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2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会

作者：苏二正尤鹏永魏东芝南京林业大学轻工科学与工程学院酶与发酵工程实验室华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室鲁华生物技术研究所

＜正＞目前,文献报道的脂肪酶大多数来源于微生物和动物组织,植物源脂肪酶的报道较少。但是,植物源脂肪酶往往具有独特的性质,与微生物源脂肪酶相比,植物源脂肪酶在非水介质中稳定性较

关键词：

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利用抗性互补策略直接克隆染色体上大片段DNA

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生物技术通讯 2015年第4期26卷 565-569页

作者：杨艳朱莹朱美勤韦炎龙倪孟祥方宏清中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 军事医学科学院生物工程研究所北京100071 华东理工大学生物反应器国家重点实验室上海200237

目的:利用抗性互补策略提高Red重组介导的体内直接克隆效率。方法:将抗性基因(如cat)拆分为互补的两部分Cma、Cmb(部分与Cma同源),这两部分单独均不具有抗性,仅当融合在一起时才有抗性。首先将Cmb定向整合到染色体上拟克隆区域的一侧,... 详细信息

目的:利用抗性互补策略提高Red重组介导的体内直接克隆效率。方法:将抗性基因(如cat)拆分为互补的两部分Cma、Cmb(部分与Cma同源),这两部分单独均不具有抗性,仅当融合在一起时才有抗性。首先将Cmb定向整合到染色体上拟克隆区域的一侧,然后将含有Cma的线性质粒载体电转到细胞内进行定向克隆。结果:使用该方法,我们成功地将大肠杆菌DH1基因组上约48 kb的大片段DNA克隆到质粒载体上。结论:该方法可用于大片段DNA的功能研究。

关键词： Red同源重组抗性互补直接克隆

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响应面法优化橡胶种子中植酸的提取工艺

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中国食品学报 2014年第9期14卷 75-81页

作者：赵黎明李铭王耀松漆义赵鹤飞朱松生物反应器工程国家重点实验室发酵工业分离提取技术研发中心华东理工大学上海200237 三亚航空旅游职业学院海南三亚572000 江南大学食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122

为掌握从海南橡胶种子中提取植酸的工艺以及利用离子交换进行纯化植酸,研究了各提取因素对植酸提取率的影响。采用Box-Behnken中心组合试验设计及响应面分析研究橡胶种子中植酸的提取方法,用SAS7.0软件对植酸提取率的二次回归模型进行... 详细信息

为掌握从海南橡胶种子中提取植酸的工艺以及利用离子交换进行纯化植酸,研究了各提取因素对植酸提取率的影响。采用Box-Behnken中心组合试验设计及响应面分析研究橡胶种子中植酸的提取方法,用SAS7.0软件对植酸提取率的二次回归模型进行分析。结果表明:海南橡胶种子植酸提取的最佳工艺参数:温度50℃、时间4.8 h、pH 5.5、液料比22∶1。在此最优条件下植酸的提取率为70.1%。由响应面法优化出的植酸提取工艺具有工业化应用价值。

关键词：橡胶种子植酸提取响应面法

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分子印记聚合物SERS基底的制备及雌二醇的检测

分子印记聚合物SERS基底的制备及雌二醇的检测

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第十八届全国分子光谱学学术会议

作者：曹玥李大伟龙亿涛华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

分子印迹聚合物与嵌入式金纳米粒子形成了表面增强拉曼散射（SERS）的基底用于高选择性检测β-雌二醇（β-E）。首先,合成雌二醇分子聚合物（E-MIP）,然后使用通过溶胶凝胶过程来制造分子印迹聚合物（MIP）层上的Au纳米粒子,得到雌二醇... 详细信息

分子印迹聚合物与嵌入式金纳米粒子形成了表面增强拉曼散射（SERS）的基底用于高选择性检测β-雌二醇（β-E）。首先,合成雌二醇分子聚合物（E-MIP）,然后使用通过溶胶凝胶过程来制造分子印迹聚合物（MIP）层上的Au纳米粒子,得到雌二醇分子聚合物SERS基底（E-MIP@Au）,再通过一个简单的热处理移除,产生的印记移除的材料,雌二醇分子印记聚合物SERS基底（E-ir-MIP@Au）,与所需的识别位点,可以有选择地重新绑定β-E分子。分子印迹聚合物Au纳米粒子的形态和聚合物特性的通过扫描电子显微镜进行了表征。重新绑定动力学研究表明,分子印迹聚合物嵌入金纳米粒子可以在10 min内拥有其他材料的优势,达到雌二醇的吸附平衡的。此外,利用了表面增强拉曼光谱的技术对雌二醇进行检测。待测物浓度在0.5～91.2 mg·L的范围内与SERS强度成正比,检测限低至0.2 mg·L。当应用于表面增强拉曼光谱检测,所产生的分子印迹聚合物作用于金纳米粒子（E-ir-MIP@Au）可以识别β-E和防止干扰的结构类似物。这些结果表明,该算法显示在实际样品中快速,灵敏和选择性检测β-E的显著潜在效用。

关键词： SERS 分子印迹聚合物雌二醇金纳米粒子

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短小芽孢杆菌脂肪酶基因的克隆、表达及酶学性质研究

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生物技术通报 2014年第4期30卷 132-138页

作者：苏二正吴向萍高蓓魏东芝南京林业大学轻工科学与工程学院酶与发酵工程实验室南京210037 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室鲁华生物技术研究所上海200237

从土壤样品中通过筛菌过程获得一株产脂肪酶的菌株,经16S rRNA鉴定属于短小芽孢杆菌,根据已报道的来源于芽孢杆菌的脂肪酶基因设计引物,克隆获得其全长基因,命名为lipS6,大小为648 bp,编码215个氨基酸,经比对其与已报道的脂肪酶基因B26... 详细信息

从土壤样品中通过筛菌过程获得一株产脂肪酶的菌株,经16S rRNA鉴定属于短小芽孢杆菌,根据已报道的来源于芽孢杆菌的脂肪酶基因设计引物,克隆获得其全长基因,命名为lipS6,大小为648 bp,编码215个氨基酸,经比对其与已报道的脂肪酶基因B26有96%的同源性。构建重组表达质粒pET32a-lipS6,在大肠杆菌中实现了可溶表达,酶活达到2 000 U/mL。重组脂肪酶LipS6的最适温度为30℃,最适pH为9,低浓度的Ca2+与Mn2+对其有很明显的激活作用,疏水性有机溶剂对其毒害作用小,在正己烷体系中可以催化酯化反应,最适酯化底物酸为十四酸,底物醇为正丁醇。

关键词：脂肪酶短小芽孢杆菌基因克隆重组表达性质

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复合式教学体系助力《生物医用材料》课程教改

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计算机工程与科学 2014年第A01期36卷 169-173页

作者：屈雪刘昌胜屈朝霞郭阳华东理工大学超细材料教育部重点实验室上海200237 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 镇江高等专科学校卫生护理学院江苏镇江212002 国防科学技术大学计算机学院湖南长沙410073

在分析了《生物医用材料》课程的特点和教学改革难点的基础上,借鉴复合式教学体系探讨了如何提高课堂教学质量、培养综合能力、培育适合社会发展需要的复合型人才。从教学时空复合、教学与科研复合、教学主体复合和多种教学理念复合四... 详细信息

在分析了《生物医用材料》课程的特点和教学改革难点的基础上,借鉴复合式教学体系探讨了如何提高课堂教学质量、培养综合能力、培育适合社会发展需要的复合型人才。从教学时空复合、教学与科研复合、教学主体复合和多种教学理念复合四个方面,详细阐述了运用视频课程、前沿讲座、科研实践、企业/医院观摩等多元化教学手段,助力《生物医用材料》教改目标的实现。

关键词：生物医用材料教学改革复合式教学视频公开课

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重组小肿瘤坏死因子α拮抗剂的表达、纯化及其生物学活性

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中国生物制品学杂志 2013年第9期26卷 1214-1217页

作者：张明义黄岚李泽锋郭美锦周华无锡麦涛岚华生物技术有限公司江苏无锡214174 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

目的表达能够与肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1)结合的低相对分子质量重组小肿瘤坏死因子α拮抗剂(small TNFαantagonist,STNFαA),并对纯化后蛋白的生物学活性进行检测。方法利用计算机模拟优化设计出与TN... 详细信息

目的表达能够与肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1)结合的低相对分子质量重组小肿瘤坏死因子α拮抗剂(small TNFαantagonist,STNFαA),并对纯化后蛋白的生物学活性进行检测。方法利用计算机模拟优化设计出与TNFR1具有较高结合力的STNFαA氨基酸序列,根据大肠埃希菌"密码偏爱性"设计合成目的基因,插入质粒pET-28a(+)中,构建原核表达质粒pET28-STNFαA,转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定后,采用Ni Sepharose 6 Fast Flow层析介质进行亲和纯化,纯化产物经SDSPAGE、HPLC分析;采用MTT法检测重组蛋白的生物学活性。结果重组表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;重组蛋白STNFαA相对分子质量约17 000,表达量约占菌体总蛋白的25%,以包涵体形式存在,纯度大于95%;重组蛋白STNFαA对TNFα的抑制作用呈浓度依赖性。结论已成功表达了STNFαA,该蛋白具有抑制TNFα介导的细胞毒生物活性作用,为全新的TNF拮抗剂的新药研究奠定了基础。

关键词：小肿瘤坏死因子α拮抗剂基因表达纯化活性

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响应面法优化阿维菌素B_(1a)生产菌株复合发酵培养基

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中国医药工业杂志 2013年第10期44卷 986-988,1004页

作者：梁剑光储消和储炬王永红常熟理工学院生物与食品工程学院江苏常熟215500 华东理工大学生物反应器国家重点实验室国家生化工程研究中心上海200237 浙江升华拜克生物股份有限公司浙江湖州313220

以棉籽饼粉替代酵母粉,采用响应面法优化阿维链霉菌Streptomyces avermitilis生产菌株的工业复合发酵培养基。首先采用Plackett-Burman设计筛选出玉米淀粉、棉籽饼粉和豆粕粉3个重要影响因子,并利用响应面中心组合设计进一步优化,得阿... 详细信息

以棉籽饼粉替代酵母粉,采用响应面法优化阿维链霉菌Streptomyces avermitilis生产菌株的工业复合发酵培养基。首先采用Plackett-Burman设计筛选出玉米淀粉、棉籽饼粉和豆粕粉3个重要影响因子,并利用响应面中心组合设计进一步优化,得阿维菌素B1a复合发酵培养基的最佳配方:玉米淀粉14.22%,棉籽饼粉1.19%,豆粕粉2.67%,钼酸钠0.002 2%,氯化钴0.02%,硫酸锰0.000 2%,硫酸铵0.05%。在上述条件下,阿维菌素B1a摇瓶发酵效价为5 235 IU/ml,比优化前(4 580 IU/ml)提高了14.3%。

关键词：阿维菌素 Plackett-Burman设计中心组合设计响应面法阿维链霉菌发酵

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原生质体紫外诱变高通量选育盐霉素高产菌

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中国医药工业杂志 2013年第6期44卷 560-564页

作者：贾永峰梁剑光王永红郝玉有储炬华东理工大学生物反应器国家重点实验室国家生化工程技术研究中心上海200237 常熟理工学院生物与食品工程学院江苏常熟215500 浙江升华拜克生物股份有限公司浙江湖州313220

以白色链霉菌(Streptomyces albus)S-610为出发菌株,利用溶菌酶水解菌丝体细胞壁获得原生质体,然后进行紫外诱变,并通过高通量筛选再生突变株。结果显示,当UV照射原生质体20 s时,细胞正突变率最大为24.5%,此时致死率为86.4%。经高通量... 详细信息

以白色链霉菌(Streptomyces albus)S-610为出发菌株,利用溶菌酶水解菌丝体细胞壁获得原生质体,然后进行紫外诱变,并通过高通量筛选再生突变株。结果显示,当UV照射原生质体20 s时,细胞正突变率最大为24.5%,此时致死率为86.4%。经高通量筛选和摇瓶验证,最终筛得3株遗传稳定的高产菌S-612、S-620和S-622,产盐霉素能力较出发菌株S-610分别提高了57.6%、45.5%和69.7%。

关键词：盐霉素白色链霉菌原生质体技术高通量筛选

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生物信息学和计算生物学在食品降血压肽研究中的应用

生物信息学和计算生物学在食品降血压肽研究中的应用

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科技与产业对接——中国食品科学技术学会第十届年会暨第七届中美食品业高层论坛

作者：李鹏刘雅兰郭明荣吴燕玲方明谢静莉魏东芝华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室生物工程学院食品科学与工程系

目的:包括降血压肽在内的食物活性成分研究工作,大多通过实验手段获取单一成分、检测活性、鉴定结构,不仅工作量大、耗时耗力,而且由于水解不完全和纯化中的损失等导致缺乏系统性。对这种传统研究路线的突破,可以借鉴生物信息学和计算... 详细信息

目的:包括降血压肽在内的食物活性成分研究工作,大多通过实验手段获取单一成分、检测活性、鉴定结构,不仅工作量大、耗时耗力,而且由于水解不完全和纯化中的损失等导致缺乏系统性。对这种传统研究路线的突破,可以借鉴生物信息学和计算生物学在序列信息分析、药物设计以及分子模拟等方面应用的经验,缩短获得全面而系统的降血压肽结构和活性信息的研究周期,实现从分子水平揭示降血压肽的构效关系。方法:在线蛋白质序列信息获取,双向电泳-质谱获取蛋白质序列信息;在线虚拟水解构建多肽库;软件预测来自坚果和可口单囊星虫降血压肽的活性以及构效关系。结果:在分别对植物和动物来源的蛋白质进行研究表明,生物信息学和计算生物学可以高效地辅助对食品中降血压肽在活性预测和构效关系解析等方面的研究。此外,还可以应用于对已知序列的降血压肽结构进行优化和改造,获得高活性、消化道稳定的降血压肽。讨论:通过实验和计算的结合,对食品的降血压活性机理从生化分析和理论两个层面进行充分揭示,为一些功能食品民间流传的功能提供科学的依据。尝试探索将药物研究的思想和手段用于认知食品活性组分的构效关系,这一研究方法与思路,可推广应用于其它功能食品的研究。

关键词：生物信息学计算生物学食品降血压肽应用

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