检索结果-内蒙古大学图书馆

shRNAs介导的Smad2基因在小鼠成纤维细胞NIH/3T3中表达的沉默

解剖学报 2008年第5期39卷 661-665页

作者：郑嵘熊琪蒋思文左波李凤娥徐德全任竹青熊远华中农业大学农业部猪遗传育种重点开放实验室农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070

目的通过构建5个shRNA表达质粒,对转化生长因子β/Smads信号通路中受体调节性Smads蛋白中的Smad2的表达进行抑制。方法针对鼠Smad2基因的mRNA序列,设计合成了5条shRNA-Smad2 DNA序列,分别插入至shRNA表达载体中,获得了5个shRNA-Smad2表... 详细信息

目的通过构建5个shRNA表达质粒,对转化生长因子β/Smads信号通路中受体调节性Smads蛋白中的Smad2的表达进行抑制。方法针对鼠Smad2基因的mRNA序列,设计合成了5条shRNA-Smad2 DNA序列,分别插入至shRNA表达载体中,获得了5个shRNA-Smad2表达质粒,将shRNA表达质粒转染NIH/3T3细胞,采用半定量RT-PCR和Western blotting方法,检测shRNA表达质粒对Smad2表达的抑制效果。结果编号为2.4的shRNA-Smad2表达质粒能够显著降低Smad2的表达,同时发现由不同的shRNA-Smad2表达质粒组成的RNAi池,产生的抑制效果比单个RNAi表达质粒的抑制效果明显提高。结论成功地构建了特异、高效抑制Smad2表达的shRNA表达质粒。

关键词： RNA干扰基因沉默短发夹状RNA 转化生长因子β Smad2 免疫印迹法小鼠

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应用两种方法克隆猪miRNA let-7b及let-7c

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农业生物技术学报 2008年第1期16卷 24-31页

作者：谢胜松冯阳沈艳秦红友朱猛进赵书红华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室农业部猪遗传育种重点开放实验室生物芯片上海国家工程研究中心

microRNA(miRNA)为一类大小约22个核苷酸的非编码小分子RNA,它们能通过与靶mRNA的3’UTR(非编码区)完全互补导致mRNA降解,或不完全互补结合阻断mRNA翻译。研究分别利用构建小RNA的cDNA文库和RNA加尾及引物延伸RT-PCR克隆法从猪骨骼肌中... 详细信息

microRNA(miRNA)为一类大小约22个核苷酸的非编码小分子RNA,它们能通过与靶mRNA的3’UTR(非编码区)完全互补导致mRNA降解,或不完全互补结合阻断mRNA翻译。研究分别利用构建小RNA的cDNA文库和RNA加尾及引物延伸RT-PCR克隆法从猪骨骼肌中鉴定了miRNA let-7b和let-7c,结果显示这两种直接克隆法特异性高,对包含这2个miRNA的前体序列折叠后显示具有茎-环结构特征。其中猪的let-7b还未见报道,而let-7c克隆结果与预测的完全一致,通过克隆的方法证实了猪中的let-7b和let-7c,比较后认为这两种方法各有优缺点,为推动猪miRNA的克隆鉴定提供了新的策略。

关键词： let-7b let-7c microRNA(miRNA) 克隆猪

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猪HSD11B1和MyoG基因多态性与妊娠期长短的关系

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畜牧兽医学报 2008年第6期39卷 689-695页

作者：马志刚李家连郭万虎潘晚平王家圣韩安勤丁山河蒋思文华中农业大学农业部猪遗传育种重点开放实验室＆农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070 当阳市清平种猪场当阳444100 湖北省原种猪场鄂州436043 湖北省桑梓湖种猪场荆州434010 湖北省畜牧兽医局武汉430060

选择HSD11B1和MyoG2个基因作为影响妊娠期长短的候选基因。在7个中外猪群体中采用PCR-RFLP技术研究了HSD11B1和MyoG2个基因多态性与妊娠期长短的关系。HSD11B1基因的PCR-Bsh1236Ⅰ-RFLP分析结果表明:清平猪、新清平猪母系、大白猪、长... 详细信息

选择HSD11B1和MyoG2个基因作为影响妊娠期长短的候选基因。在7个中外猪群体中采用PCR-RFLP技术研究了HSD11B1和MyoG2个基因多态性与妊娠期长短的关系。HSD11B1基因的PCR-Bsh1236Ⅰ-RFLP分析结果表明:清平猪、新清平猪母系、大白猪、长白猪、杜洛克猪、中国瘦肉猪新品系DIV1和DIV2系猪群中A等位基因的频率分别为0.538、0.752、0.522、0.941、1.000、0.889和0.594;除DIV2外,HSD11B1不同基因型与妊娠期长短无显著关系(P>0.05)。MyoG基因的PCR-MspⅠ-RFLP分析结果表明:清平猪、新清平猪母系、大白猪、长白猪、杜洛克猪、中国瘦肉猪新品系DIV1和DIV2系猪群中M等位基因的频率分别为1.000、0.534、0.370、0.115、0.094、0.382和0.243;清平猪中只存在MM基因型,其他群体中3种基因型皆有分布;新清平猪母系MM比NN基因型母猪妊娠期要短,且在经产长白猪中差异极显著(P<0.01)。

关键词：猪妊娠期 HSD11B1 MyoG

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猪LSD1基因的cDNA克隆及时空表达谱分析

猪LSD1基因的cDNA克隆及时空表达谱分析

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第十一次全国畜禽遗传标记研讨会

作者：刘丽娜彭健郑嵘蒋思文华中农业大学农业部猪遗传育种重点开放实验室&农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉 430070

以人LSD1基因mRNA序列为基础，利用“电子克隆”获得猪的部分cDNA序列，并用RT-PCR技术扩增得到猪LSD1基因的cDNA序列，经鉴定猪LSD1基因存在两个转录本，其cDNA序列分别长为2716bp、2656bp;ORF分别长为2622bp、2562bp.利用RT-PCR方法... 详细信息

以人LSD1基因mRNA序列为基础，利用“电子克隆”获得猪的部分cDNA序列，并用RT-PCR技术扩增得到猪LSD1基因的cDNA序列，经鉴定猪LSD1基因存在两个转录本，其cDNA序列分别长为2716bp、2656bp;ORF分别长为2622bp、2562bp.利用RT-PCR方法检测了猪LSD1基因的表达情况，组织表达谱表明LSD1基因在卵巢、肾脏和脾脏中相对高表达;不同发育时期肌肉组织中的表达谱表明，LSD1基因在生长早期高表达，随后降低，且在出生后3d时其表达量是最高的;LSD1基因的两个转录本均同时表达.结果表明，本研究成功克隆了猪LSD1基因的cDNA序列并研究了其表达情况，为进一步研究该基因与肌肉发育及生理功能的关系奠定了基础.

关键词：组蛋白去甲基化酶基因克隆时空表达谱基因表达电子克隆养猪技术

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猪异常与正常妊娠母胎界面趋化因子受体D6及其配体表达特征的初步检测

猪异常与正常妊娠母胎界面趋化因子受体D6及其配体表达特征的初步...

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第十一次全国畜禽遗传标记研讨会

作者：白雪赵书红朱猛进黄江南余梅农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室&农业部猪遗传育种重点开放实验室华中农业大学武汉430070

猪的整个妊娠期有三个胚胎(胎儿)死亡高峰，只有60-70％胚胎可发育成存活个体，母胎免疫耐受在其中起到了重要的作用.趋化因子体系中的诱饵受体D6能通过识别和结合具有生物活性的炎性CC族趋化因子介导母胎界面的免疫耐受.本研究利用半定... 详细信息

猪的整个妊娠期有三个胚胎(胎儿)死亡高峰，只有60-70％胚胎可发育成存活个体，母胎免疫耐受在其中起到了重要的作用.趋化因子体系中的诱饵受体D6能通过识别和结合具有生物活性的炎性CC族趋化因子介导母胎界面的免疫耐受.本研究利用半定量RT-PCR方法初步检测了猪D6基因及其部分配体在异常与正常妊娠附植位点子宫内膜、非附植位点子宫内膜、绒毛膜和羊膜共7个组织中的表达情况，发现D6在异常妊娠与正常妊娠母胎界面的7个组织中均有表达，而其部分配体(CCL22、CCL17、CCL14和CCL8)的表达不均一,推测它们可能在妊娠维持方面起着一定的作用.

关键词：养猪技术配体表达正常妊娠异常妊娠趋化因子免疫耐受母胎界面

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猪POLDIP2基因SNP检测及其与经济性状的关联分析

猪POLDIP2基因SNP检测及其与经济性状的关联分析

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第十一次全国畜禽遗传标记研讨会

作者：王艳熊远吕国峰任竹青邓昌彦华中农业大学农业部猪遗传育种重点开放实验室&农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉 430070

本研究克隆了猪polymerase(DNA-directed)，deltainteracting protein 2(POLDIP2)基因，在其第三外显子发现一个新的SNP位点，该位点具有BsuR 1酶切多态，在八眉、淮南和梅山三个国内地方猪种及长白和大白两个西方猪种中检测了228头个... 详细信息

本研究克隆了猪polymerase(DNA-directed)，deltainteracting protein 2(POLDIP2)基因，在其第三外显子发现一个新的SNP位点，该位点具有BsuR 1酶切多态，在八眉、淮南和梅山三个国内地方猪种及长白和大白两个西方猪种中检测了228头个体的基因型，结果表明：大白和长白猪种中只有C等位基因，国内地方猪种八眉和淮南猪群中也均以C等位基因为主，而梅山猪群A等位基因和C等位基因的频率相同;运用GLM程序在431头“大白×梅山”F2代群体中进行了基因型与胴体性状和肉质性状的关联分析，发现该位点与猪胴体长(P＜0.01)和背膘厚(P＜0.05)存在显著相关，而与肉质性状间未发现显著的相关性.

关键词：基因克隆经济性状基因检测等位基因胴体性状肉质性状养猪技术

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猪MuRF3基因的克隆，进化分析及siRNA设计

猪MuRF3基因的克隆，进化分析及siRNA设计

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第十一次全国畜禽遗传标记研讨会

作者：沈鹤赵书红樊斌农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室农业部猪遗传育种重点开放实验室华中农业大学武汉 430070

MuRF3是MuRF(Muscle-specific RING finger，MuRFs)蛋白家族的成员之一，该家族基因特异性在心肌和骨骼肌中表达，在肌细胞的分化、生长及细织形成过程中发挥重要作用.本研究采用电子克隆的方法，以人与小鼠MuRF3基因的cDNA序列为信息... 详细信息

MuRF3是MuRF(Muscle-specific RING finger，MuRFs)蛋白家族的成员之一，该家族基因特异性在心肌和骨骼肌中表达，在肌细胞的分化、生长及细织形成过程中发挥重要作用.本研究采用电子克隆的方法，以人与小鼠MuRF3基因的cDNA序列为信息探针，分离得到猪MuRF3基因.在人、大鼠、小鼠、牛及猪等几个物种中对MuRF3基因的CDS序列及其编码氨基酸序列同源性进行了比较分析，并构建了进化树，发现该基因在不同哺乳动物间具有很高的保守性. 此外，利用已获得的MuRF3 cDNA序列设计了三对siRNA，以用于该基因的进一步功能研究.

关键词：基因克隆基因进化进化分析蛋白家族基因特异性电子克隆养猪技术

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猪Bcl-2家族蛋白部分基因的克隆与进化分析

猪Bcl-2家族蛋白部分基因的克隆与进化分析

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第十一次全国畜禽遗传标记研讨会

作者：黄菁赵书红农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室&农业部猪遗传育种重点开放实验室华中农业大学武汉 430070

Bcl-2家族蛋白是在细胞凋亡过程中起重要作用的一类蛋白质，可分为抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白两大类.本研究采用电子克隆的方法，以人Bcl-2家族抗凋亡蛋白相关基因的cDNA序列为信息探针，电子克隆获得猪Bcl-2家族中BCL2，BCL2L1和BCL2A1三... 详细信息

Bcl-2家族蛋白是在细胞凋亡过程中起重要作用的一类蛋白质，可分为抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白两大类.本研究采用电子克隆的方法，以人Bcl-2家族抗凋亡蛋白相关基因的cDNA序列为信息探针，电子克隆获得猪Bcl-2家族中BCL2，BCL2L1和BCL2A1三个凋亡相关基因部分cDNA序列，并进一步采用RT-PCR方法进行了克隆测序.同时在人，大鼠，小鼠，牛以及猪等几个物种中对得到全长CDS的BCL2L1基因的CDS序列及氨基酸序列同源性进行了比较分析并构建了进化树，发现该基因具有很高的保守性.

关键词：基因克隆家族蛋白细胞凋亡抗凋亡蛋白促凋亡蛋白电子克隆养猪技术

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猪GEB1基因序列的克隆、遗传变异及表达谱研究

猪GEB1基因序列的克隆、遗传变异及表达谱研究

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第十一次全国畜禽遗传标记研讨会

作者：杨华黄文辉马志雄熊远左波农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室&农业部猪遗传育种重点开放实验室华中农业大学武汉 430070

GEB1(糖原分支酶1)又称淀粉1，6-转葡萄糖苷酶，参与了糖原合成，催化与α-1，4相连的葡萄糖单位从糖原链外侧转移到相同或相邻糖原链α-1，6位置，从而形成了分支.生物信息学分析表明猪GEB1，基因定位在猪13号染色体免疫球蛋白超家族成... 详细信息

GEB1(糖原分支酶1)又称淀粉1，6-转葡萄糖苷酶，参与了糖原合成，催化与α-1，4相连的葡萄糖单位从糖原链外侧转移到相同或相邻糖原链α-1，6位置，从而形成了分支.生物信息学分析表明猪GEB1，基因定位在猪13号染色体免疫球蛋白超家族成员4D和脂酶成员1之间，基因组全长为209003bp，包含15个外显子和14个内含子.本研究获得了猪GEB1基因的第1-13外显子cDNA序列，在此基础上对大白猪、长白猪、梅山猪、清平猪和通城金猪该基因第4-5内含子进行序列比对，检测到了19个潜在的变异位点.RT-PCR分析表明该基因在脾、肺、肝、肾、小肠、肌肉、心、脂肪、胃组织均表达，其中在脂肪中表达量最低.

关键词：基因克隆单核苷酸多态性遗传变异糖原分支酶1 生物信息学养猪技术

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猪miR-206前体的克隆、表达及生物信息学分析

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畜牧兽医学报 2007年第5期38卷 425-431页

作者：陈俭海魏文娟肖骁赵书红华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室农业部猪遗传育种重点开放实验室武汉430070

研究骨骼肌中表达的miRNAs对深入探明骨骼肌生长发育的调控机制具有十分重要的意义。采用比较基因组学与生物信息学相结合的方法,从猪骨骼肌中克隆了猪miR-206的前体(Precursor),对该miRNA前体的二级结构及与其它物种序列的同源性进行... 详细信息

研究骨骼肌中表达的miRNAs对深入探明骨骼肌生长发育的调控机制具有十分重要的意义。采用比较基因组学与生物信息学相结合的方法,从猪骨骼肌中克隆了猪miR-206的前体(Precursor),对该miRNA前体的二级结构及与其它物种序列的同源性进行了分析。RT-PCR结果显示,该前体miRNA在猪大多数组织中均有表达,在骨骼肌中表达量最高。生物信息学分析表明miR-206前体序列在不同物种间具有较高的保守性。

关键词：猪 miR-206前体克隆表达

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