检索结果-内蒙古大学图书馆

寄生虫与医学昆虫学报 2025年第1期32卷 1-9,15页

作者：张明明郝瑜琬程喻力黄京京贾智惠诸欣平首都医科大学基础医学院病原生物学系寄生虫学教研室北京100069 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心WHO热带病合作中心科技部国家级热带病国际联合研究中心国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

目的本研究旨在探索旋毛虫Ts87蛋白是否可以通过对小鼠NETs DNA骨架的降解作用实施宿主免疫逃避。方法首先,利用生物信息学软件分析Ts87蛋白的理化性质,通过序列同源性比对确认其属于核酸酶家族。随后,通过分子克隆及蛋白纯化技术,获得... 详细信息

目的本研究旨在探索旋毛虫Ts87蛋白是否可以通过对小鼠NETs DNA骨架的降解作用实施宿主免疫逃避。方法首先,利用生物信息学软件分析Ts87蛋白的理化性质,通过序列同源性比对确认其属于核酸酶家族。随后,通过分子克隆及蛋白纯化技术,获得高纯度的Ts87蛋白,并证实其具有核酸酶活性。将Ts87与已知酶活性位点的人溶酶体DNaseⅡα以及结构已解析的泰国伯克霍尔德氏菌DNaseⅡ的一级序列进行比对,预测出其可能的活性位点,并通过定点突变技术获得Ts87酶活突变体,酶活性实验证实其功能。在体外检测小鼠骨髓中性粒细胞胞外核酸量及免疫荧光染色小鼠NETs,来证实Ts87蛋白酶活突变体降解NETs能力是否有所下降。最后,Ts87免疫小鼠后,通过免疫荧光染色小鼠肠道NETs的MPO与CitH3表达量,观察小鼠体内NETs的降解情况及虫荷。结果成功获得高纯度Ts87蛋白,并证实其具有核酸酶活性,在体外可以降解小鼠NETs,且Ts87突变体降解NETs的能力下降。体内实验结果表明,免疫小鼠产生抗Ts87抗体后,体内NETs降解减少,利于NETs对虫体攻击,使小鼠体内虫荷降低。结论旋毛虫能利用Ts87核酸酶逃避NETs的捕获,该研究为旋毛虫病的防治提供潜在的疫苗与药物靶点。

关键词：旋毛虫核酸酶Ts87 中性粒细胞胞外捕获网免疫逃避

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不同佐剂对旋毛虫Ts87重组蛋白免疫小鼠保护性的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第2期25卷 101-105页

作者：李强杨静杨雅平顾园刘智英黄松诸欣平首都医科大学基础医学院寄生虫学教研室北京100069

目的比较福氏完全佐剂(CFA)等6种佐剂对于旋毛虫Ts87重组蛋白(rTs87)免疫保护性的影响。方法经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定的rTs87分别与上述各种佐剂免疫ICR小鼠,每间隔2周免... 详细信息

目的比较福氏完全佐剂(CFA)等6种佐剂对于旋毛虫Ts87重组蛋白(rTs87)免疫保护性的影响。方法经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定的rTs87分别与上述各种佐剂免疫ICR小鼠,每间隔2周免疫1次,共免疫3次。ELISA检测免疫小鼠血中抗原特异性IgG抗体水平。攻击感染45 d后剖杀小鼠取肌幼虫(ML)并计数,计算肌幼虫减虫率。结果rTs87相对分子质量(Mr)约为40 000,可被旋毛虫感染鼠血清和rTs87免疫鼠血清识别,分别与佐剂CFA(或IFA)、IMS 1312、ISA720、Quil-A及氢氧化铝免疫后均引起较强的IgG抗体反应,各佐剂免疫组减虫率分别为49.4％、49．2％、63．5％、65．1％和70．8％,与空白对照组比较有统计学意义;单纯抗原rTs87免疫组获得了23．7％的减虫率,与对照组及各佐剂免疫组差异均有统计学意义(P<0．05)。结论佐剂CFA(或IFA)、IMS1312、ISA720、Quil-A及氢氧化铝均能不同程度增强rTs87对小鼠的保护性免疫力,其中佐剂ISA720、Quil-A和氢氧化铝的保护效果更好。

关键词：旋毛虫旋毛虫Ts87重组蛋白(rTs87) 佐剂保护性

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旋毛虫抗原基因Ts88原核表达及重组蛋白鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2004年第5期22卷 257-261页

作者：雷丽萍诸欣平杨静杨雅平丁利首都医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室北京100054

目的　原核表达旋毛虫抗原基因Ts88,并对重组蛋白的抗原性进行鉴定。　方法　免疫筛选cDNA文库得到旋毛虫抗原新基因Ts88,克隆入原核表达载体pET 2 8c(+ ) ,异丙基 β D 硫代半乳糖苷诱导表达。重组蛋白免疫小鼠制备免疫血清 ,ELISA检... 详细信息

目的　原核表达旋毛虫抗原基因Ts88,并对重组蛋白的抗原性进行鉴定。　方法　免疫筛选cDNA文库得到旋毛虫抗原新基因Ts88,克隆入原核表达载体pET 2 8c(+ ) ,异丙基 β D 硫代半乳糖苷诱导表达。重组蛋白免疫小鼠制备免疫血清 ,ELISA检测抗体滴度。蛋白质印迹法检测重组蛋白的抗原性。免疫荧光试验确定Ts88蛋白在虫体的分布。　结果　经原核表达的Ts88重组蛋白 ,用其免疫小鼠可得到高滴度的抗体血清。蛋白质印迹法结果表明该重组蛋白能与旋毛虫病患者血清、旋毛虫病猪血清、人工感染及人工免疫兔血清反应 ,不与其他蠕虫病患者血清发生交叉反应 ,并能识别旋毛虫虫体天然抗原成分。免疫荧光试验显示Ts88蛋白主要分布于虫体体壁。　结论　成功制备Ts88基因的重组蛋白。

关键词：重组蛋白旋毛虫血清抗原性抗原基因蛋白质印迹法原核表达虫体免疫荧光试验病猪

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旋毛虫Ts87抗原基因在毕赤酵母中的构建及表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第4期23卷 236-239页

作者：王少华诸欣平顾园杨雅平杨静首都医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室北京100054

目的构建旋毛虫Ts87抗原基因并在毕赤酵母中分泌表达。方法通过PCR特异性扩增Ts87抗原基因,构建重组质粒PPICZαA-Ts87。其线性化后,转化毕赤酵母GS115,抗生素Zeocin筛选高抗性转化子,PCR筛选阳性重组菌株。表型鉴定后进行甲醇诱导表达... 详细信息

目的构建旋毛虫Ts87抗原基因并在毕赤酵母中分泌表达。方法通过PCR特异性扩增Ts87抗原基因,构建重组质粒PPICZαA-Ts87。其线性化后,转化毕赤酵母GS115,抗生素Zeocin筛选高抗性转化子,PCR筛选阳性重组菌株。表型鉴定后进行甲醇诱导表达,收集培养不同天数的上清液。斑点杂交法分析上清液以确定有无重组蛋白分泌表达。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)分析鉴定表达蛋白。结果与结论成功构建了PPICZαA-Ts87毕赤酵母表达重组质粒,确定了Ts87抗原基因在毕赤酵母中获得分泌表达。

关键词：旋毛虫蠕虫基因毕赤酵母菌基因表达

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TNF-α和ICAM-1在脑型疟发病中的作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2000年第3期18卷 138-140页

作者：车里穆牛宇欣李慧珠陈小宁首都医科大学寄生虫学教研室北京100054 承德医学院寄生虫学教研室承德067000

[目的 ]研究粘附分子 TNF- α、ICAM- 1与脑型疟 (cerebral malaria,CM)的关系 ,并通过体内注射外源性 TNF- α来观察 ICAM- 1的表达情况及其对 CM发生的影响。 [方法 ]通过建立 CM小鼠模型 ,酶联免疫吸附实验 (EL ISA)检测感染小鼠血清... 详细信息

[目的 ]研究粘附分子 TNF- α、ICAM- 1与脑型疟 (cerebral malaria,CM)的关系 ,并通过体内注射外源性 TNF- α来观察 ICAM- 1的表达情况及其对 CM发生的影响。 [方法 ]通过建立 CM小鼠模型 ,酶联免疫吸附实验 (EL ISA)检测感染小鼠血清 TNF-α浓度。免疫组织化学 SP法检测感染小鼠脑微血管的 ICAM- 1表达 ,结果用真彩色图象分析仪半定量分析。 [结果 ]发生 CM小鼠的血清 TNF- α明显高于其它小鼠 ,只有发生 CM的小鼠脑微血管有 ICAM- 1表达 ,体内注射 r TNF-α能促进 CM的发生 ,并显著增加脑微血管的 ICAM- 1的表达。 [结论 ]大量的 TNF- α在 CM的发病中可能有直接致病作用 ,但主要可能通过调节脑微血管的 ICAM-

关键词：脑型疟疾 TNF-α ICAM-1 伯氏疟原虫发病机制

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旋毛虫Ts87抗原的免疫学特性及保护性的初步研究

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动物学杂志 2003年第3期38卷 52-55页

作者：杨静诸欣平杨雅平雷丽萍首都医科大学基础医学院寄生虫学教研室北京100054

应用Westernblot和ELISA方法对纯化的重组蛋白PET 2 8a( + ) Ts87进行免疫学特性鉴定及保护性研究。Westernblot和ELISA结果显示 ,Ts87抗原可被人工感染旋毛虫的兔血清、病猪血清、病人血清及抗Ts87的兔血清所识别。Ts87抗原免疫BABL ... 详细信息

应用Westernblot和ELISA方法对纯化的重组蛋白PET 2 8a( + ) Ts87进行免疫学特性鉴定及保护性研究。Westernblot和ELISA结果显示 ,Ts87抗原可被人工感染旋毛虫的兔血清、病猪血清、病人血清及抗Ts87的兔血清所识别。Ts87抗原免疫BABL c小鼠 ,较对照组减虫率为 2 9% ,说明Ts87抗原可作为旋毛虫免疫诊断和疫苗的候选抗原。

关键词：旋毛形线虫 Ts87抗原诊断保护性免疫 ELISA

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阿苯达唑对小鼠旋毛虫囊包幼虫作用后的组织化学观察

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1999年第3期17卷 152-154页

作者：陈小宁陈佩惠季凤清王佚星王峰王凤云河北承德医学院寄生虫学教研室承德067000 首都医科大学寄生虫学研室北京100054

目的：探讨阿苯达唑对小鼠旋毛虫囊包幼虫的作用机制。方法：应用形态学、组织学及组织化学方法观察阿苯达唑治疗后囊包幼虫的形态学、组织学及酶的活性变化。结果：阿苯达唑治疗组，囊包幼虫的结构明显破坏，虫体缩小与断裂，部分虫体... 详细信息

目的：探讨阿苯达唑对小鼠旋毛虫囊包幼虫的作用机制。方法：应用形态学、组织学及组织化学方法观察阿苯达唑治疗后囊包幼虫的形态学、组织学及酶的活性变化。结果：阿苯达唑治疗组，囊包幼虫的结构明显破坏，虫体缩小与断裂，部分虫体被吸收，囊包内伴有炎细胞浸润。组织化学染色显示，治疗组虫体糖原减少，ＲＮＡ、ＳＤＨ、ＡＴＰａｓｅ、ＡＣＰ活性均低于对照组，而ＬＤＨ活性高于对照组。结论：阿苯达唑对旋毛虫的生理功能有影响。

关键词：阿苯达唑旋毛虫组织化学形态学囊包幼虫

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不同培养条件对旋毛虫肌幼虫产生排泄分泌抗原的影响

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首都医科大学学报 2010年第5期31卷 591-595页

作者：崔世娟杨静顾园魏骏飞王少华杨雅平诸欣平首都医科大学基础医学院寄生虫学教研室

目的对比在常规1640培养基中和在模拟宿主生理环境的培养液的刺激下旋毛虫肌幼虫排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原产量及成分的变化,同时观察在感染初期ES抗原的不同组分在小鼠体内诱导产生主要抗体的时间,以寻找获得更高产量的肌... 详细信息

目的对比在常规1640培养基中和在模拟宿主生理环境的培养液的刺激下旋毛虫肌幼虫排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原产量及成分的变化,同时观察在感染初期ES抗原的不同组分在小鼠体内诱导产生主要抗体的时间,以寻找获得更高产量的肌幼虫ES抗原的制备方法。方法在虫数、培养液体积、培养时间、温度、ES抗原体积浓缩倍数等条件相同的情况下,按培养液中小鼠血清超滤液(简称血超)、还原型谷胱甘肽(简称谷胱甘肽)和胆汁粉的不同组合分组,分别培养肌幼虫并收集ES抗原,再以相同上样体积作SDS-PAGE电泳,Odyssey双色红外激光成像系统扫描凝胶并测定条带信号强度进行定量比较。用Western blotting对比观察不同组ES抗原的活性及成分变化。以旋毛虫人工感染小鼠不同时期收集的血清(感染后15、18、20、21、22、24、27、30、40、50 d)作为一抗进行Western blotting,观察ES抗原主要成分在小鼠体内产生抗体的先后顺序。结果S DS-PAGE电泳凝胶定量分析结果显示,血超+谷胱甘肽组、胆汁组和胆汁+血超组的抗原产量明显高于1640培养基组,其中胆汁+血超组的抗原产量最高。Western blotting结果显示,各组抗原均能被感染血清(感染后40 d)识别产生多个条带,其中血超+谷胱甘肽组的条带中相对分子质量约为87 000的条带荧光信号明显强于其他组;感染初期ES抗原不同组分在小鼠体内产生抗体的先后顺序为:45 000、53 000、41 000,其抗体可被检测到的最早时间分别为感染后15、21、24 d。结论培养液中添加胆汁粉可大大提高旋毛虫肌幼虫ES抗原产量,胆汁粉与血超共用后ES抗原的增产效果更佳;感染初期肌幼虫ES抗原的不同组分诱导小鼠产生抗体的时间不同。此研究将为改进ES抗原制备方法,寻找旋毛虫病早期诊断抗原提供实验依据。

关键词：旋毛虫排泄分泌抗原制备方法 Western blotting

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旋毛虫感染不同时期对小鼠胶原诱导性关节炎影响的差异性观察？

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寄生虫与医学昆虫学报 2016年第1期23卷 1-8页

作者：王笑欢程喻力袁慧慧黄京京诸欣平首都医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室北京100069

观察旋毛虫感染的不同阶段对小鼠胶原诱导性关节炎（ Collagen？Ⅱ induced arthritis， CIA）的影响并初步探讨其机制。建立雄性DBA／1小鼠胶原（CⅡ）诱导性关节炎（CIA）模型，以旋毛虫肌幼虫（400条／只）分别于造模前14 d、造模当... 详细信息

观察旋毛虫感染的不同阶段对小鼠胶原诱导性关节炎（ Collagen？Ⅱ induced arthritis， CIA）的影响并初步探讨其机制。建立雄性DBA／1小鼠胶原（CⅡ）诱导性关节炎（CIA）模型，以旋毛虫肌幼虫（400条／只）分别于造模前14 d、造模当天感染小鼠。关节评分评价足爪关节病变的发生及严重程度。于胶原首次诱导后第50 d处死小鼠，取足爪关节切片观察组织病理学变化； ELISA检测血清抗CⅡ特异性IgG、IgG1、 IgG2a水平；分离脾淋巴细胞以ConA刺激培养， ELISA检测培养上清中IFN-γ、 IL-4、 IL-10、 IL-17和TNF-α细胞因子水平。结果显示，与单纯CIA造模组相比，预先14 d感染旋毛虫的CIA小鼠关节炎发病率、关节评分及组织学评分均显著降低，血清IgG1水平则显著升高，脾细胞培养上清Th2型细胞因子IL？4和调节性细胞因子IL？10水平显著增加。而造模当天感染旋毛虫的CIA小鼠关节评分和组织学评分显著升高，血清IgG2a水平显著升高，细胞培养上清Th1型细胞因子IFN-γ和促炎细胞因子IL-17、 TNF-α水平显著升高，且差异具有统计学意义。该结果表明，旋毛虫感染早期可加重胶原诱导性小鼠关节炎，而感染后期则对关节炎有一定抑制作用，提示旋毛虫对小鼠胶原诱导性关节炎的影响作用因感染时限的不同而存在差异，且该差异可能与不同感染时期诱导的Th反应类型的变化有关。

关键词：旋毛虫类风湿关节炎 Ⅱ型胶原免疫调节

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旋毛虫Hsp70与乃87融合蛋白的构建表达及鉴定

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寄生虫与医学昆虫学报 2015年第1期22卷 1-6页

作者：孙靓孙青房磊杨静顾园毕阔诸欣平首都医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室北京100069

本文构建并表达了旋毛虫热休克蛋白70（Ts—Hsp70）与排泄分泌抗原Ts87的融合蛋白，并对融合蛋白进行纯化和免疫学鉴定。本研究采用限制性内切酶EcoRI酶切位点将目的基因Ts—Hsp70与Ts87相连接，插入pET28-a（＋）质粒，转人大肠埃希菌B... 详细信息

本文构建并表达了旋毛虫热休克蛋白70（Ts—Hsp70）与排泄分泌抗原Ts87的融合蛋白，并对融合蛋白进行纯化和免疫学鉴定。本研究采用限制性内切酶EcoRI酶切位点将目的基因Ts—Hsp70与Ts87相连接，插入pET28-a（＋）质粒，转人大肠埃希菌BL21（DE3）中诱导表达、纯化，获得的融合蛋白rTs—Hsp70-Ts87用Western blot的方法鉴定。经PCR、酶切鉴定、测序分析，结果显示，目的基因片段大小为2721bp，构建的重组质粒与预期相符。经IPTG诱导表达，通过镍离子柱层析纯化复性后得到可溶的融合蛋白rTs—Hsp70-Ts87，其相对分子质量约为100kDa；Western blot结果显示，该蛋白可被抗His标签单抗、rTs—Hsp70免疫血清、rTs87免疫血清识别。以上结果表明，本研究成功构建并表达了融合蛋白***70-Ts87，为进一步研究rTs—Hsp70-Ts87的免疫保护性，开发新的有效抗旋毛虫病的疫苗奠定基础。

关键词：旋毛虫融合蛋白热休克蛋白70 排泄分泌抗原疫苗

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