检索结果-内蒙古大学图书馆

阴道毛滴虫分子致病机制的研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第3期29卷 215-218,223页

作者：汤自豪许静波梅钧高兴政九江学院基础医学院病原生物学教研室九江332000 北京大学医学部寄生虫学教研室北京100191

阴道毛滴虫是一种常见的寄生原虫,以性传播为主。近年来对阴道毛滴虫致病机制的研究日益受到重视,本文从黏附因子、纤黏连蛋白、层黏连蛋白、G蛋白、成孔蛋白、蛋白酶和细胞骨架等方面综述阴道毛滴虫的分子致病机制。

关键词：阴道毛滴虫分子致病机制

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咖啡酸对氧化应激诱导的PC12细胞5-脂氧酶激活的抑制作用

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中国药理学与毒理学杂志 2011年第1期25卷 45-51页

作者：李成檀张丽慧赵建波方三华张纬萍魏尔清杭州师范大学医学神经生物学市级重点实验室基础医学部药理学教研室浙江杭州310036 浙江大学医学院药理学系浙江杭州310058

目的探讨咖啡酸是否通过抑制氧化应激诱导的5-脂氧酶（5-LOX）激活而减轻细胞损伤。方法稳定转染绿荧光蛋白（GFP）-5-LOX的PC12细胞,预先给予咖啡酸0.001~10μmol.L-1和对照药MK886,30min后观察缺氧缺糖/恢复（OGD/R）及过氧化氢（H2O2... 详细信息

目的探讨咖啡酸是否通过抑制氧化应激诱导的5-脂氧酶（5-LOX）激活而减轻细胞损伤。方法稳定转染绿荧光蛋白（GFP）-5-LOX的PC12细胞,预先给予咖啡酸0.001~10μmol.L-1和对照药MK886,30min后观察缺氧缺糖/恢复（OGD/R）及过氧化氢（H2O2）160μmol.L-1处理后的变化。MTT法和碘化丙啶染色法分析细胞存活率和死亡率;荧光显微镜观察OGD 2 h/R2 h和H2O2处理40 min时5-LOX的核膜移位;ELISA法测定OGD 2 h/R 3 h时5-LOX代谢产物的生成;DCF法检测OGD 2 h/R 0.5 h细胞内活性氧（ROS）的产生。结果 OGD 2 h/R 24 h GFP-5-LOX转染和GFP-转染PC12细胞的存活率分别为（63.1±6.6）%和（70.7±6.9）%;H2O2处理24 h细胞存活率分别为（62.5±7.7）%和（75.7±9.5）%。在GFP-5-LOX转染的PC12细胞中,咖啡酸和对照药MK886可使OGD/R细胞存活率从（63.1±6.6）%分别增加到（87.3±2.0）%和（89.9±6.3）%,细胞坏死率从（31.4±1.5）%降低到（10.1±2.0）%和（11.7±1.3）%（P〈0.01）;使H2O2处理细胞存活率从（62.51±7.65）%增加到（92.59±4.02）%和（75.31±6.60）%;使OGD/R细胞CysLTs的生成从261.1±33.7降低到108.5±16.7和（90.6±19.5）ng.g-1蛋白（P〈0.01）。此外,咖啡酸抑制OGD/R诱导PC12细胞的ROS产生,IC50值为8.021μmol.L-1;抑制OGD/R诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.974μmol.L-1;抑制H2O2诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.501μmol.L-1;MK886无上述作用。结论咖啡酸可抑制氧化应激诱导的PC12细胞5-LOX激活,对缺血损伤的PC12细胞具有保护作用。

关键词：咖啡酸氧化应激 PC12细胞 5-脂氧酶

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核受体相关因子1基因过表达诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经元

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解剖学报 2011年第2期42卷 159-163页

作者：谭雪锋田美玲金国华秦建兵朱蕙霞张蕾李浩明苏州大学医学部基础医学与生物科学学院苏州215123 南通大学医学院人体解剖学教研室神经生物学研究所江苏南通226001

目的探讨核受体相关因子1(Nurr1)基因对大鼠中脑神经干细胞(NSCs)体外诱导分化为多巴胺能神经元的作用。方法通过基因重组技术构建pEGFP-N1-Nurr1真核表达载体,用电穿孔法将重组质粒转染第3代NSCs,用荧光显微镜观察转染效率,免疫印迹法... 详细信息

目的探讨核受体相关因子1(Nurr1)基因对大鼠中脑神经干细胞(NSCs)体外诱导分化为多巴胺能神经元的作用。方法通过基因重组技术构建pEGFP-N1-Nurr1真核表达载体,用电穿孔法将重组质粒转染第3代NSCs,用荧光显微镜观察转染效率,免疫印迹法检测基因表达效果;并对转染后的NSCs进行体外分化培养3周,用免疫荧光双标技术检测酪氨酸羟化酶(TH)和微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达。结果电穿孔法转染NSCs48h后转染效率达35%,1周后免疫印迹法检测到Nurr1蛋白高表达,约为对照组的5倍;Nurr1基因转染的NSCs分化为TH阳性神经元的比率为15.45%,明显高于对照组,而MAP-2阳性神经元数量与对照组相似。结论 Nurr1基因过表达可以诱导NSCs向TH阳性的多巴胺能神经元分化。

关键词：核受体相关因子1 神经干细胞多巴胺能神经元分化细胞培养大鼠

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鱼藤酮诱导BV2小胶质细胞半胱氨酰白三烯受体1表达变化

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浙江大学学报（医学版） 2011年第2期40卷 131-138页

作者：骆江云张壮余舒莹赵冰赵春贞王欣欣方三华张纬萍张丽慧魏尔清卢韵碧浙江大学医学院药理学系浙江杭州310058 杭州师范大学医学神经生物学市级重点实验室基础医学部药理学教研室浙江杭州310036

目的:制备和鉴定半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)抗体,以此观察鱼藤酮诱导BV2小胶质细胞损伤过程中CysLT1受体表达变化。方法:以KLH偶联的CysLT1受体多肽(小鼠)免疫家兔制备多克隆抗体,用ELISA法测定抗体效价,以抗原阻断法测定抗体敏... 详细信息

目的:制备和鉴定半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)抗体,以此观察鱼藤酮诱导BV2小胶质细胞损伤过程中CysLT1受体表达变化。方法:以KLH偶联的CysLT1受体多肽(小鼠)免疫家兔制备多克隆抗体,用ELISA法测定抗体效价,以抗原阻断法测定抗体敏感性及特异性。用新制备的抗体以Western blotting检测鱼藤酮(0.01～1μmol/L,作用24 h)损伤BV2细胞过程中,BV2细胞上CysLT1受体的表达变化,并以RT-PCR检测验证CysLT1受体mRNA表达水平,同时以免疫组化观察CysLT1受体的亚细胞分布变化。结果:ELISA测定显示,制备的兔抗小鼠CysLT1受体抗体的效价大于1/32728,对CysLT1受体的特异性强,对CysLT2受体和GPR17基本无交叉反应。Western blotting和RT-PCR显示,鱼藤酮作用BV2细胞24 h剂量依赖性诱导CysLT1受体mRNA及蛋白水平表达升高;免疫组化显示在鱼藤酮诱导BV2细胞损伤过程中,随鱼藤酮剂量增加,CysLT1受体发生核移位。结论:制备的CysLT1受体多克隆抗体具有高效价和高特异性,能满足Western blotting和免疫组化检测的要求;CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的BV2细胞损伤。

关键词：半胱氨酸受体,白三烯抗体鱼藤酮/药理学半胱氨酰白三烯受体多克隆抗体 BV2小胶质细胞

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5-脂氧酶参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤

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浙江大学学报（医学版） 2011年第2期40卷 150-155,168页

作者：张晓燕张丽慧李成檀陈文健赵建波魏尔清杭州师范大学医学神经生物学市级重点实验室基础医学部药理学教研室浙江杭州310036 浙江大学医学院药理学系浙江杭州310058

目的:以鱼藤酮诱导PC12细胞损伤作为PD细胞模型,观察5-脂氧酶(5-lipoxygenase,5-LOX)是否参与细胞损伤。方法:在鱼藤酮处理后不同时间,以MTT方法检测PC12细胞活性变化,以免疫细胞化学方法观察5-LOX核膜移位情况;并观察5-LOX抑制剂齐留... 详细信息

目的:以鱼藤酮诱导PC12细胞损伤作为PD细胞模型,观察5-脂氧酶(5-lipoxygenase,5-LOX)是否参与细胞损伤。方法:在鱼藤酮处理后不同时间,以MTT方法检测PC12细胞活性变化,以免疫细胞化学方法观察5-LOX核膜移位情况;并观察5-LOX抑制剂齐留通的作用。结果:鱼藤酮(0.3～30μmol/L)可诱导PC12细胞损伤;齐留通(3～100μmol/L)减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤。鱼藤酮还时间和浓度依赖性引起5-LOX核膜移位,齐留通(1～30μmo/L)则能抑制5-LOX核膜移位。结论:5-LOX参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤,5-LOX抑制剂齐留通可抑制5-LOX激活,减轻细胞损伤。

关键词：脂氧合酶 5-脂氧酶帕金森病鱼藤酮/药理学 PC12细胞/药物作用

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无花果叶补骨脂素对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响

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中国药房 2011年第19期22卷 1746-1749页

作者：王涛陶如李清华高永峰周成军刘金成泰山医学院基础医学部生物化学教研室泰安市271000 泰山医学院临床医学部泰安市271000 泰山医学院附属医院泰安市271000 泰山医学院药学院药学综合实验室泰安市271000 山东大学第二医院济南市250033 青岛大学医学院生物学教研室青岛市266021

目的:研究无花果叶补骨脂素(FLP)对瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长抑制作用。方法:用FLP处理体外培养的成纤维细胞后进行细胞形态学检测,通过细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞仪检测FLP对成纤维细胞增殖和凋亡的影响;氯胺T法检测FLP对成纤维细... 详细信息

目的:研究无花果叶补骨脂素(FLP)对瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长抑制作用。方法:用FLP处理体外培养的成纤维细胞后进行细胞形态学检测,通过细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞仪检测FLP对成纤维细胞增殖和凋亡的影响;氯胺T法检测FLP对成纤维细胞胶原蛋白合成的抑制作用;Western-bloting检测凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。结果:经FLP处理后,成纤维细胞增殖活性降低,凋亡指数升高(P<0.01),凋亡相关蛋白Bcl-2表达被抑制,同时胶原蛋白的合成受到抑制。结论:FLP对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制和诱导其凋亡作用可能是通过抑制凋亡相关蛋白Bcl-2的作用来实现的。

关键词：无花果叶补骨脂素瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖凋亡

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HHIP基因启动子区甲基化在食管癌细胞系中的研究

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第三军医大学学报 2011年第5期33卷 477-480页

作者：邱宗林许强张婷王永峰陈香梅叶彬鲁凤民重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 北京大学医学部病原生物学系北京100191 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探索人食管癌细胞系Hedgehog信号通路相关基因的表达状况、HHIP基因启动子区甲基化状态与HHIP表达的关系。方法采用RT-PCR方法检测5个食管癌细胞系Hedgehog信号通路SHH、PTCH1、SMO、HHIP和Gli的表达情况。用基于甲基化敏感酶和甲... 详细信息

目的探索人食管癌细胞系Hedgehog信号通路相关基因的表达状况、HHIP基因启动子区甲基化状态与HHIP表达的关系。方法采用RT-PCR方法检测5个食管癌细胞系Hedgehog信号通路SHH、PTCH1、SMO、HHIP和Gli的表达情况。用基于甲基化敏感酶和甲基化依赖酶酶切、并结合荧光定量PCR方法分析食管癌细胞系HHIP基因启动子区甲基化状态,并检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理前后食管癌细胞系HHIP mRNA表达的变化。结果 SHH、PTCH1、SMO和Gli mRNA在5个食管癌细胞系中都有较高表达。HHIP在Kyse450细胞系的表达较高,约为其余4个细胞系表达量的3～5倍。与之相应,Kyse450细胞HHIP基因CpG岛为非甲基化状态,其余4个细胞系CpG岛都发生了高甲基化。采用5-Aza-CdR去除甲基化后,HHIP基因表达较处理前增加了10～20倍。结论 Hedge-hog信号通路的异常激活可能参与了食管癌的发生、发展过程,食管癌细胞系HHIP基因的表达抑制与其基因启动子区CpG岛高甲基化相关。

关键词： Hedgehog信号 HHIP基因食管癌细胞系

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脐血CD34+造血干/祖细胞在再生丝素膜上向内皮细胞分化的研究

脐血CD34+造血干/祖细胞在再生丝素膜上向内皮细胞分化的研究

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2011 International Conference on Biomedicine and Engineering

作者：陈瑶田丽娜张晓峰盛伟华韩亚丽刘铁连杨吉成缪竞诚苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室

目的:以人脐血CD34造血干/祖细胞为种子细胞,探讨其体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,以及丝素材料对其生长、粘附、分化等情况的影响。方法:采集新鲜脐血,磁珠分选方法（MACS）分离出CD34单个核细胞,分别接种到再生... 详细信息

目的:以人脐血CD34造血干/祖细胞为种子细胞,探讨其体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,以及丝素材料对其生长、粘附、分化等情况的影响。方法:采集新鲜脐血,磁珠分选方法（MACS）分离出CD34单个核细胞,分别接种到再生丝素膜（SF）和明胶包被的培养皿上,用含有内皮细胞生长因子（VEGF）和纤维细胞生长因子（bF GF）的M199培养基诱导分化,并比较不同材料上D34细胞的贴壁率及向内皮细胞分化比率。结果:细胞形态学观察发现,SF组和明胶组CD34细胞培养2周细胞长满瓶底并达到增殖高峰,细胞呈"铺路石"状排列;经诱导培养10d后,SF组和明胶组内皮细胞表型CD31阳性率分别为（75.53±4.89）%和（74.59±3.58）%,培养14d后,两组细胞vW F阳性率均可达80%以上;透射电镜两组细胞胞浆内均可见内皮细胞的Weibel-Palade小体;CD34+细胞在明胶和SF上均可较快贴壁,平均贴壁率为90.8%和85.2%,同时两组内皮细胞的分化比率均能达到60%以上,无明显差异。结论:脐血D34造血干/祖细胞在VEGF等细胞因子的诱导下有可能定向分化为内皮细胞,同时可用SF作为其向内皮细胞分化的支架材料,最终用于具有快速形成毛细血管网能力的组织化器官替代品。

关键词：脐血 CD34+造血干/祖细胞诱导分化内皮细胞丝素

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Ad-VEGF165-Ang-1转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成效应及分子机制研究

Ad-VEGF165-Ang-1转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成效应及...

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2011 International Conference on Biomedicine and Engineering

作者：陈瑶田丽娜张晓峰刘铁连韩亚丽盛伟华杨吉成缪竞诚苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室

目的:构建VEGF165及Ang-1双基因共表达腺病毒载体并研究该转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成活性及其分子机制。方法:首先在科室已构建的IRES和双启动子介导的腺病毒空载体间分别插入Ang-1和VEGF165基因,由此构建出Ad-VEGF165-Pol... 详细信息

目的:构建VEGF165及Ang-1双基因共表达腺病毒载体并研究该转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成活性及其分子机制。方法:首先在科室已构建的IRES和双启动子介导的腺病毒空载体间分别插入Ang-1和VEGF165基因,由此构建出Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1、Ad-Ang-1-PolyA-promoter-VEGF165和Ad-VEGF165-IRES-Ang-1重组腺病毒载体。ELISA法检测比较IRES及PolyA-promoter二个不同载体中目的基因的表达;同时结合兔角膜缘注射病毒诱导血管新生的结果,挑选出一个最佳Ang-1与VEGF165双基因共表达腺病毒载体。将此最佳双基因共表达腺病毒感染在再生丝素膜上培养的兔骨髓基质细胞,用荧光显微镜、RT-PCR及ELISA法检测VEGF165及Ang-1基因在兔骨髓基质细胞中的转录和表达;转基因细胞修饰的再生丝素膜植入兔角膜层,检测角膜新生血管生长面积;HE染色及免疫组化法检测兔角膜层中血管密度及血管形成相关因子的表达。结果:(1)并成功获得了高效价的Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1、Ad-Ang-1-PolyA-promoter-VEGF165和Ad-VEGF165-IRES-Ang-1重组病毒子。(2)ELISA法及兔角膜缘注射病毒法挑选与血管形成相关的最佳双基因腺病毒共表达载体Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1。(3)培养于再生丝素膜上生长的兔骨髓基质细胞经上述挑选的病毒感染后,将该转基因细胞修饰的再生丝素膜植入兔角膜层,2周新生血管长入再生丝素膜植入区域的角膜内,新生血管维持1月以上,HE染色与免疫组化显示血管密度明显增多,CD34在兔角膜层中获得成功表达,与转Ad-GFP细胞修饰的再生丝素膜组和单纯再生丝素膜组比较呈显著性差异(P<0.05),由此证明Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1转基因兔骨髓基质细胞修饰的丝素材料可促进血管生成。结论:成功构建并挑选出VEGF165和Ang-1最佳双基因共表达腺病毒载体,转VEGF165及Ang-1基因修饰的再生丝素膜有利于新生血管形成,为今后利用转基因种子细胞修饰的再生丝素膜,或构建诱导血管形成的生物膜材料提供了分子依据。

关键词：再生丝素膜血管生成素-1 血管内皮生长因子腺病毒转基因

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外周血循环Her-2 mRNA在乳腺癌诊断中的应用

外周血循环Her-2 mRNA在乳腺癌诊断中的应用

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中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会

作者：朱海超崔雪玲金艳花杨康鹃延边大学医学部基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室吉林大学白求恩医学院遗传学系

本研究旨在通过RT-PCR检测乳腺癌患者外周血循环Her-2 mRNA水平,探讨其作为乳腺癌的早期诊断的临床意义,并为进一步开发新的肿瘤诊断方法提供实验依据。取来自我院体检中心体检的不同性别,不同年龄段健康人,共30份血清为正常对照组。乳... 详细信息

本研究旨在通过RT-PCR检测乳腺癌患者外周血循环Her-2 mRNA水平,探讨其作为乳腺癌的早期诊断的临床意义,并为进一步开发新的肿瘤诊断方法提供实验依据。取来自我院体检中心体检的不同性别,不同年龄段健康人,共30份血清为正常对照组。乳腺癌组病人均经病理或细胞学诊断证实,共60份血清;非肿瘤良性疾病组如糖尿病,高血压及肺炎等以病人临床诊断为依据,且排除其他疾病的可能,共30份血清。提取血清循环RNA,RT-PCR法检测循环Her-2 mRNA表达情况。选择延边大学临床医学院、吉林大学第一临床医院、吉林省肿瘤医院,经外科手术切除、并且经病理检测证实的,手术前均未进行化疗、放疗的乳腺癌标本60例。免疫组织化学染色检测乳腺癌组织Her-2的表达情况。结果显示:1.在健康组、非肿瘤良性疾病组外周血循环Hcr-2 rm RNA均未检出;而在乳腺癌组60份血清中Her-2 m RNA阳性表达占27例,总阳性率为45.0%(27/60)。其中浸润性导管癌Ⅰ期为1例、Ⅱ期为15例、Ⅲ期为8例.,髓样癌Ⅰ期为2例,Ⅱ期为1例。并且,Her-2表达与腋窝淋巴结的转移相关,在腋窝淋巴结阳性的乳腺癌患者,Her-2的阳性表达率为52.63%,较腋窝淋巴结阴性的乳腺癌患者明显增高,后者的表达率为31.82%%。同时本研究亦显示Her-2的阳性表达与患者在肿瘤大小、年龄、TNM分期及组织学类型方面的差异比较均无统计学意义(p>0.05)。2.免疫组织化学染色法检测Her-2的阳性表达在细胞膜。在60例手术切除的癌旁正常乳腺组织中未见阳性表达;在60例乳腺癌组织中,Her-2呈阳性表达的占29例,总阳性率为48.3%(29/60)。其中浸润性导管癌Ⅰ期为2例、Ⅱ期为15例、Ⅲ期为9例,髓样癌Ⅰ期为2例,Ⅱ期为1例。Her-2表达与腋窝淋巴结的转移相关,在腋窝淋巴结阳性的乳腺癌患者,Her-2的阳性表达率为57.89%,较腋窝淋巴结阴性的乳腺癌患者明显增高,后者的表达率为31.82%。同时本研究亦显示Her-2的阳性表达与患者在肿瘤大小、年龄、TNM分期及组织学类型方面的差异比较均无统计学意义(p>0.05)。本研究显示外周血循环Her-2 nmRNA在乳腺癌患者中表达明显增高,与免疫组织化学染色法检测Her-2在手术切除乳腺癌组织中的表达具有一致性,Her-2癌基因表达与乳腺癌患者年龄及肿瘤大小无关,与乳腺癌的转移密切相关,预示肿瘤细胞具有高的侵袭行为和不良预后。外周血循环Her-2 mRNA检测作为一种新的非侵入性的肿瘤标志物检测在乳腺癌的早期诊断以及预后检测等方面具有一定的参考价值。

关键词：循环RNA Her-2 乳腺癌 RT-PCR 免疫组织化学染色

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