检索结果-内蒙古大学图书馆

中华血液学杂志 2004年第11期25卷 666-670页

作者：齐春梅杨克恭陈松森张艳丽邓艳春苏林王亚栋罗丝刘长征罗庆良熊国林中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 军事医学科学院放射医学研究所

目的　研究人造血增效因子 (hHSF)在大肠杆菌 (E .coli)中的表达及其动员恒河猴外周血造血干 /祖细胞的作用。方法　应用重叠PCR方法合成编码hHSF的DNA片段 ,克隆测序证实其序列正确后 ,重组到表达载体 pET30a中 ,转入E .coliBL2 1(DE3... 详细信息

目的　研究人造血增效因子 (hHSF)在大肠杆菌 (E .coli)中的表达及其动员恒河猴外周血造血干 /祖细胞的作用。方法　应用重叠PCR方法合成编码hHSF的DNA片段 ,克隆测序证实其序列正确后 ,重组到表达载体 pET30a中 ,转入E .coliBL2 1(DE3) ,并用IPTG诱导表达 ,目的蛋白用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化和复性。用飞行时间质谱仪和氨基酸测序仪分别测定纯化的目的蛋白相对分子质量、N端氨基酸序列以及氨基酸组成。选用恒河猴 8只 ,随机分为两组 ,每组4只 :一组为单次皮下注射重组hSCF 5 0 0 μg/kg ,另一组为皮下注射rhG CSF 10 μg·kg-1·d-14d后 ,单次注射rhHSF 5 0 0 μg/kg。观察恒河猴外周血CD34+ 细胞、CFU GM数目以及血常规。结果　测序证实合成的hHSF序列与设计一致 ,构建的重组表达载体 pET30a hHSF在E .coli中获高效表达 ,目的蛋白占菌体总蛋白的 30 %左右 ,主要以包涵体形式存在。目的蛋白纯度达 95 %以上 ,N端前 10个氨基酸序列分析结果与预期一致 ;相对分子质量为 75 4 0 ;氨基酸组成分析结果与理论值基本一致。恒河猴实验结果表明 ,单次皮下注射重组hHSF后外周血CD34+ 细胞、CFU GM和中性粒细胞数分别在用药后 3h ,1h和 4 5min达高峰 ,动员幅度分别为用药前检测值的 16 .3倍、1.9?

关键词：动员恒河猴外周血 CFU-GM 中性粒细胞 CD34^+细胞人造血高效表达 E.coli 重叠PCR

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肿瘤抑制剂GA对SH-SY5Y细胞凋亡的影响及分子机制研究

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基础医学与临床 2004年第4期24卷 380-384,F003页

作者：沈金花张业吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为了探讨HSP90特异的功能抑制剂geldanamycin(GA)能否用于神经母细胞瘤的临床治疗 ,通过检测未分化的和全反式维甲酸 (RA)诱导分化的神经母细胞瘤SH SY5Y细胞在不同浓度GA处理后的细胞存活率 ,发现GA呈剂量依赖性诱导SH SY5Y细胞凋亡 ,... 详细信息

为了探讨HSP90特异的功能抑制剂geldanamycin(GA)能否用于神经母细胞瘤的临床治疗 ,通过检测未分化的和全反式维甲酸 (RA)诱导分化的神经母细胞瘤SH SY5Y细胞在不同浓度GA处理后的细胞存活率 ,发现GA呈剂量依赖性诱导SH SY5Y细胞凋亡 ,但是分化细胞对同样剂量的GA不是很敏感 [细胞存活率依次为 (82 0±6 0 ) %比较 (6 5 0± 3 0 ) % ,P <0 0 2 ;(6 7 9± 3 1) %比较 (4 3 4± 3 9) % ,P <0 0 3;(4 3± 0 8) %比较 (0 4±0 1) % ,P <0 0 5 ]。Western印迹分析和免疫荧光实验显示 ,GA能抑制细胞中c Jun和c Fos的表达 ,并且GA剂量越高 ,其抑制越明显 ;同时GA也诱导了p5 3的核聚集。与未分化细胞相比 ,在相同剂量GA处理后分化细胞中c Jun和c Fos的表达均比未分化细胞略高 ;但是分化细胞中p5 3的核聚集却不如前者明显。提示未分化细胞对同样剂量的GA比分化细胞更敏感 ,可能与分化细胞能抵抗GA引起的c Jun、c Fos的降低以及p5 3的核聚集有关。

关键词： c-Jun c-Fos 凋亡 SH-SY5Y细胞剂量肿瘤抑制神经母细胞瘤分化细胞 HSP90 免疫荧光实验

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精神分裂症遗传易感性研究进展

引用

基础医学与临床 2004年第5期24卷 497-503页

作者：许琪中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

精神分裂症是人类最常见的精神疾患之一 ,属于复杂的多基因遗传性疾病。随着分子生物学技术和遗传学数据分析方法的进步 ,精神分裂症易感基因方面的研究也取得了一定的进展。本文就近年来国际上关于精神分裂症遗传易感性研究的一些成果... 详细信息

精神分裂症是人类最常见的精神疾患之一 ,属于复杂的多基因遗传性疾病。随着分子生物学技术和遗传学数据分析方法的进步 ,精神分裂症易感基因方面的研究也取得了一定的进展。本文就近年来国际上关于精神分裂症遗传易感性研究的一些成果进行综述 ,主要内容包括 :(1)精神分裂症分子遗传学研究的基本策略与方法 ;(2 )精神分裂症易感基因的全基因组扫描研究结果 ;(3)依据精神分裂症发病的三大假说 ,进行的候选基因研究的部分结果 ;(4 )采用新型多位点联合作用分析方法。

关键词：精神分裂症遗传易感性研究进展分子生物学技术遗传学数据

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人ATP7B基因对Wilson病动物模型LEC大鼠暴发性肝炎的治疗

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解剖学报 2004年第3期35卷 282-286页

作者：孟雁苏牧中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　探讨人ATP7B基因对Wilson病动物模型LEC大鼠暴发性肝炎的治疗效果。　方法　将构建的 7.1kb含有鸡 β肌动蛋白启动子的人正常ATP7BcDNA ,经显微注射法导入人Wilson病动物模型LEC(long EvansCinnamon)大鼠受精卵 ,建立转基因功能... 详细信息

目的　探讨人ATP7B基因对Wilson病动物模型LEC大鼠暴发性肝炎的治疗效果。　方法　将构建的 7.1kb含有鸡 β肌动蛋白启动子的人正常ATP7BcDNA ,经显微注射法导入人Wilson病动物模型LEC(long EvansCinnamon)大鼠受精卵 ,建立转基因功能恢复大鼠模型。以Westernbolt检测人ATP7B在转基因大鼠肝内的表达 ,用同窝无转基因大鼠及正常野生型LEA大鼠作对照 ,对 6～ 16周龄的转基因大鼠的血清AST、ALT和总胆红素水平进行连续测定 ,同时取 13周龄转基因大鼠的肝组织进行病理学和组织化学分析。　结果　人ATP7B基因在转基因大鼠的肝组织中获得正确和完整的表达 :12周龄前后 ,与同窝无转基因大鼠相比 ,转基因大鼠的血清AST、ALT和总胆红素水平明显降低 ,肝组织的炎性病变显著减轻 ,肝细胞内铜的蓄积减少 ;至 16周龄 ,转基因大鼠的临床表型未见异常 ,存活率达 10 0 %。说明人ATP7B的导入 ,成功地抑制了Wilson病动物模型LEC大鼠的暴发性肝炎的发生。结论　Wilson病肝炎的发生与ATP7B基因功能缺陷引起的铜蓄积有直接关系。基因转移有可能是一种有效的治疗Wilson病的方法。

关键词：人ATP7B基因基因治疗暴发性肝炎 LEC大鼠

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DIFF33H参与TRAIL诱导的人Jurkat T淋巴细胞白血病细胞凋亡调控

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中国免疫学杂志 2004年第12期20卷 809-812页

作者：邹耀中刘彦信(指导) 郑德先中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的 :研究DIFF33H在人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat凋亡中的表达规律及其生物学功能。方法 :采用PCR扩增DIFF33HcDNA ,Northernblot分析DIFF33H的mRNA表达 ,MTT法测定细胞凋亡。结果 :在重组可溶性TRAIL诱导的人T淋巴细胞白血病细胞Jurka... 详细信息

目的 :研究DIFF33H在人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat凋亡中的表达规律及其生物学功能。方法 :采用PCR扩增DIFF33HcDNA ,Northernblot分析DIFF33H的mRNA表达 ,MTT法测定细胞凋亡。结果 :在重组可溶性TRAIL诱导的人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat凋亡过程中 ,DIFF33HmRNA的表达水平随着Jurkat细胞的凋亡而下降 ,并对重组可溶性TRAIL的作用具有浓度和时间的依赖性。在抗肿瘤药物 5 FU诱导肿瘤细胞凋亡过程中 ,DIFF33H的mRNA表达水平也显著下降。结论 :DIFF33H参与人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat凋亡的调控。

关键词： DIFF33H TRAIL 5-FU T淋巴细胞白血病细胞 Jurkat细胞凋亡

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炎性因子遗传多态性与Alzheimer病

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基础医学与临床 2004年第1期24卷 7-11页

作者：李晓青张俊武中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

炎性因子在Alzheimer病 (简称AD)中的作用越来越受到研究者的重视 ,成为研究AD发病机制的又一热点。近来的研究表明 ,炎性因子遗传多态性与AD的发病和发展相关 ,为寻找AD相关基因提供了新的线索。本文总结分析了各种炎性因子IL 1、IL 6... 详细信息

炎性因子在Alzheimer病 (简称AD)中的作用越来越受到研究者的重视 ,成为研究AD发病机制的又一热点。近来的研究表明 ,炎性因子遗传多态性与AD的发病和发展相关 ,为寻找AD相关基因提供了新的线索。本文总结分析了各种炎性因子IL 1、IL 6、TNF α、趋化因子及补体等参与AD发病的机制。

关键词：炎性因子遗传多态性 Alzheimer病发病机制白介素1 白介素6 肿瘤坏死因子老年痴呆

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基因多态性与疾病相关性的遗传分析中某些值得注意的问题

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中国医学科学院学报 2004年第5期26卷 479-482页

作者：方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

绝大多数疾病的发生发展都是遗传因素与环境因素相互作用的结果,因此近年来从遗传学角度对致病基因(单基因病)和疾病易感基因(复杂性状多基因病)进行定位、鉴定和遗传流行病学的研究逐渐成为热点,国内外刊物发表相关的论文与日俱增.本... 详细信息

绝大多数疾病的发生发展都是遗传因素与环境因素相互作用的结果,因此近年来从遗传学角度对致病基因(单基因病)和疾病易感基因(复杂性状多基因病)进行定位、鉴定和遗传流行病学的研究逐渐成为热点,国内外刊物发表相关的论文与日俱增.本文拟对该类研究中某些值得注意的问题作一讨论,以期抛砖引玉.

关键词：基因多态性遗传分析疾病

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人ATP7B基因对Wilson病动物模型LEC大鼠肝硬化及肝癌的治疗

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解剖学报 2004年第4期35卷 405-408页

作者：孟雁苏牧中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　探讨人ATP7B基因对Wilson病动物模型LEC(Long EvansCinnamon)大鼠肝硬化及肝癌的治疗效果。　方法　将 7 1kb含有鸡 β肌动蛋白启动子的人正常ATP7BcDNA ,经显微注射法导入Wilson病动物模型LEC大鼠受精卵 ,建立转基因功能恢复大... 详细信息

目的　探讨人ATP7B基因对Wilson病动物模型LEC(Long EvansCinnamon)大鼠肝硬化及肝癌的治疗效果。　方法　将 7 1kb含有鸡 β肌动蛋白启动子的人正常ATP7BcDNA ,经显微注射法导入Wilson病动物模型LEC大鼠受精卵 ,建立转基因功能恢复大鼠模型。以无转基因大鼠及正常野生型LEA大鼠为对照 ,对 17～ 30周龄的转基因大鼠的血清AST、ALT水平进行连续测定 ,同时取 30和 6 0周龄转基因大鼠的肝脏进行病理组织学和组织化学分析。　结果　 17～ 30周龄 ,转基因大鼠的血清丙氨酸氨基转移酶 (AST)、天门冬氨酸氨基转移酶 (ALT)保持在较低的水平。至 6 0周龄 ,雄性转基因大鼠肝组织未见胆管纤维化。在所有被检的转基因大鼠个体未见肝细胞癌性病变。转基因大鼠的存活率达 95 7%。此外 ,30和 6 0周龄的转基因大鼠肝细胞内铜着色颗粒的分布及数量无明显变化。　结论　人ATP7B的导入有效的延缓了Wilson病动物模型LEC大鼠肝硬化的形成、抑制了肝癌的发生。Wilson病的肝硬化及肝癌的发生可能与铜的蓄积无直接关系。

关键词：人ATP7B 基因治疗肝硬化肝癌 LEC大鼠

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反义技术研究进展

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中国生物工程杂志 2004年第12期24卷 43-47页

作者：王波陈梅红中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

反义技术利用DNA或RNA分子通过Watson Crick碱基配对原则与目的基因的mRNA互补结合 ,通过各种机制使其降解或抑制其编码蛋白的翻译 ,从而抑制目的基因的表达。与基因敲除(geneknockout)等功能缺失性研究方法相比 ,反义技术具有投入少 ,... 详细信息

反义技术利用DNA或RNA分子通过Watson Crick碱基配对原则与目的基因的mRNA互补结合 ,通过各种机制使其降解或抑制其编码蛋白的翻译 ,从而抑制目的基因的表达。与基因敲除(geneknockout)等功能缺失性研究方法相比 ,反义技术具有投入少 ,周期短 ,操作简单等优点 ,因此受到了广泛的关注。对几种常用反义技术的研究进展及存在的问题进行概述。

关键词：反义技术研究进展抑制目的基因表达碱基配对基因敲除 RNA分子 DNA 编码蛋白

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CDK2蛋白质分子结构与其入核转运过程关系的初步分析(英文)

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Acta Genetica Sinica 2004年第5期31卷 444-448页

作者：刘琦罗阳姜莉周伟强满晓辉张学中国医科大学医学基因组学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

应用重组技术构建野生型及缺失型CDK2基因的真核表达载体 ,分别使野生型及缺失型CDK2蛋白与增强型绿色荧光蛋白 (Enhanced greenFluorescentProtein ,EGFP)形成融合蛋白。通过脂质体介导的方法将载体转染人宫颈癌细胞系HeLa和中华仓鼠... 详细信息

应用重组技术构建野生型及缺失型CDK2基因的真核表达载体 ,分别使野生型及缺失型CDK2蛋白与增强型绿色荧光蛋白 (Enhanced greenFluorescentProtein ,EGFP)形成融合蛋白。通过脂质体介导的方法将载体转染人宫颈癌细胞系HeLa和中华仓鼠卵巢细胞系CHO ,经过细胞周期同步化处理后于荧光显微镜下观察EGFP的亚细胞定位以示踪野生型及缺失型CDK2基因的表达。结果表明 ,野生型CDK2基因的表达产物定位于细胞核 ,而两种缺失型CDK2基因分别编码的CDK2蛋白N 端 1～ 2 0 1及 98～ 2 98多肽均主要定位于细胞质。以上结果提示 ,CDK2蛋白序列中不含有与核定位直接相关的信号 ,其入核过程可能是由其N 端 1～ 97及 2 0 2～ 2 98多肽范围内的部分氨基酸共同形成高级结构 ,并依赖此高级结构与其他含有入核信号的蛋白形成复合物 ,从而被带动进入细胞核的。

关键词： CDK2 入核转运增强型绿色荧光蛋白质粒转染

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