检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 2025年第15期70卷 2385-2396页

作者：路丹荑宋爱霞陈飞复旦大学生物医学研究院复旦大学附属肿瘤医院基因工程国家重点实验室上海市医学表观遗传学重点实验室上海 200032

基因表达的精确时空调控对生物体的生存和发育至关重要. Integrator作为一种后生动物特异性的多亚基复合物, 能够与蛋白磷酸酶PP2A核心酶(PP2A-AC)形成稳定的复合体, 被命名为INTAC(Integrator-PP2A-AC). INTAC复合体是RNA聚合酶Ⅱ启动... 详细信息

基因表达的精确时空调控对生物体的生存和发育至关重要. Integrator作为一种后生动物特异性的多亚基复合物, 能够与蛋白磷酸酶PP2A核心酶(PP2A-AC)形成稳定的复合体, 被命名为INTAC(Integrator-PP2A-AC). INTAC复合体是RNA聚合酶Ⅱ启动子近端暂停和提前终止的关键调节因子, 还对多种非编码RNA进行3ʹ末端加工. INTAC复合体在转录调控中发挥重要作用, 其功能缺失与多种生理过程异常及疾病发生密切相关. 本文系统梳理了INTAC复合体的发现历程、结构特征及功能进展, 重点解析了其在转录调控过程中的多重作用, 并总结了INTAC复合体在生理和疾病中的关键功能.

关键词： INTAC Integrator PP2A RNA聚合酶Ⅱ 转录终止

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甲型流感病毒病灶形成滴定方法的建立与应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2025年第1期45卷 45-52页

作者：李佳楚巧鸿张菱芳单徐畅王瑭琪韩瑞雯蒋宇婕王东红黄保英邓瑶谭文杰温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省医学遗传学重点实验室温州325035 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会生物安全重点实验室北京102206 内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010110 新乡医学院公共卫生学院新乡453003

目的建立并优化一种甲型流感病毒(influenza A virus,FluA)滴度检测方法——病灶形成试验(focus forming assay,FFA),并与传统噬斑形成试验(plague forming assay,PFA)应用性能进行比较。方法比较3种过氧化物酶底物在免疫染色中的病灶效... 详细信息

目的建立并优化一种甲型流感病毒(influenza A virus,FluA)滴度检测方法——病灶形成试验(focus forming assay,FFA),并与传统噬斑形成试验(plague forming assay,PFA)应用性能进行比较。方法比较3种过氧化物酶底物在免疫染色中的病灶效果,采用PFA法与FFA法在12孔板上探索FluA培养时间及噬斑形态,并在96孔板上确定不同亚型FluA的最佳孵育时间和优化病毒吸附量。比较优化后FFA法与PFA法的相关性,并将改进优化的FFA法应用于法匹拉韦体外抗病毒药效分析和不同亚型FluA中和抗体检测。结果研究发现,TRUEBLUE显色液是病灶显色的优选底物。FFA法较PFA法在病毒滴定检测中的灵敏度提升且检测时间缩短,2种方法检测结果具有较高的相关性。将96孔板替换12孔板后进行不同亚型FluA的FFA滴定,检出时间可缩短,并通过优化病毒吸附体积,可进一步减少血清样本的使用量。FFA法与PFA法测定的法匹拉韦抗流感病毒半数效应浓度无显著差异,且和荧光定量PCR法检测结果相一致。病灶减少中和试验和血凝抑制试验在抗FluA血清中和抗体滴度测定中也具有良好相关性。结论改进的FFA方法可为FluA滴度测定、抗病毒药物和广谱疫苗评价提供高通量且应用性能更优的实验技术与替代方案。

关键词：甲型流感病毒噬斑形成试验病灶形成试验血凝抑制试验抗病毒药物中和抗体

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BNIP3介导线粒体自噬在m.3635G>A相关Leber遗传性视神经病变中的作用机制

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中华医学遗传学杂志 2025年第2期42卷 198-205页

作者：刘贞管威张娟娟管敏鑫温州医科大学检验医学院、生命科学学院 Attardi线粒体生物医学研究院温州325035 温州医科大学附属眼视光医院省部共建眼视光学和视觉科学国家重点实验室温州325027 浙江大学遗传学研究所浙江省遗传缺陷与发育障碍研究重点实验室杭州310058

目的探讨BNIP3介导线粒体自噬在m.3635G>A变异相关Leber遗传性视神经病变(LHON)中的作用机制。方法选取2013年9月于温州医科大学附属眼视光医院就诊的1例携带m.3635G>A变异的中国LHON患者的转线粒体细胞系为研究对象,同时纳入1例... 详细信息

目的探讨BNIP3介导线粒体自噬在m.3635G>A变异相关Leber遗传性视神经病变(LHON)中的作用机制。方法选取2013年9月于温州医科大学附属眼视光医院就诊的1例携带m.3635G>A变异的中国LHON患者的转线粒体细胞系为研究对象,同时纳入1例具有相同线粒体背景的正常受试者的转线粒体细胞系作为对照,通过免疫荧光、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹等方法检测细胞中自噬相关蛋白的表达,探究BNIP3介导线粒体自噬对m.3635G>A变异相关LHON的作用。本研究已通过温州医科大学附属眼视光医院医学伦理委员会的审查(批准号:2023-J-096)。结果①与对照组细胞比较,变异组(m.3635G>A)细胞中自噬相关蛋白LC3(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)和LAMP1的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),其中大自噬相关蛋白ATG12、ATG7和ATG5的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。②与对照组细胞比较,变异组细胞中线粒体自噬相关蛋白BNIP3的mRNA与蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论m.3635G>A变异可抑制BNIP3介导线粒体自噬的作用,进而导致LHON的发生。

关键词： Leber遗传性视神经病变线粒体DNA 基因变异自噬线粒体自噬

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北京地区1株呼吸道合胞病毒A亚型ON1基因型流行株的分离及其生物学特性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2025年第1期45卷 10-16页

作者：单徐畅任皎张伟张钟贤张菱芳李佳楚巧鸿宋敬东陈志海邓瑶翟德胜谭文杰新乡医学院公共卫生学院新乡453003 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会生物安全重点实验室北京102206 首都医科大学附属北京地坛医院感染性疾病临床中心北京100015 温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省医学遗传学重点实验室温州325035

目的分离北京地区流行的1株呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV),了解该毒株的基因分型和生物学特性。方法从2023年北京地区1例RSV感染患儿鼻咽分泌物标本中分离RSV。qRT-PCR扩增病毒核酸;利用透射电子显微镜、间接免疫荧... 详细信息

目的分离北京地区流行的1株呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV),了解该毒株的基因分型和生物学特性。方法从2023年北京地区1例RSV感染患儿鼻咽分泌物标本中分离RSV。qRT-PCR扩增病毒核酸;利用透射电子显微镜、间接免疫荧光试验、空斑形成试验鉴定病毒;根据全基因组测序结果进行基因组系统发育分析;测定病毒滴度,分析复制特点;验证分离毒株用于抗病毒药物体外筛选平台的有效性。结果成功分离1株RSV毒株hRSV/C-Tan/BJ 202301,其感染Hep-2细胞可形成合胞体。电镜下可观察到呈球形、丝状及不规则的病毒颗粒;经免疫荧光检测,病毒感染Hep-2细胞可见绿色荧光,空斑试验结果可见圆斑,形态与Long株相同;基因组序列分析显示其为ON1基因型;与Long株具有相似的细胞生长动力学特性;可应用于抗病毒药物体外筛选。结论本研究从临床样本中成功分离并鉴定1株RSV,该毒株的生物学特性和亲缘关系反映了北京地区流行毒株的特点,为我国RSV疫苗研发及抗病毒药物筛选提供实验材料。

关键词：呼吸道合胞病毒病毒分离鉴定 ON1基因型

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CircMYCBP2促进膀胱癌淋巴管癌栓形成的机制

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实用医学杂志 2025年第8期41卷 1139-1148页

作者：刘戴胤李秋燕陈长昊中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外科广东广州510030 广东省恶性肿瘤表观遗传学与基因调控重点实验室华南肿瘤国家重点实验室广东广州510030 福建医科大学省立临床医学院福建福州350001 福州大学附属省立医院泌尿外科福建福州350001

目的探讨在淋巴转移阳性膀胱癌组织中高表达的环状RNA(circular RNA,circRNA) MYCBP2在增强膀胱癌细胞黏附能力介导淋巴管癌栓形成中的作用机制,评估其临床相关性及潜在应用价值。方法首先通过高通量测序筛选出在淋巴转移阳性膀胱癌组... 详细信息

目的探讨在淋巴转移阳性膀胱癌组织中高表达的环状RNA(circular RNA,circRNA) MYCBP2在增强膀胱癌细胞黏附能力介导淋巴管癌栓形成中的作用机制,评估其临床相关性及潜在应用价值。方法首先通过高通量测序筛选出在淋巴转移阳性膀胱癌组织中高表达的circRNA,并进一步通过扩大临床样本验证其在膀胱癌组织中的表达情况。通过circBank生物信息网站预测其编码能力,免疫共沉淀结合银染实验及蛋白质印迹(Western blot,WB)检测编码短肽。通过RNA pulldown、实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和WB实验探究circMYCBP2与真核翻译起始因子3亚基H(eukaryotic translation initiation factor 3 subunit H,EIF3H)相互作用介导翻译及调控血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)的转录,进而促进脉管癌栓形成的分子机制。接着通过在体外构建过表达和敲低circMYCBP2的膀胱癌细胞,结合跨内皮细胞迁移实验和划痕实验验证circMYCBP2编码的短肽对膀胱癌细胞侵袭能力的影响。结果高通量测序和临床大样本实验分析证实circMYCBP2在淋巴转移阳性的膀胱癌组织中高表达。体外实验证实过表达circMYCBP2能显著促进膀胱癌细胞跨越淋巴管内皮细胞。机制上,circMYCBP2通过IRES依赖机制结合EIF3H编码MYCBP2-227aa,过表达MYCBP2-227aa后VCAM-1的信使RNA(message RNA,mRNA)稳定性增加,进而增强UM-UC-3细胞侵袭能力。结论circMYCBP2通过EIF3H介导的IRES依赖翻译机制编码短肽MYCBP2-227aa,该短肽的表达影响VCAM-1的表达水平和膀胱癌细胞的侵袭能力。充分阐述了circMYCBP2在淋巴管癌栓形成及淋巴转移中发挥的重要生物学作用及其分子机制,为膀胱癌的早期淋巴转移靶向治疗提供了潜在生物标志物及干预靶点。

关键词：膀胱癌淋巴管癌栓 circRNA翻译内部核糖体进入位点

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不同单克隆抗体聚集与断裂行为的多维分析

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华东理工大学学报(自然科学版) 2025年第1期51卷 42-49页

作者：陆治锦文玺凯刘鲁杰王宜冰沈春雷伍维沈智勇赵黎明华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室上海200237 上海臻格生物技术有限公司上海201413 上海市细胞代谢光遗传学技术前沿科学研究基地上海200237

采用尺寸排阻色谱法和分析型超速离心法对ZG154和ZG187抗体的分子大小变异体进行正交分析,系统解析了造成聚集和断裂的因素。结果表明,40℃时ZG154样品在天冬酰胺329位点发生脱酰胺修饰的比例增加了30.7%,通过增加分子间相互作用,相关... 详细信息

采用尺寸排阻色谱法和分析型超速离心法对ZG154和ZG187抗体的分子大小变异体进行正交分析,系统解析了造成聚集和断裂的因素。结果表明,40℃时ZG154样品在天冬酰胺329位点发生脱酰胺修饰的比例增加了30.7%,通过增加分子间相互作用,相关修饰加速了聚集,并导致断裂的发生;40℃时ZG187样品在蛋氨酸430位点发生氧化修饰的比例增加了36.9%,相关修饰降低了蛋白的稳定性,导致了断裂的发生。研究结果为上述药物研发和生产过程中的聚集与断裂问题提供了检测和分析方法。

关键词：单克隆抗体聚集断裂脱酰胺氧化

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Connexin31相互作用蛋白筛选、证实与功能研究

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生物化学与生物物理进展 2005年第1期32卷 18-24页

作者：刘宇谭志平潘乾贺立强蔡芳邬玲仟梁德生夏昆夏家辉张灼华中南大学医学遗传学国家重点实验室长沙410078

筛选间隙连接蛋白31 (connexin31,Cx31) 相互作用蛋白并研究其在Cx31运输中的功能. 运用制备的抗Cx31多克隆抗体免疫沉淀,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,蛋白质条带回收,蛋白质胶块酶解,电喷雾-四极杆-飞行时间质谱分析,数据库扫描筛选可... 详细信息

筛选间隙连接蛋白31 (connexin31,Cx31) 相互作用蛋白并研究其在Cx31运输中的功能. 运用制备的抗Cx31多克隆抗体免疫沉淀,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,蛋白质条带回收,蛋白质胶块酶解,电喷雾-四极杆-飞行时间质谱分析,数据库扫描筛选可能相互作用蛋白,可能互作蛋白经免疫共沉淀、细胞免疫共定位等证实,确定actin为Cx31相互作用蛋白. 用药物处理细胞,抑制actin的功能,观察Cx31定位与间隙连接通道的通透性,确定actin在Cx31运输中的功能. 当药物抑制actin的功能时,Cx31很少能到达细胞膜上形成间隙连接通道,Cx31主要分布在胞质中;当药物抑制tublin的功能时,Cx31能到达细胞膜上形成间隙连接通道,细胞免疫荧光实验显示间隙连接斑有增多的现象,但染料转移实验表明细胞膜上间隙连接通道并没有增加. Actin在Cx31运输至细胞膜上形成间隙连接通道的过程中具有重要作用.

关键词： Cx31 间隙连接蛋白相互作用蛋白细胞免疫共定位免疫共沉淀

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人核糖体DNA打靶载体介导mda-7基因对肝癌的体外基因治疗研究(英文)

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生物化学与生物物理进展 2009年第11期36卷 1429-1435页

作者：薛金锋刘雄昊何嫱薛志刚胡友金李卓杨俊林高庭潘乾龙志高邬玲仟夏昆梁德生夏家辉中南大学医学遗传学国家重点实验室长沙410078

人核糖体DNA打靶载体pHr是一种由中南大学医学遗传学国家重点实验室开发构建的针对人类基因组的同源重组质粒载体.利用pHr构建了一种mda-7/GFP融合基因的人源基因表达载体pHr-CMG,并研究了其在肝癌细胞系Bel-7402中的作用.利用荧光显微... 详细信息

人核糖体DNA打靶载体pHr是一种由中南大学医学遗传学国家重点实验室开发构建的针对人类基因组的同源重组质粒载体.利用pHr构建了一种mda-7/GFP融合基因的人源基因表达载体pHr-CMG,并研究了其在肝癌细胞系Bel-7402中的作用.利用荧光显微镜、RT-PCR和Western blotting检测了mda-7/GFP融合基因的表达;利用细胞周期分析、MTT和Hoechst33258染色研究了其在细胞中的作用.结果显示,pHr-CMG载体能在Bel-7402细胞中有效表达MDA-7/GFP融合蛋白,进而抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,推测其可能是由载体表达了mda-7基因引起细胞在G2/M期累积所导致的.同时,实验结果证实了人核糖体DNA打靶载体系统以及pHr-CMG表达载体的有效性,为其在进一步基因治疗研究中的应用提供了理论和实验基础.

关键词：人核糖体DNA打靶载体 mda-7基因肝癌基因治疗

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人间隙连接蛋白31相互作用蛋白AnnexinⅡ的筛选与证实

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生物化学与生物物理进展 2005年第6期32卷 501-507页

作者：刘宇贺力强谭志平唐程远迟静薇蔡芳潘乾龙志高梁德生邬玲仟戴和平夏昆张灼华夏家辉中南大学医学遗传学国家重点实验室长沙410078

间隙连接蛋白31(connexin31,Cx31)是间隙连接蛋白(connexin)家族的一员,目前对于Cx31的功能及其调节方式知之甚少.采用固相多肽合成的方法合成Cx31羧基端一个多肽片段(250￣266),经HPLC纯化后偶联到匙孔血蓝蛋白,免疫新西兰雄兔后采血... 详细信息

间隙连接蛋白31(connexin31,Cx31)是间隙连接蛋白(connexin)家族的一员,目前对于Cx31的功能及其调节方式知之甚少.采用固相多肽合成的方法合成Cx31羧基端一个多肽片段(250￣266),经HPLC纯化后偶联到匙孔血蓝蛋白,免疫新西兰雄兔后采血检测、并纯化、经蛋白质印迹、细胞免疫荧光染色、免疫沉淀证实得到的抗体为特异性抗Cx31的抗体.运用制备的抗Cx31多克隆抗体免疫沉淀,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离,蛋白质条带回收,蛋白质胶块酶解,Q-TOF质谱分析,数据库扫描筛选可能相互作用蛋白,运用抗体pull-down实验,筛选到可能相互作用蛋白annexinⅡ,经过免疫共沉淀、细胞免疫共定位等实验证实annexinⅡ与Cx31相互作用.

关键词：间隙连接蛋白31 抗体蛋白质相互作用 annexinⅡ 免疫共沉淀免疫共定位

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核定位信号肽提高核糖体区打靶载体转染效率的研究(英文)

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生物化学与生物物理进展 2009年第10期36卷 1283-1290页

作者：石岩刘雄昊梁德生冯劢邬玲仟杨俊林李卓赵凯潘乾龙志高夏家辉中南大学医学遗传学国家重点实验室长沙410078

核糖体区打靶载体(10～14kb)是中南大学医学遗传学国家重点实验室构建的一种具有定点整合能力的非病毒载体,具有安全性好及长期稳定表达的特点,但是较低的转染率成为其应用于临床的主要障碍.核定位信号肽可以促进非病毒载体进入细胞核,... 详细信息

核糖体区打靶载体(10～14kb)是中南大学医学遗传学国家重点实验室构建的一种具有定点整合能力的非病毒载体,具有安全性好及长期稳定表达的特点,但是较低的转染率成为其应用于临床的主要障碍.核定位信号肽可以促进非病毒载体进入细胞核,从而提高其转染效率.但是核定位信号肽提高外源基因表达的能力却严重受到其与DNA偶联方式及偶联剂的影响.采用偶联剂SPB可以通过静电作用将核糖体区打靶载体与SV40核定位信号肽有效结合,并且可以防止其被DNase降解.应用聚乙烯亚胺转染人原代皮肤成纤维细胞后,激光共聚焦显微镜观察显示,核定位信号肽可以在60min内携带12kb的质粒DNA进入细胞核.转染后48h,流式细胞仪检测GFP表达,结果显示转染率提高了4～5倍.聚乙烯亚胺是一种毒性小,而且价格低廉的高分子转染试剂,广泛被应用于体内基因治疗的研究中,上述研究将会促进核糖体区打靶载体在临床基因治疗中的应用.

关键词：核定位信号肽核糖体区打靶载体转染效率原代皮肤成纤维细胞基因治疗聚乙烯亚胺

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