检索结果-内蒙古大学图书馆

中华传染病杂志 2002年第4期20卷 218-221页

作者：刘妍成军张跃新段惠娟牟劲松韩萍李克李莉张玲霞陈菊梅解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的　应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒 (HBV)截短型中蛋白 (MHBst)反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,克隆HBV截短型中蛋白反式激活相关基因。方法　以HBV截短型中蛋白表达质粒 pcDNA3.1( ) Mt16 7转染HepG2细胞 ,以空载体... 详细信息

目的　应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒 (HBV)截短型中蛋白 (MHBst)反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,克隆HBV截短型中蛋白反式激活相关基因。方法　以HBV截短型中蛋白表达质粒 pcDNA3.1( ) Mt16 7转染HepG2细胞 ,以空载体 pcDNA3.1( )为对照 ;制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,经RsaI酶切后 ,将实验组cDNA分成两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应 (PCR) ,将产物与T/A载体连接 ,构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果　成功构建人HBV截短型中蛋白反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到 94个白色克隆 ,进行菌落PCR分析 ,均得到 2 0 0～ 80 0bp插入片段。挑取 5 0个插入片段测序 ,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列 ,结果共获得 2 3种编码基因 ,包括 19种已知基因和 4种未知基因。结论　筛选到的cDNA全长序列 ,包括一些与细胞生长调节、免疫应答及肿瘤发生密切相关的蛋白编码基因。

关键词：蛋白反式激活乙型肝炎表面抗原基因克隆

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第一次全国传染病与寄生虫病学中青年学术会议纪要

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中华传染病杂志 2002年第6期20卷 383-384页

作者：成军解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A抗原模拟表位的筛选和鉴定

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免疫学杂志 2002年第5期18卷 347-349,352页

作者：钟彦伟成军陈新华王刚洪源王琳李莉张玲霞陈菊梅解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的　筛选丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)非结构蛋白NS4A(HCVNS4A)特异性噬菌体模拟表位 ,为抗HCV的疫苗研究探索新途径。方法　以抗 HCVNS4A的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工合成的噬菌体随机 1 2肽库进行 5轮“吸附洗脱... 详细信息

目的　筛选丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)非结构蛋白NS4A(HCVNS4A)特异性噬菌体模拟表位 ,为抗HCV的疫苗研究探索新途径。方法　以抗 HCVNS4A的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工合成的噬菌体随机 1 2肽库进行 5轮“吸附洗脱扩增”的筛选过程 ,随机挑取 45个克隆 ,经噬菌体酶联免疫吸附法 (ELISA)鉴定并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验 ,最后对所选克隆进行DNA序列分析 ,以确定HCVNS4A抗原的模拟表位。结果　经噬菌体富集后 ,从随机筛选的 45个克隆中得到 1 3个阳性克隆 ,确定氨基酸序列XXRXXMXPXXXI为HCVNS4A的模拟表位。结论　用噬菌体 1 2肽库成功筛选得到HCVNS4A的模拟表位。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A 抗原模拟表位筛选鉴定

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乙肝病毒核心蛋白人源单链抗体在大肠杆菌中的表达

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免疫学杂志 2002年第2期18卷 85-88页

作者：钟彦伟成军王刚陈新华李克李莉陈菊梅解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的获得可溶性的抗乙型肝炎病毒（HBV）核心蛋白（core ）的人源单链可变区抗体（ScFv），为得到纯度高、活力强的HBc-ScFv和进一步的抗HBV 治疗奠定基础。方法采用噬菌体表面展示技术，以重组的HBV核心蛋白为包被抗原，从噬菌体单... 详细信息

目的获得可溶性的抗乙型肝炎病毒（HBV）核心蛋白（core ）的人源单链可变区抗体（ScFv），为得到纯度高、活力强的HBc-ScFv和进一步的抗HBV 治疗奠定基础。方法采用噬菌体表面展示技术，以重组的HBV核心蛋白为包被抗原，从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮“吸附-洗脱-扩增”筛选过程，获得抗原结合活性较强的乙型肝炎核心蛋白人源单链可变区抗体ScFv 片段克隆，并对其进行DNA序列及免疫活性测定。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒转化大肠杆菌HB2151，IPTG诱导表达乙型肝炎核心蛋白可溶性人源单链可变区抗体，ELISA和western blot检测其抗原结合特异性。结果克隆了乙型肝炎核心蛋白的单链可变区抗体基因；经DNA酶切和序列分析表明，该抗体基因由771个碱基组成；ELISA 和western blot结果表明：在大肠杆菌HB2 151中经IPTG诱导表达的可溶性乙型肝炎核心蛋白的单链可变区抗体，具有结合乙型肝炎核心蛋白的特异性和免疫活性。结论克隆、鉴定并在大肠杆菌HB2151中表达了可溶性的HBc-ScFv。

关键词：乙型肝炎核心蛋白单链可变区抗体可溶性表达大肠杆菌

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慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒DNA序列异质性及准种特点的研究

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中华医学杂志 2002年第2期82卷 81-85页

作者：董菁成军王勤环皇甫竞坤施双双张国庆洪源李莉斯崇文解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039 北京大学第一医院感染疾病科

目的　以乙型肝炎病毒 (HBV)基因异质性来探讨HBV准种群在慢性感染者中的存在状态。方法　应用聚合酶链反应 (PCR)法 ,自 18例慢性患者血清中分别扩增前C/C基因、P基因逆转录酶区 (RT)、HBV全S区、X基因和全基因组序列 ,克隆入pGEMTeas... 详细信息

目的　以乙型肝炎病毒 (HBV)基因异质性来探讨HBV准种群在慢性感染者中的存在状态。方法　应用聚合酶链反应 (PCR)法 ,自 18例慢性患者血清中分别扩增前C/C基因、P基因逆转录酶区 (RT)、HBV全S区、X基因和全基因组序列 ,克隆入pGEMTeasy质粒 ,挑选 81克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度。结果　除外大段缺失突变的克隆 ,来源于同一患者前C/C区、RT区、全S区、X区和全基因组不同克隆之间的碱基序列同源性分别为 98 0 %～ 99 1%、98 7%～ 99 3%、97 5 %～ 10 0 %、93 0 %～ 98 2 %和 96 6 %～ 97 5 %。前C区A83点突变、C抗原内部缺失较为常见 ,缺失突变、终止替换突变、短序列的插入或缺失突变造成的移框突变在各个区域中均可检出 ,X基因 (核心蛋白启动子区 ,CP)内部缺失突变不仅导致X蛋白羧基端的多样性 ,而且调控HBeAg的表达。编码截短型表面抗原中蛋白和缺陷病毒基因亦在患者外周血中。结论　多区域测序结果提示HBV慢性患者体内HBV呈现准种群共存 ,X区 (CP区 )内存在热点缺失突变区 ,CP区的变异可能影响前C蛋白的表达 ,这些变异可能与患者不良预后有关。

关键词：患者缺失突变体内准种 HBV CP 乙型肝炎病毒DNA 变异种群全基因组序列

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人源抗丙型肝炎病毒包膜蛋白E2单链抗体的研究

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中华肝脏病杂志 2002年第2期10卷 109-112页

作者：钟彦伟成军施双双王刚夏小兵田小军李莉张玲霞陈菊梅中国人民解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的研制抗丙型肝炎病毒包膜蛋白Ｅ２（ＨＣＶＥ２）的人源噬菌体单链抗体，并探讨其临床价值。方法以重组的ＨＣＶＥ２为固相抗原，利用亲和筛选的原理，从噬菌体抗体库中经过５轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试... 详细信息

目的研制抗丙型肝炎病毒包膜蛋白Ｅ２（ＨＣＶＥ２）的人源噬菌体单链抗体，并探讨其临床价值。方法以重组的ＨＣＶＥ２为固相抗原，利用亲和筛选的原理，从噬菌体抗体库中经过５轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和ＤＮＡ序列分析，获得ＨＣＶ　Ｅ２的人源单链抗体；用该抗体对１０例石蜡包埋的丙型肝炎患者肝组织进行免疫组织化学鉴定。结果ＥＬＩＳＡ结果表明，制备的ＨＣＶＥ２人源单链抗体（吸光度值Ａ４５０为１．８８）能与ＨＣＶＥ２抗原特异性结台；免疫组织化学结果表明，该抗体能够特异性识别丙型肝炎患者肝组织ＨＣＶＥ２抗原，与正常肝组织及乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）抗原均无交叉反应。结论此法制备的单链抗体亲和性好，特异性强，且制备方法简便，周期短，为ＨＣＶＥ２病原的检测提供了新的有效的试剂。

关键词：人源抗丙型肝炎病毒包膜蛋白E2 单链抗体研究免疫组织化学

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HCV核心蛋白与截短型HBV表面抗原中蛋白的协同反式激活功能

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中华肝脏病杂志 2002年第5期10卷 354-357页

作者：刘妍成军王刚李克段惠娟王琳李莉张玲霞陈菊梅中国人民解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的探讨HCV核心蛋白与截短型HBV表面抗原中蛋白的协同反式激活作用。方法构建表达HCV核心蛋白的重组质粒 pcDNA3.1（-）-core和表达截短型 HBV表面抗原中蛋白的重组质粒pcDNA3.1（-）-Mt;转染HepG2细胞,从转录和翻译水平鉴定病毒基... 详细信息

目的探讨HCV核心蛋白与截短型HBV表面抗原中蛋白的协同反式激活作用。方法构建表达HCV核心蛋白的重组质粒 pcDNA3.1（-）-core和表达截短型 HBV表面抗原中蛋白的重组质粒pcDNA3.1（-）-Mt;转染HepG2细胞,从转录和翻译水平鉴定病毒基因的瞬时表达;与报告质粒pSV—lacZ共转染HepG2细胞,检测β-半乳糖苷酶（β-gal）表达活性,酶的活性反映了表达的肝炎病毒蛋白对SV40病毒早期启动子（增强子）功能的影响。结果构建成HCV核心蛋白及截短型HBV 表面抗原中蛋白的重组表达载体pcDNA3.1（-）-core、pcDNA3.1（-）-Mt;在HepG2细胞均能瞬时表达相应的病毒蛋白;单独的共转染实验中pcDNA3.1（-）-core、pcDNA3.1（-）-Mt组的β-gal的表达分别是对照的4.6和3.2倍,两种质粒共同转染时酶的表达是对照组的8.4倍;表达质粒对β-gal表达的激活作用呈剂量依赖性。结论HepG2细胞中表达的HCV核心蛋白和截短型HBV表面抗原中蛋白均具有反式激活SV40早期启动子（增强子）的功能,并且两种蛋白的反式激活功能具有协同特性。本实验有助于解释HCV、HBV感染,尤其是共同感染的致病（癌）机制。

关键词： HCV HBV 表面抗原核心蛋白反式激活丙型肝炎病毒乙型肝炎病毒致病机理病毒性肝炎

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肝再生增强因子的作用机制

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临床肝胆病杂志 2002年第3期18卷 146-148页

作者：成军李莉张玲霞陈菊梅解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心感染四科

人和动物血清中存在着促进肝再生的蛋白质因子,早期的研究中统称为肝刺激物质(HSS)[1,2].研究表明,肝再生增强因子(ALR)是HSS的主要成分[1].有关HSS主要功能性成分及其作用机制的研究,不仅有助于了解肝脏再生的生物学机制,而且有助于新... 详细信息

人和动物血清中存在着促进肝再生的蛋白质因子,早期的研究中统称为肝刺激物质(HSS)[1,2].研究表明,肝再生增强因子(ALR)是HSS的主要成分[1].有关HSS主要功能性成分及其作用机制的研究,不仅有助于了解肝脏再生的生物学机制,而且有助于新型治疗方法的探索.

关键词：肝脏再生肝再生增强因子作用机制 ALR 生物学功能线粒体干扰素γ

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抗HBsAg单链抗体靶向干扰素的构建及原核表达

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中华肝脏病杂志 2002年第1期10卷 28-30页

作者：夏小兵成军杨继珍钟彦伟王刚方宏清刘妍李克董菁中国人民解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039 中国人民解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039 军事医学科学院生物工程研究所

目的构建抗ＨＢｓＡｇ人源单链抗体与人干扰素α的融合分子－抗ＨＢｓＡｇ单链抗体靶向干扰素，并在大肠杆菌中表达出活性融合蛋白。方法利用限制性内切酶分别从含有抗ＨＢｓＡｇ人源单链抗体与人干扰素α的质粒中切出目的基因，连接... 详细信息

目的构建抗ＨＢｓＡｇ人源单链抗体与人干扰素α的融合分子－抗ＨＢｓＡｇ单链抗体靶向干扰素，并在大肠杆菌中表达出活性融合蛋白。方法利用限制性内切酶分别从含有抗ＨＢｓＡｇ人源单链抗体与人干扰素α的质粒中切出目的基因，连接到ｐＥＴ２２ｂ质粒中，构建成单链抗体靶向干扰素表达载体。利用ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳、竞争性抑制实验与抗病毒实验对表达产物进行分析鉴定。结果构建出含有抗体靶向干扰素融合基因的表达质粒，诱导１２ｈ后，在ＳＤＳ—ＰＡＧＥ上可以观察到相对分子质量约４５×１０４的目的蛋白，竞争性抑制实验与抗病毒实验表明表达的融合蛋白保留了单链抗体的ＨＢｓＡｇ特异结合活性与干扰素的抗病毒活性。结论抗ＨＢｓＡｇ单链靶抗体靶向干扰素融合分子的构建及在大肠杆菌中的表达是成功的。

关键词：融合蛋白靶向干扰素α 单链抗体构建抗HBsAg单链抗体原核肿瘤基因治疗

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应用噬菌体随机肽库技术筛选丙肝病毒NS3抗原模拟表位

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中国病毒学 2002年第3期17卷 202-205页

作者：钟彦伟成军陈新华王刚洪源王琳李莉张玲霞陈菊梅解放军第三〇二医院传染病研究所基因治疗研究中心感染四科北京100039

以抗 HCVNS3的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工合成的噬菌体随机 12肽库进行 5轮“吸附洗脱扩增”的筛选过程 ,随机挑取 4 2个克隆 ,经噬菌体酶联免疫吸附法 (ELISA)鉴定并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验 ,最后对所... 详细信息

以抗 HCVNS3的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工合成的噬菌体随机 12肽库进行 5轮“吸附洗脱扩增”的筛选过程 ,随机挑取 4 2个克隆 ,经噬菌体酶联免疫吸附法 (ELISA)鉴定并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验 ,最后对所选克隆进行DNA序列分析 ,以确定HCVNS3抗原的模拟表位。经噬菌体富集后 ,从随机筛选的 4 2个克隆中得到 11个阳性克隆 ,确定氨基酸序列XXIXXXXMSNXX为HCVNS3的模拟表位。我们用噬菌体12肽库成功筛选得到HCVNS3的模拟表位。

关键词：噬菌体随机肽库筛选丙肝病毒 NS3抗原模拟表位

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