检索结果-内蒙古大学图书馆

解放军医学杂志 2009年第6期34卷 679-682页

作者：苏何玲纪冬韩萍刘妍张健陈国凤钟彦伟徐东平解放军第302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 解放军第302医院全军传染病研究所感染7科北京100039

目的探讨乙型肝炎病毒前S2蛋白(pre-S2)对胰岛素受体(INSR)基因的转录调节作用。方法以pGEM-Teasy-65-2质粒为模板,扩增乙型肝炎病毒(HBV)pre-S2基因片段,构建真核表达载体pcDNA3.1-preS2,以不同剂量(1.0、1.5、2.0μg)转染肝癌细胞系He... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒前S2蛋白(pre-S2)对胰岛素受体(INSR)基因的转录调节作用。方法以pGEM-Teasy-65-2质粒为模板,扩增乙型肝炎病毒(HBV)pre-S2基因片段,构建真核表达载体pcDNA3.1-preS2,以不同剂量(1.0、1.5、2.0μg)转染肝癌细胞系HepG2和Huh7,36h及72h后分别提取转染后细胞总RNA,利用实时荧光定量PCR检测细胞内的INSR mRNA水平,观察HBV的pre-S2蛋白对INSR基因的转录调节作用,同时观察阻断pre-S2蛋白后INSR的表达情况。结果转染不同剂量pcDNA3.1-preS2后,HepG2细胞内INSR基因的表达水平分别为对照的61%、20%、11%(转染后36h)和92%、69%、37%(转染后72h),Huh7细胞内INSR基因的表达水平分别为对照的63%、47%、35%(转染后36h)和83%、73%、34%(转染后72h);细胞INSR mRNA水平随真核表达载体pcDNA3.1-preS2转染剂量的增加而降低。在转染2μgpcDNA3.1-preS2的同时,将抗pre-S2单克隆抗体加入培养上清,可部分阻断pre-S2蛋白对INSRmRNA表达的抑制,HepG2细胞中的INSRmRNA水平分别恢复到转染空质粒对照的65%(转染后36h)和81%(转染后72h),Huh7细胞中的INSRmRNA水平则分别恢复到69%(转染后36h)和96%(转染后72h)。结论HBVpre-S2蛋白对肝癌细胞系HepG2和Huh7细胞的INSR基因有明显下调作用,抗pre-S2抗体能部分阻断这种下调作用,此机制可以在分子水平部分解释肝源性糖尿病的发生。

关键词：肝炎病毒,乙型前S2蛋白受体,胰岛素基因调节

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建立一种PCR产物直接测序检测HBV YMDD突变的方法

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中华检验医学杂志 2009年第7期32卷 777-780页

作者：许彪李晓东刘志国毛远丽胡瑾华王业东徐东平解放军第二○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 解放军第二○二医院肝衰竭治疗研究中心北京100039 解放军第二○二医院检验中心北京100039 解放军第二○二医院传染病研究所医院办公室北京100039

目的建立检测HBV YMDD变异的PCR产物直接测序法，并与传统实时荧光PCR检测YMDD突变的结果进行比较分析。方法选取103份慢性乙型肝炎患者血清标本，提取血清HBV DNA。用实时荧光PCR检测YMDD突变；用巢式PCR扩增HBV逆转录酶基因，对PCR产... 详细信息

目的建立检测HBV YMDD变异的PCR产物直接测序法，并与传统实时荧光PCR检测YMDD突变的结果进行比较分析。方法选取103份慢性乙型肝炎患者血清标本，提取血清HBV DNA。用实时荧光PCR检测YMDD突变；用巢式PCR扩增HBV逆转录酶基因，对PCR产物进行DNA双向测序，NTI软件比对结果。采用Kappa一致性检验对DNA测序法检测的rt204位点突变与实时荧光PCR检测的YMDD突变结果进行比较。结果PCR产物直接测序法可有效检测低病毒载量标本（500拷贝／m1）和高病毒载量（10^10拷贝／ml）标本，同时可以避免高病毒载量标本的抑制效应。与实时荧光PCR相比较，YIDD突变检测符合率为100％，YVDD突变检测符合率97．1％，YIDD与YVDD共生突变符合率76．2％（Kappa=0．853，P〈0．01）。结论本研究建立的PCR产物直接测序法检测HBV耐药相关基因突变，灵敏度高，检测范围宽，与实时荧光PCR检测结果有较高的符合率，并可同时检出YMDD、YIDD和YVDD。

关键词：肝炎病毒乙型序列分析 DNA 聚合酶链反应突变

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234例慢性乙型肝炎患者HBV前C/BCP区突变分析

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实用肝脏病杂志 2009年第1期12卷 14-16,40页

作者：白丽王琳李乐孟玉华万芃瑾刘晓红陈雪源张玲霞徐东平解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京市100039

目的调查慢性乙型肝炎患者血清HBV前C/基本核心启动子(BCP)区的突变情况,分析各种突变对HBeAg表达的影响。方法抽提患者血清DNA,采用改进的巢式PCR技术,扩增HBV前C/BCP区基因,对PCR产物进行DNA测序。用NTI软件比对结果,根据文献报道,选... 详细信息

目的调查慢性乙型肝炎患者血清HBV前C/基本核心启动子(BCP)区的突变情况,分析各种突变对HBeAg表达的影响。方法抽提患者血清DNA,采用改进的巢式PCR技术,扩增HBV前C/BCP区基因,对PCR产物进行DNA测序。用NTI软件比对结果,根据文献报道,选取1753、1762、1764、1862、1896和1899共6个位点进行突变分析,并重点分析不同突变对患者血清HBeAg阳性率和病情的影响。结果在234例中6个位点均无突变者为74例(31.6%),其血清HBeAg阳性率为74.3%(55/74)。在234例中6个位点检出至少1种突变的病例为160例(68.4%),突变形式包括4种单一位点突变和21种组合形式的突变;检出G1896A突变73例(31.2%),其中36例检出有共存未突变序列,37例仅检出突变序列,后者血清HBeAg的阳性率为18.9%(7/37)。检出G1896A以外其他形式突变的有87例,HBeAg阳性率为63.2%(55/87);其中以A1762T+G1764A最为常见,HBeAg阳性率为69.4%(34/49)。在1753、1862位点上检出4种特殊碱基突变,前C区有基因片段插入或缺失的有2例。结论多数慢性乙型肝炎患者在HBV前C/BCP区可检出突变,突变形式多样,其中G1896A突变样本血清HBeAg阳性率显著下降,而其他突变对其影响较小。应用DNA序列测定法分析HBV前C/BCP区基因突变,获得的信息全面,对临床评估病情进展和实施抗病毒治疗有参考价值。

关键词：乙型肝炎 HBV前C/BCP区突变 HBeAg 基因测序

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乙型肝炎病毒耐药的检测与判断

乙型肝炎病毒耐药的检测与判断

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慢性乙型肝炎抗病毒治疗难点和热点学术会议

作者：徐东平 100039 解放军第三○二医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室

核苷(酸)类药物是实施慢性乙型肝炎抗病毒治疗的主要药物，目前在我国上市的有拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦和替比夫定四种，除阿德福韦酯为核苷酸类药物外，其他三种为核苷类药物。本文介绍了HBV的变异特点，探讨了HBV耐药相关基因... 详细信息

核苷(酸)类药物是实施慢性乙型肝炎抗病毒治疗的主要药物，目前在我国上市的有拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦和替比夫定四种，除阿德福韦酯为核苷酸类药物外，其他三种为核苷类药物。本文介绍了HBV的变异特点，探讨了HBV耐药相关基因突变的检测方法，阐述了对HBV耐药相关基因突变检测结果的分析。

关键词：乙型肝炎抗病毒治疗基因突变核苷酸病毒耐药

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340例慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒多位点耐药相关突变分析

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中华肝脏病杂志 2008年第10期16卷 735-738页

作者：徐东平刘妍成军李晓东戴久增李乐梁兆玲白丽钟彦伟许智慧任晓强张玲霞解放军第三0二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院

目的分析慢性乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因与核苷（酸）类似物耐药相关的12个位点上的突变情况及其临床意义。方法提取血清HBVDNA，扩增HBV逆转录酶基因，对PCR产物进行DNA双向测序，对测序成功的样本进行基因型分析。检测逆转录酶基因1... 详细信息

目的分析慢性乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因与核苷（酸）类似物耐药相关的12个位点上的突变情况及其临床意义。方法提取血清HBVDNA，扩增HBV逆转录酶基因，对PCR产物进行DNA双向测序，对测序成功的样本进行基因型分析。检测逆转录酶基因12个位点上的碱基突变情况，分析不同核苷（酸）．类似物使用情况、患者的耐药相关突变情况及不同核苷（酸）类似物耐药的突变形式。结果检出拉米夫定耐药突变63例，阿德福韦耐药突变10例，恩替卡韦耐药突变8例，替比夫定耐药突变l例。拉米夫定耐药突变中以M204V和M204I最常见，前者通常伴随L180M突变，后者常单独出现；阿德福韦耐药中以N236T±A181位碱基替换为主；恩替卡韦耐药突变发生在拉米夫定耐药基础上，以T184位碱基替换为主；替比夫定的耐药突变为M204I。少数未接受过核苷（酸）类似物治疗的患者也可检出耐药相关突变。结论检测HBV逆转录酶基因多位点耐药相关突变，有助于临床及时发现和确认乙型肝炎患者是否存在HBV耐药，合理进行抗病毒治疗。

关键词：肝炎病毒乙型突变耐药

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1例急性乙型肝炎患者HBV特异性CD8 T细胞的快速诱导扩增

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解放军医学杂志 2008年第12期33卷 1457-1460页

作者：王琳范振平李乐叶海燕高蓉张玲霞徐东平解放军第302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039

目的鉴定急性乙型肝炎患者HBV特异性CD8 T淋巴细胞识别的优势表位并建立对其进行快速诱导扩增的方法,为研究HBV抗原特异性CD8 T细胞的功能奠定基础。方法从1例HLA-A2阳性的急性乙型肝炎患者外周血分离外周血单个核细胞（PBMC）,使用针对... 详细信息

目的鉴定急性乙型肝炎患者HBV特异性CD8 T淋巴细胞识别的优势表位并建立对其进行快速诱导扩增的方法,为研究HBV抗原特异性CD8 T细胞的功能奠定基础。方法从1例HLA-A2阳性的急性乙型肝炎患者外周血分离外周血单个核细胞（PBMC）,使用针对HLA-A2限制性HBsAg表位（S181-181、S335-343）和HBcAg表位（C18-27）的3种HLA-A2/抗原肽荧光标记五聚体试剂（Pentamers）检测HBV特异性CD8 T细胞频率,筛选可能的优势表位。用细胞因子和相应的抗原多肽对PBMC进行1-2周刺激培养,用Pentamers检测特异CD8 T细胞,动态分析特异性CD8 T细胞的增高并用流式细胞仪对其进行分选。结果经过抗原多肽刺激并在合适条件下培养后,HBV特异性T细胞频率显著增高,培养2周时达到高峰,S183-191特异性T细胞从0.21%增高到15.17%,升高了73.8倍；S335-343特异性T细胞占总CD8 T细胞的高分比从0.44%增高到1.79%,升高了3.1倍；但C18-27特异性T细胞的频率很低且刺激培养后无明显升高。结论通过HBV多肽诱导在适当条件下可使抗原特异性CD8 T细胞在短期内获得明显诱导扩增,S-183-191特异性T细胞在控制急性HBV感染中可能具有重要作用。

关键词：肝炎乙型抗原表位 T淋巴细胞细胞增殖

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miR-181a在转染乙型肝炎病毒基因组的HepG2.2.15细胞中的表达研究

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解放军医学杂志 2008年第8期33卷 992-994页

作者：刘妍王春梅李绵洋王琳程勇前张玲霞徐东平解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 解放军总医院临床检验科

目的鉴定分析microRNA(miRNA)miR-181a在转染了乙型肝炎病毒(HBV)基因组的HepG2.2.15细胞中的表达情况,探讨miR-181a在与HBV相关的肝脏疾病中的作用。方法以本课题组基因芯片结果为基础,设计并合成miR-181a探针,采用Northernblotting检... 详细信息

目的鉴定分析microRNA(miRNA)miR-181a在转染了乙型肝炎病毒(HBV)基因组的HepG2.2.15细胞中的表达情况,探讨miR-181a在与HBV相关的肝脏疾病中的作用。方法以本课题组基因芯片结果为基础,设计并合成miR-181a探针,采用Northernblotting检测miR-181a在HepG2.2.15和HepG2细胞(对照组)中的表达水平,应用生物信息学方法结合mRNA表达谱芯片结果预测miR-181a的靶基因,选取靶基因HLA-A2,应用流式细胞仪分析HLA-A2分子在上述2种细胞中的表达。结果Northernblotting结果显示,与对照组相比,miR-181a在HepG2.2.15细胞中的表达量显著增高;miR-181a可能的靶基因包括C8A、IDH1和HLA-A等,miR-181a可能通过其种子序列与其靶基因HLA-A的3′-UTR区部分互补结合来调节HLA-A的表达;流式分析也显示HLA-A2分子在HepG2.2.15细胞中的表达量(43.9%)显著低于HepG2细胞(96.6%)。结论miR-181a在HBV转染的HepG2.2.15细胞中高表达,并可能下调靶基因HLA-A的表达,推测这可能是HBV感染后病毒逃避免疫反应、持续复制的机制之一。

关键词： miR-181a 乙型肝炎病毒 HLA抗原

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抗炎保肝治疗在肝病临床中的应用与地位

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中华肝脏病杂志 2008年第9期16卷 714-716页

作者：张玲霞高志良扈晓宇范振平曲建慧罗生强解放军第三0二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 中山大学附属第三医院感染科成都中医药大学附属医院

肝脏炎症坏死及其所致的肝纤维化是疾病进展的主要病理学基础，因此，如能找出病因，在对因治疗的基础上有效控制肝组织炎症，有可能减少肝细胞破坏和延缓肝纤维化的发展。如慢性乙型肝炎在免疫清除期，应用干扰索仅及核苷类似物就能有... 详细信息

肝脏炎症坏死及其所致的肝纤维化是疾病进展的主要病理学基础，因此，如能找出病因，在对因治疗的基础上有效控制肝组织炎症，有可能减少肝细胞破坏和延缓肝纤维化的发展。如慢性乙型肝炎在免疫清除期，应用干扰索仅及核苷类似物就能有效抑制病毒，从病原学控制的角度阻止病毒性肝炎肝组织炎症的发生。而抗炎保肝治疗只是其综合治疗的一部分，须在病原学或特异性治疗的基础上适当选用抗炎保肝药物。

关键词：肝病药物疗法抗炎保肝

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新基因NS4ATP1的生物信息学分析及在原核细胞中表达

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胃肠病学和肝病学杂志 2008年第7期17卷 591-593页

作者：白文林刘妍楼敏徐东平解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 解放军第302医院感染8科北京100039

目的对丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4A(NS4A)反式激活靶基因1(NS4ATP1)进行生物信息学分析,并进行原核表达。方法应用生物信息学方法对NS4ATP1基因编码产物进行分析。设计并合成序列特异性引物,聚合酶链反应(PCR)扩增NS4ATP1基因,产物... 详细信息

目的对丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4A(NS4A)反式激活靶基因1(NS4ATP1)进行生物信息学分析,并进行原核表达。方法应用生物信息学方法对NS4ATP1基因编码产物进行分析。设计并合成序列特异性引物,聚合酶链反应(PCR)扩增NS4ATP1基因,产物克隆入原核表达载体pET32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),以0.1 mol/L IPTG诱导,SDS-PAGE和West-ern Blot方法检测NS4ATP1在原核细胞中的表达。结果NS4ATP1定位于染色体3q12.2,其氨基酸含有3个N端糖基化位点、8个蛋白激酶C磷酸化位点、9个酪蛋白激酶II磷酸化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点和4个N端酰基化位点。利用pET32a(+)原核表达载体和相应的BL21(DE3)菌株,在体外成功表达了57.0 kDa的NS4ATP1与His标签的融合蛋白。结论生物信息学技术可以全面分析新基因NS4ATP1的染色体定位及潜在的功能位点。新基因NS4ATP1在大肠杆菌中成功表达,为进一步研究其生物学功能提供平台。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白4A 反式激活生物信息学原核表达

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干扰素-α治疗慢性乙型肝炎疗效预测因素的研究进展

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解放军药学学报 2008年第6期24卷 525-528页

作者：李梵陈国凤徐东平解放军第302医院感染七科北京100039 解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039

干扰素-α作为首选抗乙肝病毒的药物之一,具有疗效持续久的优点,但有效率仍然较低,价格昂贵、副作用多,因此如何在抗病毒前预测干扰素-α抗病毒疗效至关重要。本文从宿主的转氨酶水平、免疫状态、肝脏病理状态、遗传背景、一般情况以及... 详细信息

干扰素-α作为首选抗乙肝病毒的药物之一,具有疗效持续久的优点,但有效率仍然较低,价格昂贵、副作用多,因此如何在抗病毒前预测干扰素-α抗病毒疗效至关重要。本文从宿主的转氨酶水平、免疫状态、肝脏病理状态、遗传背景、一般情况以及病毒的定量、基因分型以及病毒变异等预测因素上进行简要综述,为临床医师选择抗病毒药物提供参考。

关键词：干扰素慢性乙型肝炎疗效

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