检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物传染病学报 2024年第3期32卷 79-87页

作者：潘珂张静莫心宇申邦方瑞胡敏赵俊龙周艳琴华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

本研究利用制备的GRA7单克隆抗体为基础建立猪弓形虫病的阻断ELISA方法。以rGRA7重组蛋白免疫小鼠,取脾细胞进行细胞融合,筛选出4株能够稳定产生单克隆抗体的阳性单克隆细胞株。经对此单克隆抗体进行IFA和Western blot检测确认成功制备G... 详细信息

本研究利用制备的GRA7单克隆抗体为基础建立猪弓形虫病的阻断ELISA方法。以rGRA7重组蛋白免疫小鼠,取脾细胞进行细胞融合,筛选出4株能够稳定产生单克隆抗体的阳性单克隆细胞株。经对此单克隆抗体进行IFA和Western blot检测确认成功制备GRA7蛋白的单克隆抗体后,以重组蛋白为包被抗原对阻断ELISA方法进行优化后,经过重复性、交叉性、符合性实验验证本方法具有可重复性,与MAT符合性高。初步应用于288份临床样品检测,检出率为11.46%,与MAT检测结果重合率为84.8%。本研究成功制备弓形虫GRA7蛋白的单克隆抗体,并建立了一种猪弓形虫病的阻断ELISA方法,为弓形虫病的检测提出了新的方案。

关键词：弓形虫 GRA7蛋白单克隆抗体阻断ELISA

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河南省和湖北省部分地区鸡球虫分离株对磺胺氯吡嗪钠耐药性调查

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动物医学进展 2023年第4期44卷 125-129页

作者：耿天天罗莉妍王雅乐申邦方瑞胡敏赵俊龙周艳琴华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

为了解河南省和湖北省鸡球虫对磺胺氯吡嗪钠的耐药现状,选取河南省18个地区和湖北省17个地区的地方分离株进行鸡体笼养试验,以抗球虫指数(Anticoccidial index,ACI)来评价各虫株耐药性。研究结果显示,在所研究的93株鸡球虫分离株中,河... 详细信息

为了解河南省和湖北省鸡球虫对磺胺氯吡嗪钠的耐药现状,选取河南省18个地区和湖北省17个地区的地方分离株进行鸡体笼养试验,以抗球虫指数(Anticoccidial index,ACI)来评价各虫株耐药性。研究结果显示,在所研究的93株鸡球虫分离株中,河南省共计虫株52株,湖北省共计虫株41株。在河南省52株分离虫株中,有25株对磺胺氯吡嗪钠完全耐药(ACI<160),16株中度耐药(160≤ACI≤180),11株敏感(ACI>180);在湖北省共计41株鸡球虫分离虫株中,有9株完全耐药,9株中度耐药,23株敏感。研究结果为河南省和湖北省鸡球虫的耐药性提供了数据支撑。

关键词：鸡球虫耐药性磺胺氯吡嗪钠,鸡体笼养试验

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3株鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验

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中国畜牧兽医 2023年第3期50卷 1250-1258页

作者：陈栋张言浩张阳李森周祖涛李自力华中农业大学动物医学院预防兽医学系武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070

【目的】了解湖北地区鸭疫里氏杆菌病的分布流行与耐药情况,为该地区肉鸭养殖场鸭疫里氏杆菌病的临床用药提供参考。【方法】对武汉周边区县(江夏区、黄陂区、黄梅县)肉鸭养殖场的鸭疫里氏杆菌疑似病例进行采样并分离病原菌,对分离菌的... 详细信息

【目的】了解湖北地区鸭疫里氏杆菌病的分布流行与耐药情况,为该地区肉鸭养殖场鸭疫里氏杆菌病的临床用药提供参考。【方法】对武汉周边区县(江夏区、黄陂区、黄梅县)肉鸭养殖场的鸭疫里氏杆菌疑似病例进行采样并分离病原菌,对分离菌的形态学、染色特性、生化特性、16S rRNA进行鉴定,并对鉴定为鸭疫里氏杆菌的分离株进行血清型和耐药性分析。利用标志基因整合酶的特异性引物PCR鉴定分离菌基因组,判断是否整合有50K基因岛。【结果】分离鉴定了3株鸭疫里氏杆菌,3株分离菌均能在TSA平皿培养基中生长为光滑的半透明状菌落,革兰氏染色为阴性、瑞氏染色可观察到两极浓染;生化试验结果显示,3株鸭疫里氏杆菌均不发酵多种糖类,过氧化氢酶阳性,不产硫化氢,不能液化明胶。16S rRNA鉴定结果显示,获得大小为1480 bp的目的条带,血清型均为1型;50K基因岛标志基因PCR扩增结果显示,仅黄梅分离株(HM株)含有该基因岛。最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)试验与纸片扩散(Kirby-Bauer,K-B)试验测定耐药性结果显示,3株分离菌株均对青霉素、阿莫西林、头孢曲松、头孢噻肟、氟苯尼考及庆大霉素敏感,对萘啶酮酸、壮观霉素、恩诺沙星、多黏菌素B表现出不同程度的耐药性。【结论】分离鉴定了3株血清1型鸭疫里氏杆菌,药敏试验结果对本地区鸭疫里氏杆菌病的防治及流行病学研究提供一定的理论指导。

关键词：鸭疫里氏杆菌分离鉴定血清型 50K基因岛药物敏感性

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应用四引物扩增阻滞突变体系PCR技术检测柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶N377D突变

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中国兽医学报 2023年第1期43卷 93-97页

作者：耿天天王雅乐罗莉妍申邦方瑞胡敏赵俊龙周艳琴华中农业大学、动物医学院、农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室湖北武汉430070

面对严重鸡球虫病的磺胺耐药性,传统检测磺胺耐药的方法已无法满足临床应用,因此建立一种新的磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫检测方法具有重要意义。本研究建立了一种使用四引物扩增阻滞突变体系PCR技术(amplification refractory mutation sys... 详细信息

面对严重鸡球虫病的磺胺耐药性,传统检测磺胺耐药的方法已无法满足临床应用,因此建立一种新的磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫检测方法具有重要意义。本研究建立了一种使用四引物扩增阻滞突变体系PCR技术(amplification refractory mutation system-PCR,ARMS-PCR)用于准确区分柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶(dihydropteroate synthase,DHPS)基因中的点突变(A1129G)。对ARMS-PCR反应进行优化,最佳内外引物工作浓度比是5∶1,Mg^(2+)的最优工作浓度为10 mmol/L,dNTP的最优工作浓度为0.15 mmol/L,最佳Taq酶体积为0.1μL,最佳退火温度为62℃。本研究发现在合适的PCR体系下,能够检测出含有磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫的最低检测限为40 fg,表明该方法灵敏度良好;通过在1对内引物(F-inner377s/R-inner377r)上倒数第3位碱基上分别引进错配,使该方法的特异性提高。因此,ARMS-PCR方法是一种简单快速的用以区分临床分离株单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的基因分型方法。

关键词：鸡球虫病耐药性四引物扩增阻滞突变体系PCR技术单核苷酸多态性

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副猪嗜血杆菌Flp-FRT双基因敲除方法的建立与优化

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畜牧兽医学报 2022年第1期53卷 219-230页

作者：肖静肖坤雪王翘楚陈焕春蔡旭旺徐晓娟华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

本研究旨在利用Flp-FRT位点特异性重组系统建立副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis)的无抗性标记基因敲除方法,为***的毒力因子、致病机制和基因工程疫苗研究提供有力的遗传操作工具。首先利用λ噬菌体cI857/P_(RM)/P_(R)基因表达调控... 详细信息

本研究旨在利用Flp-FRT位点特异性重组系统建立副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis)的无抗性标记基因敲除方法,为***的毒力因子、致病机制和基因工程疫苗研究提供有力的遗传操作工具。首先利用λ噬菌体cI857/P_(RM)/P_(R)基因表达调控系统调控Flp重组酶的表达,实现抗性突变体中抗性基因的消除;然后将Flp表达质粒电转化引入*** CF7066,再自然转化介导同源重组的自杀性质粒获得有抗性标记的基因缺失突变株,调节Flp酶表达并筛选无抗突变株,提高培养温度消除表达Flp酶的温敏质粒;进一步通过筛选突变FRT位点以保证基因敲除的效率。结果表明成功构建了温敏穿梭质粒pSHG5C-Flp,证实了λcI857/P_(RM)/P_(R)表达系统可调控Flp重组酶在***中表达并切除抗性突变株ΔnanH::Kan_(R)中的抗性基因;然后用Flp重组酶表达质粒pSHG5C-Flp电转化*** CF7066,再用自杀性质粒pKF-ΔnanH和pKF-Δapd2对其进行两次连续自然转化,依次在自然转化的初代转化子中筛选并获得了无抗的单基因缺失株ΔnanH和双基因缺失株ΔnanHΔapd,提高培养温度至42℃培养消除了Flp重组酶表达质粒。尽管该系统实现了***两个基因的连续敲除,但敲除第2个基因时的效率明显下降,这很可能源于细菌细胞中Flp重组酶表达的积累,对转化质粒介导的同源重组产生了干扰。因此,作者筛选了突变的FRT位点、构建自杀性质粒pKFM-Δapd进行自然转化,显著提高了自然转化后获得突变株的效率,从而保证了该敲除系统的有效性和稳定性。本研究首次报道了可用于***的无抗性标记双基因缺失突变系统,为其分子致病基因与基因工程疫苗的研究奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌表达调控 Flp-FRT 基因敲除无抗缺失

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2020—2022年湖北省生猪屠宰场伪狂犬病病毒的分离鉴定及遗传进化分析

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畜牧兽医学报 2023年第7期54卷 2972-2981页

作者：陈宏建曹艳樊杰甘荣萱宋文博喻盛炜杨婷赵艳霞魏春燕谢锐华琳彭忠吴斌华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 湖北洪山实验室武汉430070

旨在监测湖北省生猪屠宰场中伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的流行情况。采集2020—2022年湖北省4个区域(鄂东、鄂北、鄂西、鄂中)共9个县市不同规模屠宰场的1795份血液样品和2081份肺样品(肺、肺门淋巴结),分别使用靶向PRV gE... 详细信息

旨在监测湖北省生猪屠宰场中伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的流行情况。采集2020—2022年湖北省4个区域(鄂东、鄂北、鄂西、鄂中)共9个县市不同规模屠宰场的1795份血液样品和2081份肺样品(肺、肺门淋巴结),分别使用靶向PRV gE基因的ELISA和PCR方法检测血清中的抗体和肺样品中的病原,同时对阳性样品进行病原分离鉴定、全基因组测序和遗传进化分析。血清学检测结果显示,共有104份样品为阳性,平均阳性检出率为5.79%。病原学检测结果显示,共有82份样品为阳性,平均阳性检出率为3.94%。按不同因素对检出率进行分析,显示抗体和病原都在春季检出率最高,分别为18.57%和9.74%;湖北省东部的抗体检出率最高(10.77%),中部的病原检出率最高(4.93%);A类小型屠宰场的病原和抗体检出率都显著高于其他3个类型,分别为16.28%和6.01%。从病原阳性样品中共分离到PRV 17株,经全基因组和gB、gC、gE基因遗传进化分析结果显示均属于基因Ⅱ型变异株,与Bartha、NIA-3、Becker等早期国外分离株处于不同的遗传进化分支。其中HBXG疑似发生了基因Ⅰ型毒株与基因Ⅱ型毒株的重组,与早期报道的重组病毒HuB1/CHN2017同处于独立的clade2.2遗传分支。综上所述,湖北省屠宰场关联的猪场中主要流行PRV变异毒株,且免疫过疫苗的猪场还在发生疫苗株与野毒的重组与变异,因此本研究对PRV的持续监测与新型疫苗的研发工作有十分重要的意义。

关键词：伪狂犬病病毒生猪屠宰场血清学检测病原学检测遗传进化分析

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长链非编码RNA CTO-S对伪狂犬病毒复制的影响

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微生物学报 2022年第2期62卷 754-763页

作者：苏乐段龙川姜慧付雯李林涛陈焕春刘正飞华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北洪山实验室湖北武汉430070 温州科技职业学院动物科学学院浙江温州325000

【目的】研究伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)CTO-S对于病毒复制的影响。【方法】利用3′RACE和5′RACE鉴定CTO-S的全长序列。验证CTO-S是否具有编码多肽的能力。Red重组方法构建CTO-S... 详细信息

【目的】研究伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)CTO-S对于病毒复制的影响。【方法】利用3′RACE和5′RACE鉴定CTO-S的全长序列。验证CTO-S是否具有编码多肽的能力。Red重组方法构建CTO-S缺失株以及回复突变株。分析野毒株、缺失株和回复突变株复制的差异。利用RNA pull down联合质谱的方法筛选与CTO-S互作的宿主蛋白。利用RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)方法进行验证。最后利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测野毒株、缺失株和回复突变株对细胞凋亡的影响。【结果】CTO-S全长267 bp,不具有编码多肽的能力。CTO-S缺失不影响PRV的复制。CTO-S与泛醇细胞色素c还原酶的组成部分cytochrome b-c1 complex subunit 1互作,诱导细胞凋亡。【结论】CTO-S对于PRV的复制是非必需的,CTO-S与泛醇细胞色素c还原酶的组成部分cytochrome b-c1 complex subunit 1互作,诱导细胞凋亡。

关键词：伪狂犬病毒长链非编码RNA CTO-S 突变株复制互作

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佐剂对IBRVΔgG/ΔTK双基因缺失活疫苗牛体攻毒保护效果的影响

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吉林农业大学学报 2023年第4期45卷 476-484页

作者：王琛张一李庆妮陈建国陈颖钰陈曦胡长敏郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省洪山实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学湖北省兽医流行病学国际科技合作基地武汉430070 华中农业大学农业部兽用诊断制剂创制重点实验室农业部反刍动物生物制品重点实验室武汉430070

牛传染性鼻气管炎是危害养牛业的一种重要病毒性传染病,疫苗免疫是最主要的防控手段。为研究水性佐剂对牛传染性鼻气管炎TK和gG双基因缺失活疫苗(IBRVΔgG/ΔTK株)的免疫增强作用,将18头1.5~2月龄的奶公犊分成4组,组1~3各5头牛,组4为3... 详细信息

牛传染性鼻气管炎是危害养牛业的一种重要病毒性传染病,疫苗免疫是最主要的防控手段。为研究水性佐剂对牛传染性鼻气管炎TK和gG双基因缺失活疫苗(IBRVΔgG/ΔTK株)的免疫增强作用,将18头1.5~2月龄的奶公犊分成4组,组1~3各5头牛,组4为3头牛。组1滴鼻接种IBRVΔgG/ΔTK疫苗株,组2滴鼻接种IBRVΔgG/ΔTK疫苗株和Gel 01 ST水性佐剂混合物,组3为未免攻毒对照组,组4为不做处理的空白对照组。免疫35 d后,1~3组滴鼻攻击毒力株IBRV HB06株。免疫期间,组1牛体温在正常范围内,有1头牛眼睛和鼻腔出现水样分泌物;组2有1头牛出现一个温次达到40℃,有2头在眼或鼻出现水样分泌物。组1和组2血清特异性抗体和中和抗体水平无显著差异。攻毒后,组1和组2各有1头在第3天体温分别升高一个温次,达到40.25℃和40℃,部分牛眼睛出现水样分泌物;组1鼻腔排毒到第8天,组2中有1头牛在第9天仍检测到排毒;而组3出现流眼泪、鼻分泌物、鼻黏膜出血等临床症状,鼻腔排毒持续到第11天;组1肺部病变与空白对照组(组4)无显著差异,组2略严重于组1,组3表现出明显的肺部病变。按症状分值计算,组1和组2总保护率分别为91.7%和61.41%。参考世界动物卫生组织关于IBRV活疫苗的免疫保护评判标准,组1和组2分别达到100%(5/5)和80%(4/5)保护。综上,此研究所用佐剂未达到预期效果,后期仍需进行更多筛选。

关键词：佐剂牛传染性鼻气管炎标记疫苗免疫病毒

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羊弓形虫病间接ELISA诊断方法的建立

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中国动物传染病学报 2022年第1期30卷 127-133页

作者：李迎迎侯伦王敏李亚琼李明俊周艳琴赵俊龙申邦华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

为比较5种弓形虫抗原的诊断效果,建立实用的羊弓形虫病诊断方法,本研究制备了弓形虫速殖子全虫抗原和4个重组蛋白(GRA1、MIC3、MAG、BAG1),正交试验比较其免疫反应性,从中筛选出相对优势抗原并建立羊弓形虫病间接ELISA(iELISA)诊断方法... 详细信息

为比较5种弓形虫抗原的诊断效果,建立实用的羊弓形虫病诊断方法,本研究制备了弓形虫速殖子全虫抗原和4个重组蛋白(GRA1、MIC3、MAG、BAG1),正交试验比较其免疫反应性,从中筛选出相对优势抗原并建立羊弓形虫病间接ELISA(iELISA)诊断方法,用于检测弓形虫特异的IgG抗体。研究结果表明:除BAG1外上述4种抗原均具有较好的免疫反应性,综合考虑选择致密颗粒蛋白1(GRA1)作为诊断抗原建立了GRA1-iELISA,其检测弓形虫抗体灵敏度大于1∶100(血清稀释度),且不与羊莫氏巴贝斯虫、吕氏泰勒虫、捻转血毛线虫阳性血清发生交叉反应,特异性良好;运用建立的方法和改良凝集试验分别对采自山羊屠宰场的80份血清样品进行检测,测得的弓形虫感染阳性率分别为28.75%(23/80)和31.25%(25/80),二者总符合率为82.5%。本研究建立的ELISA检测方法对羊弓形虫病的诊断以及商业化试剂盒的开发具有重要参考价值。

关键词：羊弓形虫病 GRA1 间接ELISA

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2021年我国饲料原料中常见霉菌毒素污染情况调查

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中国家禽 2023年第10期45卷 70-75页

作者：刘建高厉学武彭哲孙铝辉赵玲华中农业大学动物科技学院、动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北洪山实验室湖北武汉430070 新希望六和股份有限公司北京100102

为调查2021年我国各省饲料原料中黄曲霉毒素B1(AFB1)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)的污染情况,试验分别对从中国不同地区采集的3166、3335和1407个饲料原料样品进行AFB1、DON和ZEN含量检测。结果显示,样品中AFB1、DON和... 详细信息

为调查2021年我国各省饲料原料中黄曲霉毒素B1(AFB1)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)的污染情况,试验分别对从中国不同地区采集的3166、3335和1407个饲料原料样品进行AFB1、DON和ZEN含量检测。结果显示,样品中AFB1、DON和ZEN总污染率分别为79.2%、90.0%和82.2%,分别有6.8%、2.3%和12.2%的样品中AFB1、DON和ZEN浓度超过我国饲料卫生标准。值得注意的是,AFB1在花生粕和菜籽粕中的污染率为100%,其中花生粕中AFB1的超标率高达19.6%;DON在玉米胚芽粕中的超标率为24.0%,ZEN在玉米胚芽粕和玉米蛋白粉中的超标率分别高达56.3%和60.0%。研究表明,在2021年期间,我国饲料原料普遍受到AFB1、DON和ZEN的污染,其中花生粕的AFB1污染情况较为严重,玉米胚芽粕的DON和ZEN污染情况均较为严重,应在霉菌毒素防控中重点关注。

关键词：饲料原料黄曲霉毒素B1 呕吐毒素玉米赤霉烯酮污染情况

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