检索结果-内蒙古大学图书馆

华东理工大学学报（自然科学版） 2007年第3期33卷 330-335页

作者：邱伙琴徐国谦庄英萍储炬张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心(上海) 上海200237

研究了拟干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)发酵生产乳酸过程中,添加维生素对菌体生长、细胞活性、产酸,以及在碳流代谢中与乳酸生物合成密切相关的4种酶[乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸脱氢酶(PDC)和丙酮酸羧化酶(PC)... 详细信息

研究了拟干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)发酵生产乳酸过程中,添加维生素对菌体生长、细胞活性、产酸,以及在碳流代谢中与乳酸生物合成密切相关的4种酶[乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸脱氢酶(PDC)和丙酮酸羧化酶(PC)]活性的影响。结果显示:维生素添加促进了菌体生长,使乳酸产量提高了42.47%;同时降低了发酵过程中菌体的死亡率,降低的最大幅度可达53.46%;PFK和LDH的活性比对照有提高,最大幅度达62.30%和126.65%,PDC的活性在发酵中期也有一定的提高,但PC的活性变化很小。实验结果表明:组合维生素的添加可以提高乳酸菌的活性,同时使代谢通量有利于乳酸生成。

关键词： L.paracasei L-乳酸维生素酶活性

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不同拷贝数及间隔肽序列对毕赤酵母分泌表达EXA的影响

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华东理工大学学报（自然科学版） 2008年第1期34卷 40-46页

作者：王晖钱江潮庄英萍储炬张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心(上海)上海200237

通过多拷贝串联表达，以及在分泌信号序列和目的蛋白N端之间插入几个氨基酸的间隔短肽，以提高exendin-4类似物串联体EXA在重组毕赤酵母中的分泌表达水平。实验结果表明：2～5个EXA串联插入均比单个EXA插入有利于提高表达水平，而4拷贝... 详细信息

通过多拷贝串联表达，以及在分泌信号序列和目的蛋白N端之间插入几个氨基酸的间隔短肽，以提高exendin-4类似物串联体EXA在重组毕赤酵母中的分泌表达水平。实验结果表明：2～5个EXA串联插入均比单个EXA插入有利于提高表达水平，而4拷贝EXA串联体的表达产物较多滞留在胞内。在EXA的N端增加间隔肽可促进蛋白分泌，与不合间隔肽序列的4拷贝EXA串联表达载体相比，含有糖基化住点（NTTEEGEPK）和肠激酶识别位点（DDDDK）间隔肽的插入，使蛋白表达水平分别提高了4倍和9倍。

关键词：间隔肽 exendin-4类似物多拷贝串联毕赤酵母分泌表达

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粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的分离纯化及酶学性质

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华东理工大学学报（自然科学版） 2008年第2期34卷 178-183,188页

作者：李震储炬庄英萍张嗣良袁中一华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心上海200237

采用DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Butyl-Sepharose CL 4B疏水层析，从重组大肠杆菌DH5α菌体中分离纯化得到粪产碱杆菌青霉素G酰化酶（AfPGA）。经纯化，AfPGA纯度较粗酶提高50．6倍、比活达到212．7U／mg，经HPLC测定纯度为92．8％... 详细信息

采用DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Butyl-Sepharose CL 4B疏水层析，从重组大肠杆菌DH5α菌体中分离纯化得到粪产碱杆菌青霉素G酰化酶（AfPGA）。经纯化，AfPGA纯度较粗酶提高50．6倍、比活达到212．7U／mg，经HPLC测定纯度为92．8％，收率为78％。理化性质分析表明：AfPGA含有2个亚基（α亚基和β亚基，其Mw分别为2．90×10^4和5．92×10^4；AfPGA等电点约为7．9～8．0，最适pH约为10．0，并在pH〉7．0时表现出了稳定的催化活力。

关键词：粪产碱杆菌青霉素G酰化酶阴离子交换层析疏水层析分离纯化

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流式细胞仪检测重组毕赤酵母发酵过程中的细胞活性

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华东理工大学学报（自然科学版） 2006年第9期32卷 1046-1049页

作者：方曙光黄立储炬庄英萍张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心上海200237

建立了流式细胞仪检测重组巴斯德毕赤酵母(P.p astoris)细胞活性的方法,并在高密度发酵过程中得到应用。使用碘化丙锭染色法测定细胞活性,发现甲醇诱导时酵母细胞活性开始下降,随着细胞密度的增加,由于细胞胁迫和甲醇的影响,细胞活性明... 详细信息

建立了流式细胞仪检测重组巴斯德毕赤酵母(P.p astoris)细胞活性的方法,并在高密度发酵过程中得到应用。使用碘化丙锭染色法测定细胞活性,发现甲醇诱导时酵母细胞活性开始下降,随着细胞密度的增加,由于细胞胁迫和甲醇的影响,细胞活性明显下降,活细胞率最大下降了14%。与此同时,细胞生长减缓,目的蛋白发生降解,表明细胞活性与发酵过程中细胞的生长和目的蛋白生成等参数密切相关。实验证明:流式细胞仪可作为检测毕赤酵母发酵过程中细胞活性参数的一个便捷精确的有力工具。

关键词：流式细胞仪毕赤酵母活细胞率高密度发酵

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金色链霉菌培养条件优化研究

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华东理工大学学报（自然科学版） 2004年第1期30卷 43-46页

作者：扶教龙张明樊涛储炬张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心上海200237

金色链霉菌摇瓶培养适宜的接种量为3.2%、接种时间为25h、温度在28°C左右。4g/L的硫酸铵和0.043g/L无机磷有利于产物金霉素(CTC)合成。酵母膏的加入对CTC的合成有一定促进作用,以3g/L的效果较好。在50L发酵罐中,较低浓度的无机磷对... 详细信息

金色链霉菌摇瓶培养适宜的接种量为3.2%、接种时间为25h、温度在28°C左右。4g/L的硫酸铵和0.043g/L无机磷有利于产物金霉素(CTC)合成。酵母膏的加入对CTC的合成有一定促进作用,以3g/L的效果较好。在50L发酵罐中,较低浓度的无机磷对CTC发酵有利;酵母膏的加入量以4.2g/L最佳,产物效价比酵母膏加入量为2.8g/L和5.6g/L时高3.1%和9.7%,优化发酵过程的CTC产率提高了18%。

关键词：金色链霉菌金霉素发酵优化培养条件

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重组Pichia酵母(Mut^S)发酵过渡阶段关键酶活分析

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华东理工大学学报（自然科学版） 2004年第4期30卷 392-397页

作者：胡光星郭美锦储炬杭海峰庄英萍张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心上海上海200237

重组Pichia酵母表达系统的发酵存在从利用甘油为碳源生长到利用甲醇为碳源表达外源蛋白的发酵表达过渡阶段。Pichia酵母过渡阶段碳源代谢途径关键酶酶活分析表明:甲醇诱导3hAOX2酶活为0,4h时突然增加到0.05U,继续诱导,酶活缓慢增加;在... 详细信息

重组Pichia酵母表达系统的发酵存在从利用甘油为碳源生长到利用甲醇为碳源表达外源蛋白的发酵表达过渡阶段。Pichia酵母过渡阶段碳源代谢途径关键酶酶活分析表明:甲醇诱导3hAOX2酶活为0,4h时突然增加到0.05U,继续诱导,酶活缓慢增加;在过渡阶段甲醛脱氢酶和6-P-葡萄糖脱氢酶分别增加了6.1倍、2.5倍,而丙酮酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶分别下降为原酶活的29.4%及16.4%,表明甲醇诱导后甲醇完全氧化代谢途径得到强化,而糖酵解途径和三羧酸循环途径代谢作用减弱。

关键词：重组巴氏毕赤酵母代谢途径过渡阶段植酸酶

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氨基酸对芽孢杆菌ATCC21616产腺苷的影响

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华东理工大学学报（自然科学版） 2007年第3期33卷 336-339页

作者：高淑红陈长华莫绯江元翔张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心(上海) 上海200237

研究了腺苷合成途径中不同前体氨基酸对芽孢杆菌ATCC21616产腺苷的影响。其中谷氨酸对腺苷合成的促进作用最大,能提高产苷30%以上。谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸也能促进腺苷合成,分别提高16%,14%,10%和6%。进一步研究添加谷氨... 详细信息

研究了腺苷合成途径中不同前体氨基酸对芽孢杆菌ATCC21616产腺苷的影响。其中谷氨酸对腺苷合成的促进作用最大,能提高产苷30%以上。谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸也能促进腺苷合成,分别提高16%,14%,10%和6%。进一步研究添加谷氨酸后发酵液中NH4+浓度、有机酸浓度和胞内NAD+浓度的变化,发现添加谷氨酸能提供稳定的NH4+供应,并提供重要的代谢中间物α-酮戊二酸。同时,发酵液中乙酸和丙酮酸的浓度比对照低,胞内NAD+浓度较高,糖酵解生成的丙酮酸能顺利地进入TCA循环,从而能为菌体和腺苷合成提供充足的能量和前体,促进腺苷的合成。

关键词：腺苷发酵芽孢杆菌氨基酸

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重组毕赤酵母表达reteplase发酵过程中的降解现象

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华东理工大学学报（自然科学版） 2006年第12期32卷 1413-1417页

作者：方曙光储炬黄立庄英萍张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心上海200237

研究了pH和温度对重组毕赤酵母表达retep lase(rPA)发酵过程中的降解现象。在低pH(4.5)诱导条件下,由于蛋白酶活性高,rPA降解严重,表达量几乎为0,提高诱导pH至6.5,蛋白酶活性降低,rPA的表达量最高达到122 m g/L。通过将诱导温度从30... 详细信息

研究了pH和温度对重组毕赤酵母表达retep lase(rPA)发酵过程中的降解现象。在低pH(4.5)诱导条件下,由于蛋白酶活性高,rPA降解严重,表达量几乎为0,提高诱导pH至6.5,蛋白酶活性降低,rPA的表达量最高达到122 m g/L。通过将诱导温度从30°C降低到20°C,rPA的表达量从153.2 m g/L提高到207.9 m g/L。降低温度能减少细胞死亡率,从而减少了发酵液中蛋白酶的释放,降低了蛋白酶的活性,抑制了对目的蛋白rPA的降解。另外,低温使胞内AOX酶活性提高,从而增强了rPA的表达。

关键词：毕赤酵母 reteplase 降解发酵

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用于生物反应器多尺度问题研究的数据采集系统

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华东理工大学学报（自然科学版） 2003年第3期29卷 259-263页

作者：张恂张伟平张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心上海200237

本文针对生物反应器中活体细胞大规模培养过程中多尺度问题 ,重点讨论了有关数据采集系统的研制 ,其中包括参数与传感器系统配置与要求 ,计算机软硬件配置与设计 ,以及过程数据远程通讯技术等。并根据以上原理设计制造了专门用于生物反... 详细信息

本文针对生物反应器中活体细胞大规模培养过程中多尺度问题 ,重点讨论了有关数据采集系统的研制 ,其中包括参数与传感器系统配置与要求 ,计算机软硬件配置与设计 ,以及过程数据远程通讯技术等。并根据以上原理设计制造了专门用于生物反应器中多尺度问题研究的实验室FUS-5 0 L(A)新概念发酵罐 ,并研制了中试与生产规模数据采集系统。本装置用于不同发酵产品的过程优化时 ,发现了一些过去以单尺度观点研究时容易忽略的问题。

关键词：生物反应器多尺度数据采集系统远程信息处理发酵过程

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添加异戊酸对必特螺旋霉素生物合成的影响

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华东理工大学学报（自然科学版） 2007年第6期33卷 779-783页

作者：习兵霞王永红黄明志储炬张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心(上海) 上海200237

为了进一步提高多组分必特螺旋霉素中异戊酰螺旋霉素Ⅲ和总异戊酰螺旋霉素的含量,本文通过外源添加浓度为0.5 g/L的异戊酸使异戊酰螺旋霉素Ⅲ和总异戊酰螺旋霉素的含量分别比对照提高了38.32%和31%。通过测定必特螺旋霉素发酵过程中糖... 详细信息

为了进一步提高多组分必特螺旋霉素中异戊酰螺旋霉素Ⅲ和总异戊酰螺旋霉素的含量,本文通过外源添加浓度为0.5 g/L的异戊酸使异戊酰螺旋霉素Ⅲ和总异戊酰螺旋霉素的含量分别比对照提高了38.32%和31%。通过测定必特螺旋霉素发酵过程中糖耗、有机酸、亮氨酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶、己糖激酶等中间代谢产物的相关数据,探讨了异戊酸调控必特螺旋霉素组分和效价的机理。

关键词：异戊酸必特螺旋霉素效价发酵

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