检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2010年第2期24卷 125-127页

作者：刘晓燕石峰赵鸿王慧芬解放军第三0二医院肝衰竭治疗研究中心北京100039 解放军第三0二医院传染病研究所北京100039

目的探讨乙型肝炎病毒所致慢加急性肝衰竭（HBV—ACLF）患者外周血中CD8^＋T细胞上PD-1（Programmed death-1）的表达以及对CD8^＋T细胞的影响。方法收集60例HBV—ACLF患者外周血；应用流式细胞仪检测外周血中CD8^＋淋巴细胞上的PD-1、C... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒所致慢加急性肝衰竭（HBV—ACLF）患者外周血中CD8^＋T细胞上PD-1（Programmed death-1）的表达以及对CD8^＋T细胞的影响。方法收集60例HBV—ACLF患者外周血；应用流式细胞仪检测外周血中CD8^＋淋巴细胞上的PD-1、CD95、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、CD107a的表达以及CD14细胞上PD—L1的表达；根据不同病情分期和不同预后比较各分子的表达差异；设15名肝硬化患者及15名健康人为对照组。结果（1）HBV-ACLF患者CD8^＋T细胞上PD-1较肝硬化组和健康组表达上调（P〈0．05）；好转组PD-1表达率低于无效组（P〈0．05）；早、中、晚三期PD-1表达率呈上升趋势（P〈0．05）；（2）PD—L1在好转组及病情早期表达相对最低；（3）PD-1与CD95在死亡组表达明显升高；穿孔素、颗粒酶及CD107a在死亡组表达升高，但PD-1在这三类细胞上表达率非常低。结论PD-1在***患者外周血CD8^＋T细胞上表达上调，且与病情严重程度呈正比。其上调表达可能促进总CD8^＋T细胞的凋亡，但对于具有杀伤活性的CD8^＋T细胞抑制作用相对较弱。

关键词：肝功能衰竭程序性死亡分子 CD8阳性T淋巴细胞

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1例多药耐药慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒基因突变的5年动态分析

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中华肝脏病杂志 2008年第7期16卷 497-499页

作者：李晓东王琳李梵貌盼勇王慧芬徐东平解放军第三0二医院全军传染病研究所北京100039 肝衰竭治疗研究中心

目的动态检测乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因和前C及基本核心启动子（BCP）区基因突变，分析基因突变与核苷（酸）类似物耐药、HBeAg阴转的关系。方法收集1例在我院14次住院治疗患者血清18份，提取DNA，采用巢式PCR法扩增HBV靶基因片段，... 详细信息

目的动态检测乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因和前C及基本核心启动子（BCP）区基因突变，分析基因突变与核苷（酸）类似物耐药、HBeAg阴转的关系。方法收集1例在我院14次住院治疗患者血清18份，提取DNA，采用巢式PCR法扩增HBV靶基因片段，对PCR产物进行DNA双向测序，NTI软件对比分析结果，分析逆转录酶基因12个耐药位点和前C／BCP区6个位点上的突变情况，结合临床资料解析突变意义。结果先后检测到了引起拉米夫定耐药的M204I／V共生突变、L180M＋M204V突变，引起恩替卡韦耐药的S202G突变，以及引起HBeAg阴转的G1896A突变，检测结果与临床病情发展情况符合。结论采用DNA序列测定方法可以全面了解HBV基因突变，有助于临床监测病情发展，合理进行抗病毒治疗。

关键词：肝炎病毒乙型突变耐药

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拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒多聚酶区基因突变的检测分析

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肝脏 2008年第2期13卷 104-107页

作者：许彪成军徐东平李晓东毛远丽王海滨马洪滨胡瑾华王业东解放军第三○二医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 解放军第三○二医院全军传染病研究所肝衰竭治疗研究中心北京100039 北京地坛医院解放军第三○二医院全军传染病研究所临床检验中心北京100039 解放军第三○二医院院办北京100039

目的建立以基因测序检测乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶区基因突变的方法,并分析拉米夫定耐药者HBV多聚酶区基因主要耐药突变的分布情况。方法采用巢式PCR方法对174例拉米夫定耐药患者血清HBV多聚酶区进行扩增,对PCR产物进行直接测序,将YMDD... 详细信息

目的建立以基因测序检测乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶区基因突变的方法,并分析拉米夫定耐药者HBV多聚酶区基因主要耐药突变的分布情况。方法采用巢式PCR方法对174例拉米夫定耐药患者血清HBV多聚酶区进行扩增,对PCR产物进行直接测序,将YMDD突变阳性与阴性的病例分别进行HBV耐药基因突变的分析和比较。结果本研究154例YMDD突变阳性的患者中有10种突变类型,其中以rt M204I突变最多见,为46例(29.9%),其次为rt L180M/M204V(26.6%)、rt L180M/M204I(17.5%)、rt V173/L180M/M204V(13.0%)、rt M204V(2.6%)、rt L180M/M204V/M204I(5.8%)、rt V173L/L180M/M204V/M204I(1.3%)、rt V173L/M204I rt M204I/M204V(1.3%)、rt M204I/M204V(1.3%)。另外,rt M204V联合rt L180M或rt V173L的突变率较rt M204I联合rt L180M或rt V173L显著增高。从rt L180M突变角度来看,rt L180M与rt M204V的联合突变率最高,其次为rt L180M联合rt M204I突变,rt L180M与rt L173M的联合突变率最低。从rt V173L突变角度来看,rt V173L联合rt M204V或rt L180M突变的发生率均高于rt V173L联合rt M204I的突变率,且rt V173L突变多联合rt M204V和rt L180M突变同时发生。结论拉米夫定耐药株的氨基酸突变复杂多样,需要对拉米夫定耐药多个相关位点进行检测。

关键词：肝炎病毒,乙型变异拉米夫定 YMDD

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自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗HBV感染肝硬变患者的临床疗效分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2007年第1期21卷 64-66页

作者：苏海滨李捍卫赵洪兰施明张冰汤紫荣雷周云王慧芬王福生解放军第三0二医院感染十三科北京100039 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所解放军第三0二医院传染病研究所生物治疗研究中心

目的观察自体细胞因子诱导杀伤细胞（CIK细胞）治疗HBV DNA阳性肝硬化患者的近期疗效。方法 33例HBV DNA阳性肝硬化患者给予CIK细胞治疗，在体外培养前后以及回输体内后检测CD3^＋、CD3^＋ CD4^＋、CD3^＋ CD8^＋、CD3^＋ CD56^＋、CD... 详细信息

目的观察自体细胞因子诱导杀伤细胞（CIK细胞）治疗HBV DNA阳性肝硬化患者的近期疗效。方法 33例HBV DNA阳性肝硬化患者给予CIK细胞治疗，在体外培养前后以及回输体内后检测CD3^＋、CD3^＋ CD4^＋、CD3^＋ CD8^＋、CD3^＋ CD56^＋、CD25^＋细胞以及mDC和pDC。比较治疗前后病毒学指标及肝脏功能的变化。结果培养结束以及回输体内后，CD3^＋细胞、CD3^＋ CD8^＋细胞、CD3^＋ CD56^＋细胞较培养前显著升高，mDC和pDC在回输后也明显增高。12例患者HBV DNA阴转，4例患者拷贝数下降大于2个log。在14例HBeAg阳性患者中有10例阴转，2例出现HBeAb转换。肝脏功能较治疗前有所好转。所有患者均能耐受治疗。结论 CIK细胞可明显提高免疫效应细胞数量，具有一定的抗病毒效应作用，毒副作用低。

关键词：细胞系细胞因子类肝硬化肝炎,乙型

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人体免疫应答对乙型肝炎临床疗效和疾病转归的影响

人体免疫应答对乙型肝炎临床疗效和疾病转归的影响

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全军第十次传染病学学术研讨会

作者：王福生解放军第三0二医院生物治疗研究中心解放军传染病研究所北京 100039

人体感染乙型肝炎病毒(HBV)后，病毒、肝细胞和人体的免疫应答三者之间发生着相互作用，从而影响着乙型肝炎的病程和转归进展。本文介绍了HBV感染的自然病程;HBV感染的免疫学分期;慢性乙型肝炎患者的免疫特点;免疫状态形响临床转归以及... 详细信息

人体感染乙型肝炎病毒(HBV)后，病毒、肝细胞和人体的免疫应答三者之间发生着相互作用，从而影响着乙型肝炎的病程和转归进展。本文介绍了HBV感染的自然病程;HBV感染的免疫学分期;慢性乙型肝炎患者的免疫特点;免疫状态形响临床转归以及疗效影响自然病程。

关键词：乙型肝炎肝炎病毒人体免疫应答临床疗效疾病转归

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丙型肝炎病毒非结构蛋白5A调节新生多肽复合物启动子转录活性的研究

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中华肝脏病杂志 2005年第8期13卷 579-581页

作者：戴久增成军曲建慧纪冬解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)对新生多肽相关复合物(NACA) 启动子转录活性的影响。方法以我室构建的能够表达NS5A蛋白的pcDNA3.1(-)-NS5A质粒和含有NACA 基因启动子的pCAT3-NACA报告基因质粒共转染HepG2细胞系设为实验... 详细信息

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)对新生多肽相关复合物(NACA) 启动子转录活性的影响。方法以我室构建的能够表达NS5A蛋白的pcDNA3.1(-)-NS5A质粒和含有NACA 基因启动子的pCAT3-NACA报告基因质粒共转染HepG2细胞系设为实验组,同时pCAT3-NACA单独转染HepG2细胞系作为对照组。用酶联免疫吸附法检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果pCAT3-NACA单独转染HepG2细胞的CAT酶表达活性与pCAT3-NACA和pcDNA3.1(-)-NS5A共转染组HepG2细胞的CAT酶表达活性比较,共转染组A值下降了79.3%。结论HCV NS5A能够抑制NACA 启动子的活性,对NACA的表达具有下调作用。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白5A 调节作用多肽复合物启动子转录活性 NACA HCV

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酵母双杂交技术筛选乙型肝炎病毒DNA聚合酶TP结合蛋白的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第1期19卷 84-86页

作者：陈国凤王琳成军张玲霞李力张健邵清纪冬解放军第三○二医院感染四科北京100039 传染病研究所基因治疗研究中心传染病研究所专家组

目的　筛选与乙型肝炎病毒 (HBV)DNA聚合酶-N末端蛋白 (TP)相互结合的肝细胞蛋白 ,进一步探讨TP的生物学功能。方法　用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增TP片段 ,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒 ,转化酵母细胞AH 10 9并在其内表达 ... 详细信息

目的　筛选与乙型肝炎病毒 (HBV)DNA聚合酶-N末端蛋白 (TP)相互结合的肝细胞蛋白 ,进一步探讨TP的生物学功能。方法　用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增TP片段 ,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒 ,转化酵母细胞AH 10 9并在其内表达 ,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合 ,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖苷酶 (X-α-gel)上进行双重筛选阳性菌落 ,DNA序列测定并进行生物信息学分析。结果　成功获得了 4 7个与TP特异性结合的阳性克隆 ,包括人类固醇调节元件结合蛋白 1(SREBP1)、RNA聚合酶Ⅱ亚单位 (hsRPB7)、血浆铜蓝蛋白(CP)等 2 1种已知功能蛋白质基因和 19个假设蛋白基因。结论　HBVDNA聚合酶-TP可以与某些已知和未知功能蛋白相互结合。

关键词： TP 乙型肝炎病毒DNA 结合蛋白酵母双杂交技术筛选质粒血浆铜蓝蛋白 DNA聚合酶阳性克隆 RNA聚合酶Ⅱ

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抑制性消减杂交技术克隆和筛选丙型肝炎病毒F蛋白的反式调节基因

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中华肝脏病杂志 2005年第9期13卷 660-663页

作者：郭江成军纪冬赵龙凤高学松刘妍吴顺华北京地坛医院传染病研究所 100011 解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心山西医科大学第一附属医院

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白反式激活相关基因差异表达的差异cDNA,克隆HCV F蛋白反式激活相关基因。方法以HCV F表达质粒pcDNA3.1(-)-F转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1 (-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并合成cDNA,经... 详细信息

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白反式激活相关基因差异表达的差异cDNA,克隆HCV F蛋白反式激活相关基因。方法以HCV F表达质粒pcDNA3.1(-)-F转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1 (-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并合成cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆聚合酶链反应后进行测序及同源性分析。结果成功构建人HCV F蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到56个200-1000 bp插入片段的克隆,随机挑选其中28个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得19种编码基因,其中2个为未知功能的新基因。结论筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因。

关键词：肝炎病毒,丙型反式激活(遗传学) F蛋白抑制性消减杂交技术克隆聚合酶链反应丙型肝炎病毒反式调节基因筛选 pcDNA3 HepG2细胞

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酵母双杂交技术筛选乙型肝炎e抗原反式激活蛋白结合蛋白的基因

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中华肝脏病杂志 2005年第4期13卷 245-248页

作者：王建军成军刘敏杨倩蔺淑梅刘妍解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039 北京地坛医院传染病研究所

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎e抗原反式激活蛋白(HBeAgTP)相互作用蛋白的基因。方法应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆HBeAg反式激活的新型靶基因HBeAgTP。用聚合酶链反应(PCR)法扩增HBeAgTP基因,连接... 详细信息

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎e抗原反式激活蛋白(HBeAgTP)相互作用蛋白的基因。方法应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆HBeAg反式激活的新型靶基因HBeAgTP。用聚合酶链反应(PCR)法扩增HBeAgTP基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,PCR从中扩增出目的片段并测序,进行生物信息学分析。结果成功克隆出HBeAgTP基因并在酵母细胞中表达,应用酵母双杂交筛选出阳性菌落24个,经生物信息学分析为15种已知基因。结论成功克隆出HBeAgTP的结合蛋白,包括一些与细胞内蛋白质的转录、翻译、免疫调节及物质和能量代谢相关的基因。

关键词：酵母双杂交技术筛选乙型肝炎e抗原反式激活蛋白结合蛋白基因

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A肝细胞结合蛋白基因的筛选与克隆

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中华肝脏病杂志 2005年第10期13卷 738-740页

作者：刘妍白桂芹成军吴顺华王琳严福明张玲霞崔玉芳解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039 北京地坛医院传染病研究所

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4A(NS4A) 相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3,将聚合酶链反应法扩增的HCV NS4A基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细... 详细信息

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4A(NS4A) 相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3,将聚合酶链反应法扩增的HCV NS4A基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖上进行双重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠杆菌,接种在氨苄青霉素-LB平板上,选择生长菌落,提取质粒酶切鉴定,测序并在GenBank中进行生物信息学分析。结果成功克隆出HCV NS4A基因, 构建表达载体并在酵母细胞中表达,与肝文库配合后选出既能在四缺培养基又能在铺有X-α-半乳糖的四缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落22个,序列分析显示,筛选到的肝细胞蛋白编码基因参与细胞能量代谢、蛋白翻译合成等多种生物学过程。结论成功克隆出HCV NS4A蛋白在肝细胞内的结合蛋白, 为进一步研究NS4A蛋白的功能、阐明HCV致病的分子生物学机制提供了新线索。

关键词：肝炎病毒,丙型病毒非结构蛋白基因表达肝细胞结合蛋白酵母双杂交丙型肝炎病毒(HCV) 非结构蛋白NS4A 结合蛋白基因人肝细胞克隆

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