (Leishmaniadonovani,Ld) 1S株蛋白磷酸酶 2C(PP2C)的编码基因 ,为应用这种编码T细胞抗原的基因进行基因疫苗研究奠定基础。方法　体外培养杜氏利什曼原虫 1S株无鞭毛体 ,常规方法从虫体提取制备基因组DNA。... 详细信息

目的　克隆杜氏利什曼原虫 (Leishmaniadonovani,Ld) 1S株蛋白磷酸酶 2C(PP2C)的编码基因 ,为应用这种编码T细胞抗原的基因进行基因疫苗研究奠定基础。方法　体外培养杜氏利什曼原虫 1S株无鞭毛体 ,常规方法从虫体提取制备基因组DNA。以夏科氏利什曼原虫 (Leishmaniachagasi,Lc)的PP2C基因序列为参照 ,设计并合成利什曼原虫PP2C基因序列特异性的引物。结果　以杜氏利什曼原虫的基因组为模板 ,利用多聚酶链反应 (PCR)技术 ,扩增获得了杜氏利什曼原虫PP2C的全长编码基因。基因序列测定结果表明 ,杜氏利什曼原虫 1S株PP2C基因序列长度为 1317bp ,开放读码框架由 12 2 1bp组成 ,编码产物为 40 6个氨基酸残基。获得的杜氏利什曼原虫 1S株的PP2C基因与来源于夏科氏利什曼原虫的PP2C氨基酸残基序列的同源性为 95 % (387/ 40 6 )。结论　本研究克隆了杜氏利什曼原虫的PP2C基因。

关键词：杜氏利什曼原虫蛋白磷酸酶2C 基因疫苗 T细胞抗原基因克隆化序列分析

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丙型肝炎病毒NS_3蛋白人源基因工程单链抗体的表达

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中华肝脏病杂志 2000年第3期8卷 171-173页

作者：钟彦伟成军刘妍董菁杨继珍张玲霞解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的在大肠杆菌ＸＬ_１－Ｂｌｕｅ中表达可溶性的抗ＨＣＶ非结构蛋白ＮＳ_３的人源单链可变区抗体（ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎｖａｒｉａｂｌｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔａｎｔｉｂｏｄｙ，ＳＣＦＶ）。方法以重组的ＨＣＶＮＳ_３为抗原... 详细信息

目的在大肠杆菌ＸＬ_１－Ｂｌｕｅ中表达可溶性的抗ＨＣＶ非结构蛋白ＮＳ_３的人源单链可变区抗体（ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎｖａｒｉａｂｌｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔａｎｔｉｂｏｄｙ，ＳＣＦＶ）。方法以重组的ＨＣＶＮＳ_３为抗原，利用噬菌体抗体库技术筛选含有抗－ＨＣＶＮＳ_３ＳＣＦｖ基因的噬菌体克隆。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒，经ＳｆｉＩ／ＮｏｔＩ酶切鉴定后，亚克隆到ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ载体；转化大肠杆菌ＸＬ_１－Ｂｌｕｅ，提取质粒进行ＤＮＡ序列测定；异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｔｈｉｏ－β－Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ，ＩＰＴＧ）诱导表达ＨＣＶＮＳ_３可溶性单链可变区抗体。ＥＬＩＳＡ和斑点吸印杂交检测其与不同来源的抗原的结合活性。结果筛选到的ＨＣＶＮＳ_３的单链抗体基因，经限制性内切酶酶切和序列分析表明，该抗体基因由７５０ｂｐ组成，ＥＬＩＳＡ和斑点吸印杂交结果表明，在大肠杆菌ＸＬＩ-Ｂｉｌｌ６中表达的ＨＣＶＮＳ_３的单链抗体，可与不同来源的ＮＳ_３抗原结合。结论大肠杆菌ＸＬ_Ｉ－Ｂｌｕｅ表达的ＮＳ_３－ＳＣＦＶ具有结合不同来源的ＨＣＶＮＳ３的活性和特异性。

关键词：丙型肝炎病毒单链可变区抗体 NS3蛋白

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杜氏利什曼原虫激活蛋白激酶C受体的基因克隆化与序列分析

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中国人兽共患病杂志 2002年第2期18卷 24-27页

作者：成军夏小兵王刚刘妍钟彦伟王琳杨继珍解放军第三二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的　克隆杜氏利什曼原虫 (LeishmaniadonovaniLd) 1S株激活蛋白激酶C受体 (RACK ,receptorofactivatedpro teinCkinase)的编码基因 ,为应用这种编码T细胞抗原的基因进行基因疫苗的研究奠定基础。方法　体外培养杜氏利什曼原虫 1S株无... 详细信息

目的　克隆杜氏利什曼原虫 (LeishmaniadonovaniLd) 1S株激活蛋白激酶C受体 (RACK ,receptorofactivatedpro teinCkinase)的编码基因 ,为应用这种编码T细胞抗原的基因进行基因疫苗的研究奠定基础。方法　体外培养杜氏利什曼原虫 1S株无鞭毛体 ,常规方法提取制备基因组DNA。以硕大利什曼原虫 (Leishmaniaamjor)的RACK基因的核苷酸序列为参照 ,设计并合成利什曼原虫RACK基因序列特异性的引物。以杜氏利什曼原虫的基因组DNA为模板 ,利用多聚酶链反应(PCR)技术 ,扩增获得了杜氏利什曼原虫RACK的全长编码基因。结果　基因序列测定结果表明 ,杜氏利什曼原虫 1S株RACK基因序列长度为 981bp ,开放读码框架由 831bp组成 ,编码产物为 2 76个氨基酸残基。获得的杜氏利什曼原虫 1S株的RACK基因与来源于硕大利什曼原虫的RACK基因序列同源性达 98% (2 6 4 / 2 6 7)。结论　本研究克隆了杜氏利什曼原虫的RACK基因。

关键词：利什曼原虫激活蛋白激酶C受体基因疫苗 T细胞抗原基因克隆化序列分析

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