检索结果-内蒙古大学图书馆

目的克隆人肝再生增强因子（ａｕｇｎｅｎｔｅｒｏｆｌｉｖｅｒｒｅｇｒｎｅｒａｔｉｏｎ，ＡＬＲ）的基因组ＤＮＡ，并进行序列分析。方法采用人肝再生增强因子ｃＤＮＡ及其编码序列，对基因的核苷酸序列数据库（ＧｅｎＢａｎｋ）以Ｂｌａｓｔ为工具进行核苷酸同源性比较分析，寻找相应的ＡＬＲ基因组ＤＮＡ序列。结果从ＧｅｎＢａｎｋ核苷酸序列数据库中寻找到人ＡＬＲ基因组ＤＮＡ全序列，由１８１３个核苦酸组成。人ＡＬＲ基因组ＤＮＡ序列由３段外显子（ｅｘｏｎ）组成，分别为１８ｎｔ、１９７ｎｔ和１６３ｎｔ。基因的编码产物由１２５个氨基酸残基组成，与小鼠ＡＬＲ基因组ＤＮＡ结构类似。基因组ＤＮＡ定位于染色体的１６ｐ１３．３位点上。结论获得人ＡＬＲ基因组ＤＮＡ全序列克隆。

关键词：克隆肝再生增强因子肝再生 DNA

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丙型肝炎病毒NS_3蛋白人源基因工程单链抗体的表达

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中华肝脏病杂志 2000年第3期8卷 171-173页

作者：钟彦伟成军刘妍董菁杨继珍张玲霞解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的在大肠杆菌ＸＬ_１－Ｂｌｕｅ中表达可溶性的抗ＨＣＶ非结构蛋白ＮＳ_３的人源单链可变区抗体（ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎｖａｒｉａｂｌｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔａｎｔｉｂｏｄｙ，ＳＣＦＶ）。方法以重组的ＨＣＶＮＳ_３为抗原... 详细信息

目的在大肠杆菌ＸＬ_１－Ｂｌｕｅ中表达可溶性的抗ＨＣＶ非结构蛋白ＮＳ_３的人源单链可变区抗体（ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎｖａｒｉａｂｌｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔａｎｔｉｂｏｄｙ，ＳＣＦＶ）。方法以重组的ＨＣＶＮＳ_３为抗原，利用噬菌体抗体库技术筛选含有抗－ＨＣＶＮＳ_３ＳＣＦｖ基因的噬菌体克隆。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒，经ＳｆｉＩ／ＮｏｔＩ酶切鉴定后，亚克隆到ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ载体；转化大肠杆菌ＸＬ_１－Ｂｌｕｅ，提取质粒进行ＤＮＡ序列测定；异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｔｈｉｏ－β－Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ，ＩＰＴＧ）诱导表达ＨＣＶＮＳ_３可溶性单链可变区抗体。ＥＬＩＳＡ和斑点吸印杂交检测其与不同来源的抗原的结合活性。结果筛选到的ＨＣＶＮＳ_３的单链抗体基因，经限制性内切酶酶切和序列分析表明，该抗体基因由７５０ｂｐ组成，ＥＬＩＳＡ和斑点吸印杂交结果表明，在大肠杆菌ＸＬＩ-Ｂｉｌｌ６中表达的ＨＣＶＮＳ_３的单链抗体，可与不同来源的ＮＳ_３抗原结合。结论大肠杆菌ＸＬ_Ｉ－Ｂｌｕｅ表达的ＮＳ_３－ＳＣＦＶ具有结合不同来源的ＨＣＶＮＳ３的活性和特异性。

关键词：丙型肝炎病毒单链可变区抗体 NS3蛋白

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墨西哥利什曼原虫无鞭毛体蛋白的基因克隆化与序列分析

引用

中国人兽共患病杂志 2000年第2期16卷 39-41页

作者：成军钟彦伟刘妍董菁杨继珍陈菊梅解放军三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的克隆墨西哥利什曼原虫（***）WR972株的无鞭毛体蛋白（amastin）的编码基因，并对其同源核苷酸序列进行分析。方法根据已克隆的亚马逊利什曼原虫无鞭毛体蛋白的编码基因序列，设计并合成无鞭毛体蛋白基因特异性引物，以墨西哥利什... 详细信息

目的克隆墨西哥利什曼原虫（***）WR972株的无鞭毛体蛋白（amastin）的编码基因，并对其同源核苷酸序列进行分析。方法根据已克隆的亚马逊利什曼原虫无鞭毛体蛋白的编码基因序列，设计并合成无鞭毛体蛋白基因特异性引物，以墨西哥利什曼原虫WR972株的基因组DNA作为模板，进行多聚酶链反应（PCR）扩增。将扩增的DNA片段克隆到pCR2．1T载体中，进行测序，并对同源的核苷酸序列分析、比较。结果从体外培养的墨西哥利什曼原虫WR972株提取基因组DNA，以无鞭毛体蛋白基因特异性引物进行PCR扩增获得550bp的DNA片段。克隆到pCE2．1T载体片段进行的序列测定结果表明，获得了墨西哥利什曼原虫的无鞭毛体蛋白编码基因片段，与亚马逊利什曼原虫的无鞭毛体蛋白基因之间具有高度的同源性。结论实现了墨西哥利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因的克隆化，为进一步研究其表达及作为疫苗研究的候选基因奠定了基础。

关键词：利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因克隆化

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肝脏疾病的导向治疗

引用

中华肝脏病杂志 2000年第6期8卷 374-375页

作者：成军解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心

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小鼠白细胞介素-18的cDNA克隆及在真核细胞中初步表达的研究

引用

中国免疫学杂志 2000年第5期16卷 252-254页

作者：成军柯亨宁刘妍斯崇文王勤环洪卫国钟彦伟解放军三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039 北京医科大学第一医院感染疾病科北京100034

克隆小鼠白细胞介素 18(IL 18)编码区的cDNA ,并实现在真核细胞中的表达。方法 :用小鼠白细胞介素 18(mIL 18)的cDNA核苷酸序列 ,设计、合成基因序列特异性引物 ,应用逆转录多聚酶链反应RT PCR ,以植物血凝 (PHA)和细菌脂多糖 (LPS)刺... 详细信息

克隆小鼠白细胞介素 18(IL 18)编码区的cDNA ,并实现在真核细胞中的表达。方法 :用小鼠白细胞介素 18(mIL 18)的cDNA核苷酸序列 ,设计、合成基因序列特异性引物 ,应用逆转录多聚酶链反应RT PCR ,以植物血凝 (PHA)和细菌脂多糖 (LPS)刺激的小鼠非粘附性脾细胞的mRNA为模板 ,扩增获得全长mIL 18,转染小鼠成纤维细胞系SVT2 ,并进行IL 18生物学活性的检测。结果 :经测序证实获得的小鼠IL 18的cDNA序列与文献报道的mIL 18的cDNA序列完全一致。构建的小鼠IL 18的重组表达载体在转染小鼠成纤维细胞SVT2后 ,获得具有生物学活性mIL 18的分泌表达。结论 :克隆了小鼠IL 18的cDNA ,并实现了在真核细胞中的表达。

关键词：白细胞介素18 cDNA 基因克隆化基因表达 RFPCR

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