检索结果-内蒙古大学图书馆

华东师范大学学报（自然科学版） 2012年第3期 154-160,170页

作者：王琳张双董素珍华东师范大学脑功能基因组学教育部重点实验室上海市脑功能基因组学重点实验室上海200062

大鼠已公布的microRNA(miRNA)数量明显少于小鼠及人miRNA的数量.本文采用同源搜索的计算方法预测大鼠新的miRNA.从miRBase数据库中下载已知动物的pre-miRNAs,在UCSC数据库中对大鼠的全基因组序列进行了Blat分析,并根据miRNAs的筛选标准... 详细信息

大鼠已公布的microRNA(miRNA)数量明显少于小鼠及人miRNA的数量.本文采用同源搜索的计算方法预测大鼠新的miRNA.从miRBase数据库中下载已知动物的pre-miRNAs,在UCSC数据库中对大鼠的全基因组序列进行了Blat分析,并根据miRNAs的筛选标准,获得45条新的大鼠miRNAs;随后随机选取其中的9条新miRNAs进行RT-PCR实验验证,发现大部分miRNAs在脑、心、肺、肾、肌肉、脾、睾丸和肝8种组织中均有表达.在此基础上,对预测的新miRNAs进行了miRNA成簇分析和miRNA基因家族分析.

关键词： miRNA 大鼠生物信息学同源性搜索

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α-N-乙酰半乳糖胺酶的表达及活性检测

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华东师范大学学报（自然科学版） 2012年第4期 67-74页

作者：林毅刚夏钢华东师范大学脑功能基因组学教育部重点实验室、上海市脑功能基因组学重点实验室上海200062

为了建立新型α-N-乙酰半乳糖胺酶的筛选、检测方法,实验中提取脑膜金黄杆菌的基因组DNA,以此为模板PCR扩增出α-N-乙酰半乳糖胺酶(A4).将A4克隆至pET-24a载体,转化Bl21表达菌株进行蛋白表达.使用亲和层析方法纯化His-A4酶,选择显色底... 详细信息

为了建立新型α-N-乙酰半乳糖胺酶的筛选、检测方法,实验中提取脑膜金黄杆菌的基因组DNA,以此为模板PCR扩增出α-N-乙酰半乳糖胺酶(A4).将A4克隆至pET-24a载体,转化Bl21表达菌株进行蛋白表达.使用亲和层析方法纯化His-A4酶,选择显色底物验证酶活性.同时,改进了传统的ELISA方法,直接将红细胞膜包被于ELISA检测平板中,以红细胞膜表面抗原作为直接底物,用ELISA方法检测酶活性.此研究建立了新型ELISA实验方法,以此方法验证了A4酶的活性,证明了此酶能够有效降低红细胞表面抗原抗体反应,且具有浓度和时间依赖性.

关键词： α-N-乙酰半乳糖胺酶重组蛋白蛋白纯化 ELISA方法

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早老素PS1/PS2双敲除小鼠中klotho表达的下降和血磷的升高(英文)

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华东师范大学学报（自然科学版） 2013年第2期 75-83,91页

作者：王栋翟文珠苏静静孟博赵政胡金锋华东师范大学脑功能基因组学教育部重点实验室、上海市脑功能基因组学重点实验室上海200062

为了探讨抗衰老基因klotho是否参与早老素presenilin 1/presenilin 2条件性双敲除(PS cDKO)小鼠的衰老症状,分析了PS cDKO小鼠中肾脏和大脑中klotho的表达.结果发现,与同龄正常对照小鼠相比,12月龄雌性PS cDKO小鼠中肾脏klotho表达明显... 详细信息

为了探讨抗衰老基因klotho是否参与早老素presenilin 1/presenilin 2条件性双敲除(PS cDKO)小鼠的衰老症状,分析了PS cDKO小鼠中肾脏和大脑中klotho的表达.结果发现,与同龄正常对照小鼠相比,12月龄雌性PS cDKO小鼠中肾脏klotho表达明显下降,血磷水平明显升高,而血钙略微下调,但同时几乎没有观察到肾功能障碍;而在大脑中,早在3月龄时klotho水平就已发生下降.这些结果说明klotho可能与PScDKO小鼠的症状有关,其表达水平的下降可能导致了血磷浓度的上升,但不足以引发肾功能障碍.此外,klotho作为一个抗氧化和抗炎症的因子,其表达下降可能与PScDKO小鼠体内氧化压力和炎症反应的升高有关.

关键词： klotho PS cDKO小鼠磷钙衰老

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多通道在体记录技术--动作电位与场电位信号处理

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生理学报 2014年第3期66卷 349-357页

作者：徐佳敏王策群林龙年华东师范大学脑功能基因组学教育部、上海市重点实验室上海200062

多通道在体记录可以同时记录到多个神经元的胞外放电信号以及对应的局部场电位的活动信号。如何对记录到的这两种电信号进行合适的处理，以确保实验结果的准确性，是运用好多通道在体记录技术的关键之一。本文旨在针对多通道在体记录的... 详细信息

多通道在体记录可以同时记录到多个神经元的胞外放电信号以及对应的局部场电位的活动信号。如何对记录到的这两种电信号进行合适的处理，以确保实验结果的准确性，是运用好多通道在体记录技术的关键之一。本文旨在针对多通道在体记录的原始数据，介绍动作电位及场电位信号的常用数据处理方法。动作电位信号属于高频信号，一般用40 kHz的高速采样频率进行采集和记录。根据记录到的神经元胞外动作电位波形，运用主成分分析技术，再结合四电极记录技术的优势，可对来自记录电极周围不同空间位置的神经元放电信号进行良好的甄别，从而获得较精确的单神经元放电时间序列。而局部场电位信号属低频信号（〈 300 Hz），一般用1 kHz的采样频率进行采集和记录。记录到的场电位原始信号需要进行数字滤波，从而分离出场电位信号中不同频率段的节律性振荡。啮齿类动物海马结构中常见的节律性振荡有动物清醒活动及快速眼动睡眠时的 theta节律（4-12 Hz）；清醒认知活动过程中，伴随着theta节律一起出现的gamma节律（30-80 Hz）；以及清醒静止及慢波睡眠时的ripple高频振荡（100-250 Hz）。针对以上处理获得的数据，常用的后续数据分析方法有：神经元放电间隔分析、神经元放电自相关与互相关分析、以及信号的频谱分析等。

关键词：多通道在体记录动作电位场电位主成分分析

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建立利用萤光素酶快速检测细胞活性的方法

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华东师范大学学报（自然科学版） 2012年第5期 45-53,84页

作者：祝静静鲍秋颖王宇萌夏钢华东师范大学脑功能基因组学教育部重点实验室、上海市脑功能基因组学重点实验室上海200062

运用PCR的方法,从萤火虫萤光素酶基因载体pGL4.26扩增萤火虫萤光素酶基因片段,将其插入连接于原核表达载体pET24a中,构建重组表达载体pET24a-Luc.经酶切鉴定及序列分析后,将重组载体转化到表达菌株大肠杆菌BL21(DE3)中,获得阳性重组菌BL... 详细信息

运用PCR的方法,从萤火虫萤光素酶基因载体pGL4.26扩增萤火虫萤光素酶基因片段,将其插入连接于原核表达载体pET24a中,构建重组表达载体pET24a-Luc.经酶切鉴定及序列分析后,将重组载体转化到表达菌株大肠杆菌BL21(DE3)中,获得阳性重组菌BL21/***诱导蛋白高效表达并通过镍柱亲和层析纯化萤火虫萤光素酶.该目的蛋白活性用Bright-Glo^(TM)试剂进行验证并用于建立一种基于测量ATP含量的检测细胞生物活性的方法.与传统的细胞生物活性检测试剂盒MTT,CCK-8以及Alamar Blue比较,该方法具有反应迅速、活力高、灵敏度好、生产方便的优点,具有实际应用的潜力.

关键词：萤火虫萤光素酶蛋白表达蛋白纯化细胞活性

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βCaMKII过量表达损害小鼠海马齿状回区长时程抑制

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华东师范大学学报（自然科学版） 2012年第1期 54-62页

作者：徐浩王勃段燕红曹晓华华东师范大学脑功能基因组学教育部重点实验室上海市脑功能基因组学重点实验室上海200062

采用海马齿状回(dentate gyrus,DG)区域特异性过量表达βCaMKII的蛋白修饰转基因小鼠,通过离体电生理技术,研究了βCaMKII高表达对该区域突触可塑性的影响.与对照组相比,转基因小鼠海马齿状回双脉冲抑制反应(paired-pulse depression,P... 详细信息

采用海马齿状回(dentate gyrus,DG)区域特异性过量表达βCaMKII的蛋白修饰转基因小鼠,通过离体电生理技术,研究了βCaMKII高表达对该区域突触可塑性的影响.与对照组相比,转基因小鼠海马齿状回双脉冲抑制反应(paired-pulse depression,PPD)和颗粒细胞的电压—电流曲线(voltage-current curve)没有发生变化,而该区域的长时程抑制(long-term depression,LTD)明显被减弱.实验结果提示,βCaMKII的过量表达不影响小鼠海马齿状回区的突触前递质释放能力和颗粒细胞的被动属性,但损害其长时程抑制.这为进一步研究βCaMKII在学习记忆和突触可塑性中的作用提供了电生理学依据.

关键词： β钙离子/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ 海马齿状回长时程抑制

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多通道在体记录技术----小鼠可推进式微电极阵列帽制作与植入手术

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生理学报 2013年第6期65卷 637-646页

作者：马晓宇张艺瑶王丽娜林龙年华东师范大学脑功能基因组学教育部、上海市重点实验室上海200062

本文旨在探讨适合小鼠在体记录的多通道可推进式微电极阵列帽的制作和电极植入手术。利用转动螺杆驱动螺母移动的机械推进原理,用纤维板、螺杆、螺母和固定螺丝等材料,组装成可推进式多通道电极驱动装置。在该装置上,螺杆转动一圈可使... 详细信息

本文旨在探讨适合小鼠在体记录的多通道可推进式微电极阵列帽的制作和电极植入手术。利用转动螺杆驱动螺母移动的机械推进原理,用纤维板、螺杆、螺母和固定螺丝等材料,组装成可推进式多通道电极驱动装置。在该装置上,螺杆转动一圈可使其上的螺母移动280μm,从而使固定于其上的电极也同步推进。记录电极为自制的四电极,由四股直径为13μm的绝缘电极丝绞合而成。电极帽制作的主要步骤包括:四电极制作、电极驱动器制作、电极帽装配和电极镀金等步骤。制作好的多通道电极帽重量轻,电极数量可根据实验需要设置,且可随时调整电极在脑内的深浅位置,适合在小鼠等动物上开展多通道在体记录。此外,本文还详细介绍了在小鼠双侧海马进行多通道在体记录的电极植入手术过程。使用这种多通道电极帽,可在自由活动的小鼠双侧海马CA1脑区,同时记录到群体神经元的放电活动。

关键词：多通道在体记录四电极小鼠海马

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HPLC-ESI-MS法测定大鼠脑组织中神经递质L/D-丝氨酸的含量

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华东师范大学学报（自然科学版） 2013年第6期 165-170页

作者：王伟莉段雅乐刘莎张耀赵政华东师范大学脑功能基因组学教育部重点实验室上海市脑功能基因组学重点实验室药理毒理研究室上海200062

建立一种检测大鼠脑组织中L-丝氨酸和D-丝氨酸的高效液相色谱—电喷雾离子化—质谱联用技术（HPLC-ESI-MS）的测定方法.大鼠脑组织样品匀浆及离心后,取上清液并加入Marfey试剂对样品中L/D-丝氨酸进行衍生化.HPLC流动相为甲酸铵和乙腈,... 详细信息

建立一种检测大鼠脑组织中L-丝氨酸和D-丝氨酸的高效液相色谱—电喷雾离子化—质谱联用技术（HPLC-ESI-MS）的测定方法.大鼠脑组织样品匀浆及离心后,取上清液并加入Marfey试剂对样品中L/D-丝氨酸进行衍生化.HPLC流动相为甲酸铵和乙腈,梯度洗脱;质谱采用电喷雾离子源,在负离子模式下进行定性定量分析.结果显示,L-丝氨酸和D-丝氨酸在22 min内得以分离,在2.5～500 ng/mg和1.2～250 ng/mg浓度范围内分别与各自的色谱峰面积呈良好线性关系;L/D-丝氨酸的最低定量限分别为2.5 ng/mg和1.2 ng/mg,方法回收率均在81％～89％％范围内.本法具有省时快速,灵敏度和选择性高等优点.将此法运用于成年和老年大鼠海马及皮层中L-丝氨酸和D-丝氨酸含量测定,结果表明,与成年鼠相比,老年鼠海马和皮层中L-丝氨酸的含量基本不变,而D-丝氨酸含量则明显减少,提示D-丝氨酸的变化与正常的衰老过程密切相关.

关键词：高效液相色谱—电喷雾离子化—质谱脑组织神经递质 D-丝氨酸 L-丝氨酸

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新型姜黄素结构衍生物抗肝癌细胞增殖作用的研究

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华东师范大学学报（自然科学版） 2012年第3期 161-170页

作者：李于博文英马明亮吴良春文珂赵政华东师范大学脑功能基因组学教育部重点实验室上海市脑功能基因组学重点实验室药理毒理研究室上海200062 华东师范大学脑功能基因组学教育部重点实验室上海市脑功能基因组学重点实验室超分子化学与药物化学研究室上海200062

采用MTT法对姜黄素结构衍生物(CCM系列化合物)进行抗人肝癌细胞Bel-7402和SMMC-7721活性筛选;利用流式细胞技术和荧光显微镜检测SMMC-7721细胞凋亡及周期分布;采用Western-Blot方法检测SMMC-7721中蛋白caspase-3和剪切后p17的表达.结果... 详细信息

采用MTT法对姜黄素结构衍生物(CCM系列化合物)进行抗人肝癌细胞Bel-7402和SMMC-7721活性筛选;利用流式细胞技术和荧光显微镜检测SMMC-7721细胞凋亡及周期分布;采用Western-Blot方法检测SMMC-7721中蛋白caspase-3和剪切后p17的表达.结果表明,化合物CCM-5和CCM-14抗肿瘤活性较好,其对SMMC-7721细胞的凋亡作用呈剂量依赖性,且凋亡率与阴性对照组相比有显著差异(P<0.01);化合物浓度增高时,G0/G1期细胞减少,S期以及G2/M期细胞增加,凋亡峰SubG1峰增大;两个化合物均可增强caspase-3的表达,随着浓度的提高,caspase-3的表达趋势减弱,而剪切形式p17亚基表达量逐渐提高.因此,姜黄素结构衍生物CCM-5和CCM-14能抑制人肝癌细胞SMMC-7721细胞的增殖,促进凋亡,其作用机制可能与化合物诱导caspase-3活性的增强有关.

关键词：姜黄素结构衍生物 Bel-7402细胞 SMMC-7721细胞细胞凋亡细胞周期 Caspase-3

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姜黄素对老年鼠脑内氧化性平衡和星形胶质细胞的影响

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华东师范大学学报（自然科学版） 2015年第6期 108-116页

作者：张盼俞彬刘莎段雅乐赵政华东师范大学脑功能基因组学教育部重点实验室上海市脑功能基因组学重点实验室神经药理研究室上海200062

以SD大鼠为动物模型,采用Western blotting、酶活性测定、免疫荧光和高效液相色谱-质谱(LC-MS)方法考察姜黄素处理12周后正常衰老大鼠皮层和海马的氧化性平衡和星形胶质细胞形态功能的变化.结果显示,姜黄素降低了老年鼠脑内氧化产物MDA... 详细信息

以SD大鼠为动物模型,采用Western blotting、酶活性测定、免疫荧光和高效液相色谱-质谱(LC-MS)方法考察姜黄素处理12周后正常衰老大鼠皮层和海马的氧化性平衡和星形胶质细胞形态功能的变化.结果显示,姜黄素降低了老年鼠脑内氧化产物MDA和8-OHdG的含量,提升了γ-谷氨酰胺半胱氨酸合成酶(GCS)的活性并且促进GSH的产生,提示姜黄素可显著改善伴随正常衰老过程的脑内氧化性平衡;同时姜黄素可以抑制胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的过度表达,提升GS活性,增加GDNF水平和D-丝氨酸含量,表明其抑制星形胶质细胞过度活化的同时也改善了星形胶质细胞的功能.

关键词：姜黄素衰老氧化应激星形胶质细胞

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