检索结果-内蒙古大学图书馆

中华检验医学杂志 2001年第2期24卷 118-120页

作者：洪源成军杨守纯北京解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心 100039

　　分子灯塔(Molecular beacons)是近年兴起的利用核酸杂交技术对核酸分子进行检测的新技术，由纽约市公共健康研究协会的Tyagi等［1］于1996年首先建立。因其在与核酸分子互补结合之后荧光素便能开始发光，故称为“分子灯塔”。它的... 详细信息

　　分子灯塔(Molecular beacons)是近年兴起的利用核酸杂交技术对核酸分子进行检测的新技术，由纽约市公共健康研究协会的Tyagi等［1］于1996年首先建立。因其在与核酸分子互补结合之后荧光素便能开始发光，故称为“分子灯塔”。它的建立为研究核酸分子的组成、含量及对PCR过程中进行实时监测提供了快速、特异、方便的新方法，在基因检测领域有着广阔的应用前景。现试就其构成、原理、热力学特性、优缺点及在基因检测中的应用作一简要综述。　　一、分子灯塔的构成、原理及热力学特性　　分子灯塔是具有“发夹”样结构的单链寡核苷酸探针，一般为含20～30个核苷酸的2部分组成：环状部分及茎部。环状部分为单链核酸，与目标链形成特异的互补结合，茎部的2条核苷酸链互补，形成双链分子，大多含有5对碱基。茎部的末端分别与荧光素(5′端)和淬火物质(3′端)结合，淬火物质大多为4-4′二甲氮基苯偶氮苯甲酸，荧光素和淬火物质因研究目的不同可自行设计。茎部的双链互补结构使末端的荧光素和淬火物质紧靠在一起，因荧光素共振能量转移［2］作用而使荧光被吸收，这样荧光素就不能发光。当分子灯塔的环状部分与目标链特异性结合时，所形成的杂交分子比茎部双链结构更稳定，它的刚性使茎部双链分子分离，也就使荧光素和淬火物质相分离，通过自发构型重组作用，在室温下就可使荧光素发光得以恢复，通过荧光仪或合适配置的显微镜可观察到。在分子灯塔与目标链结合的过程中，因环境温度的不同，存在着3种不同的状态：在低温时与目标链结合，即为结合态，当温度升高至42℃时，分子灯塔与目标链的复合物变性，成为“发夹”样结构，导致荧光强度的下降。当温度升高至54℃时，出现茎部结构的变性，分子灯塔成为松散的随机卷曲状态，荧光强度上升。相比之下，如果分子灯塔与目标链有一个核苷酸不能互补，则解链温度要相应地下降约14℃［3］。

关键词：分子灯塔技术基因检测构成原理热力学特性

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丙型肝炎病毒包膜蛋白E2可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达

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中国病毒学 2001年第3期16卷 220-223页

作者：成军施双双钟彦伟夏小兵王刚王琳刘妍陈菊梅解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)包膜蛋白E2的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM10 9中表达可溶性的HCV E2 ScFv。以重组的HCVE2蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含有H... 详细信息

利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)包膜蛋白E2的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM10 9中表达可溶性的HCV E2 ScFv。以重组的HCVE2蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含有HCV E2 ScFv基因的噬菌体克隆 ,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒 ,经Ncol/NotI酶切鉴定后 ,该ScFv基因由 75 0bp组成 ,将其亚克隆到pCANTAB5E载体中 ,转化大肠杆菌JM10 9,提取质粒进行DNA序列测定 ,符合ScFv的基因结构特点。IPTG诱导转化的大肠杆菌JM10 9,在其培养上清中获得了可溶性HCVE2单链可变区抗体的表达。酶联免疫吸附法 (ELISA)证实表达的HCV E2 ScFv具有与重组HCVE2蛋白的反应活性和特异性 ,对转化的JM10 9大肠杆菌上清中表述的HCV E2 ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) ,证实表达的HCV E2 ScFv的分子量为 2 8kD。为应用HCV E2 ScFv进行肝组织免疫组织化学和细胞内免疫基因治疗研究奠定了基础。

关键词：丙型肝炎病毒包膜蛋白单链可变区抗体表达大肠杆菌

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抗HBsAg人源单链可变区抗体的筛选与可溶性抗体的表达

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中国病毒学 2001年第2期16卷 105-108页

作者：钟彦伟成军施双双夏小兵李克董菁刘妍杨继珍解放军三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

采用噬菌体表面展示技术 ,以从乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)阳性血清超速离心纯化的HBsAg为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区半合成抗体库中经过 5轮“吸附洗脱扩增”筛选过程 ,获得特异性较强的HBsAg人源单链可变区抗体 (ScFv... 详细信息

采用噬菌体表面展示技术 ,以从乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)阳性血清超速离心纯化的HBsAg为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区半合成抗体库中经过 5轮“吸附洗脱扩增”筛选过程 ,获得特异性较强的HBsAg人源单链可变区抗体 (ScFv)克隆并提取质粒 ,经SfiⅠ /NotⅠ酶切鉴定后 ,亚克隆到 pCANTAB5E表达载体中 ,转化大肠杆菌XL1 Blue。经IPTG诱导后 ,表达的可溶性HBsAg特异性ScFv以 5 0 %硫酸胺沉淀 ,经SDS PAGE电泳表明 ,XL1 Blue中表达的HBsAg可溶性ScFv的分子量约 2 8kD。免疫活性检测结果表明 ,该单链抗体具有较强的抗原结合活性和特异性。HBsAg人源单链抗体的筛选和表达成功 ,为今后HBsAg人源抗体的研究和应用奠定了基础。

关键词： HBsAg 噬菌体单链抗体筛选表达 HBV

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外周血中乙型肝炎病毒截短型囊膜蛋白基因的克隆化与序列分析

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中华肝脏病杂志 2001年第3期9卷 163-165页

作者：董菁成军王勤环王刚施双双刘妍夏小兵斯崇文解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039 北京大学第一医院感染疾病科

目的研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）在慢性感染者体内存在的特殊状态。方法采用特异性引物设计，以多聚酶链反应（ＰＣＲ）自患者血清中扩增全Ｓ基因片段，测序以明确变异的部位，并与既往已发表的ＨＢＶａｄｒ亚型进行序列比较。结果经... 详细信息

目的研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）在慢性感染者体内存在的特殊状态。方法采用特异性引物设计，以多聚酶链反应（ＰＣＲ）自患者血清中扩增全Ｓ基因片段，测序以明确变异的部位，并与既往已发表的ＨＢＶａｄｒ亚型进行序列比较。结果经测序发现慢性ＨＢＶ感染者体内存有变异病毒株编码的截短型表面抗原中蛋白基因，并存有ＨＢｓＡｓ和多聚酶区缺陷型病毒基因。结论在外周血中存在ＨＢＶ截短型囊膜蛋白编码基因，可能与患者不良预后有关。

关键词：乙型肝炎病毒截短型囊膜蛋白聚合酶链反应突变准种克隆序列分析

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大鼠肝再生增强因子假基因的克隆化与序列分析

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中华肝脏病杂志 2001年第2期9卷 105-107页

作者：董菁成军刘友昭王勤环王刚施双双斯崇文解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039 北京大学第一医院感染疾病科

目的　研究大鼠肝再生增强因子（ａｕｇｍｅｎｔｅｒｏｆ　ｌｉｖｅｒｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ＡＬＲ）在大鼠基因组中的存在方式。方法　以大鼠基因组ＤＮＡ为模板，根据ＡＬＲｃＤＮＡ序列设计引物，用多聚酶链反应（ＰＣＲ）... 详细信息

目的　研究大鼠肝再生增强因子（ａｕｇｍｅｎｔｅｒｏｆ　ｌｉｖｅｒｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ＡＬＲ）在大鼠基因组中的存在方式。方法　以大鼠基因组ＤＮＡ为模板，根据ＡＬＲｃＤＮＡ序列设计引物，用多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物，连入ｐＧＥＭＴｅａｓｙＶｅｃｔｏｒ后测序。结果ＰＣＲ法扩增出两条产物，其一经测序发现为ＡＬＲ的假基因，预测氨基酸序列与ＡＬＲ的同源性为８８．８％。结论　作为肝细胞再生过程中重要的生长刺激因子，大鼠ＡＬＲ存在假基因，提示可能存在ＡＬＲ多基因家族。为研究ＡＬＲ分子的进化规律提供了依据。

关键词：肝再生多聚酶链反应假基因克隆序列分析

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乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原中蛋白与白细胞介素18联合核酸免疫HBV表面抗原转基因小鼠的实验研究

乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原中蛋白与白细胞介素18联合核酸免疫HBV...

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中华医学会第七次全国感染病学术会议

目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原中蛋白真核表达载体并免疫小鼠,并观察同时接种白细胞介素18(IL-18)质粒对基因免疫的辅助作用.方法:构建并验证质粒pVR1012-M和pcDNA3.1-IL-18,肌注C57HBsAg转基因小鼠;3组小鼠分别注射100μg pVR101... 详细信息

目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原中蛋白真核表达载体并免疫小鼠,并观察同时接种白细胞介素18(IL-18)质粒对基因免疫的辅助作用.方法:构建并验证质粒pVR1012-M和pcDNA3.1-IL-18,肌注C57HBsAg转基因小鼠;3组小鼠分别注射100μg pVR1012(4只),pVR1012-M(7只),pVR1012-M和pcDNA3.1-IL-18质粒(7只),每2周1次,共3次.每次免疫2周后眼眶采血,检测血清抗-HBs、HBsAg和丙氨酸氨基转移酶(ALT),并对肝脏进行病理学检查.结果:免疫后未检测出

关键词： HBV 乙型肝炎病毒核酸免疫白细胞介素

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乙型肝炎病毒C基因启动子区异质性检测的初步研究

乙型肝炎病毒C基因启动子区异质性检测的初步研究

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中华医学会第七次全国感染病学术会议

目的:以乙型肝炎病毒(HBV)C基因启动子(CP)变异来探讨HBV准种在慢性感染者中的存在意义.方法:以中国株HBV基因序列为依据,设计特异性多聚酶链反应(PCR)引物,自9例慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBV CP序列,克隆入pGEM Teasy质粒,随机... 详细信息

目的:以乙型肝炎病毒(HBV)C基因启动子(CP)变异来探讨HBV准种在慢性感染者中的存在意义.方法:以中国株HBV基因序列为依据,设计特异性多聚酶链反应(PCR)引物,自9例慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBV CP序列,克隆入pGEM Teasy质粒,随机挑选37克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度.结果:测序结果发现HBV CP序列是变异的高发区,在直接重复序列(DR)I上

关键词：乙型肝炎病毒 HBV 初步研究基因启动子异质性

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乙型肝炎病毒逆转录酶区基因序列准种与变异特点研究

乙型肝炎病毒逆转录酶区基因序列准种与变异特点研究

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中华医学会第七次全国感染病学术会议

以乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶(P)逆转录酶(RT)区及表面抗原主蛋白(HBsAg)序列异质性来探讨对HBV准种群状态.多聚酶链反应(PCR)方法自3例慢性HBV患者血清中扩增靶基因,克隆入T载体,随机挑选13株克隆测序发现:2株克隆出现大段缺失,另11株序... 详细信息

以乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶(P)逆转录酶(RT)区及表面抗原主蛋白(HBsAg)序列异质性来探讨对HBV准种群状态.多聚酶链反应(PCR)方法自3例慢性HBV患者血清中扩增靶基因,克隆入T载体,随机挑选13株克隆测序发现:2株克隆出现大段缺失,另11株序列之间总差异率为5.1%,RT和HBsAg氨基酸序列差异率分别为4.9%和7.5%,并发现缺失突变、终止突变等多种突变类型.结果提示HBV慢性患者体内有HBV准种群,并存在缺陷型HBV病毒.

关键词：乙型肝炎病毒变异特点 HBV 基因序列

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乙型肝炎病毒前C/C基因准种与变异特点的研究

乙型肝炎病毒前C/C基因准种与变异特点的研究

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中华医学会第七次全国感染病学术会议

目的:以乙型肝炎病毒(HBV)前C/C基因异质性来探讨在慢性感染者体内是否存在HBV准种.方法:以中国株HBV基因序列为依据,设计特异性多聚酶链反应(PCR)引物,自4例慢性HBV感染患者血清中扩增HBV前C/C基因序列,克隆人PGEM Teasy载体,每例患者... 详细信息

目的:以乙型肝炎病毒(HBV)前C/C基因异质性来探讨在慢性感染者体内是否存在HBV准种.方法:以中国株HBV基因序列为依据,设计特异性多聚酶链反应(PCR)引物,自4例慢性HBV感染患者血清中扩增HBV前C/C基因序列,克隆人PGEM Teasy载体,每例患者挑选5个克隆测序以比较病毒的变异程度.结果:测序结果发现同一患者前C/C基因碱基序列之间的同源性大于98%,但存有G83→A替换、C抗原内部缺失、移框突变等多种变异类型.结论:结果提示HBV长期携带者体内有HBV准种共存,推测前C/C区的多种变异可能与感染慢性化有关.

关键词：乙型肝炎病毒变异特点 HBV C/C

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慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒准种特点的初步研究

慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒准种特点的初步研究

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中华医学会第七次全国感染病学术会议

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)在慢性患者中的存在状态.方法:以己知中国株HBV基因序列为依据,设计特异性多聚酶链反应(PCR)引物,自3例HBV慢性患者体内扩增HBV全S基因片段,克隆入pGEM Teasy质粒,用限制片段长度多态性(RFLP)法确定HBV的变... 详细信息

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)在慢性患者中的存在状态.方法:以己知中国株HBV基因序列为依据,设计特异性多聚酶链反应(PCR)引物,自3例HBV慢性患者体内扩增HBV全S基因片段,克隆入pGEM Teasy质粒,用限制片段长度多态性(RFLP)法确定HBV的变异现象,DNA测序确定病毒的变异程度.结果:分别自3例患者血清中克隆出的29、28和8个阳性克隆,EooRⅠ酶切患者1和2的

关键词：慢性乙型肝炎患者 HBV 乙型肝炎病毒准种初步研究

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