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畜牧兽医学报 2021年第10期52卷 2783-2791页

作者：田小欢刘茹孙艳任瑞敏余梅赵书红曹建华华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070 华中农业大学农业农村部猪遗传育种重点实验室武汉430070 华中农业大学生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

旨在制备猪RNA聚合酶Ⅱ的单克隆抗体并进行初步应用。本研究采用生物信息方法预测免疫原,将其化学合成后免疫5只4~8周龄Bal b/c雌性小鼠,对免疫后呈现阳性的小鼠进行细胞融合试验,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合并获得能稳定分泌抗RNA ... 详细信息

旨在制备猪RNA聚合酶Ⅱ的单克隆抗体并进行初步应用。本研究采用生物信息方法预测免疫原,将其化学合成后免疫5只4~8周龄Bal b/c雌性小鼠,对免疫后呈现阳性的小鼠进行细胞融合试验,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合并获得能稳定分泌抗RNA PolⅡ的杂交瘤细胞。鉴定结果显示,RNA PolⅡ单克隆抗体的重链为IgG 2A型,轻链为Kappa型。利用间接ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选和亚克隆,获得了8株稳定分泌RNA PolⅡ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。将其初步应用到染色质免疫共沉淀(ChIP-seq)技术,并与商业化抗体的富集性进行比较,结果表明,本研究得到的单克隆抗体富集性更强。本研究获得的猪RNA PolⅡ单克隆抗体可为表观遗传学的研究提供理论基础,并且提供重要的生物学材料。

关键词： RNA PolⅡ 单克隆抗体猪杂交瘤细胞

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蓝塘猪和长白猪骨骼肌差异表达cis-NATs基因鉴定

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中国农业科学 2018年第9期51卷 1795-1805页

作者：许月园齐晓龙候晔赵云霞栾宇周焕焕赵书红李新云华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室生猪健康养殖协同创新中心农业部猪健康养殖重点实验室广西扬翔股份有限公司

【目的】通过分析蓝塘猪和长白猪生长发育过程中品种间骨骼肌组织差异表达基因及顺式天然反义转录本(cis-natural antisense transcripts,cis-NATs),并以此为基础进行整合分析,探索cis-NATs调控猪骨骼肌生长发育的分子机理。【方法】使... 详细信息

【目的】通过分析蓝塘猪和长白猪生长发育过程中品种间骨骼肌组织差异表达基因及顺式天然反义转录本(cis-natural antisense transcripts,cis-NATs),并以此为基础进行整合分析,探索cis-NATs调控猪骨骼肌生长发育的分子机理。【方法】使用差异表达分析鉴定蓝塘猪和长白猪胚胎期35 d至出生后180 d共10个时间点品种间差异表达基因及cis-NATs(|log2FC|≥1且FDR<0.01);然后通过功能富集分析注释出差异表达基因及cis-NATs对应的正义基因主要参与的GO生物学过程(P<0.01)及KEGG通路(P<0.05);再根据与cis-NATs相关表达的基因数目筛选出cis-NATs主要参与的GO生物学过程和KEGG通路,并根据通路间的相同基因数目对所有KEGG通路进行整合;最后基于通路内cis-NATs及其正义基因在品种间的差异表达倍数进行通路可视化分析。【结果】在蓝塘和长白猪骨骼肌发育的10个时间点共鉴定出5 350个品种间差异表达基因和738个差异表达cis-NATs;GO分析结果显示品种间骨骼肌组织差异表达cis-NATs主要与肌肉发育及能量代谢等GO生物学过程中的基因相关表达;KEGG通路整合分析发现能量代谢通路之间关联性最强;其中线粒体三羧酸循环通路中基因及其相关表达的cis-NATs在仔猪出生后早期表达量较高;通路可视化分析发现在肌纤维生长的两个关键时间点即胚胎期49 d和77 d,蓝塘猪能量代谢相关通路中基因及其相关表达的cis-NATs显著高表达于长白猪,而出生后品种间表达模式的变化则主要集中在出生后2—90 d的出生后早期阶段。【结论】在蓝塘猪和长白猪骨骼肌发育的10个时间点,共鉴定出738个品种间差异表达的cis-NATs,功能注释结果表明这些cis-NATs主要通过与能量代谢通路中的基因相关表达从而参与影响蓝塘猪和长白猪品种间骨骼肌纤维发育差异。

关键词：蓝塘猪长白猪顺势天然反义转录本差异表达能量代谢

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宰前休息方式对猪福利、血液成分及肉质的影响

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畜牧兽医学报 2009年第11期40卷 1645-1650页

作者：柴进彭健熊琪张昌新缪文李凤娥郑嵘蒋思文华中农业大学动物科技学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室&农业部猪遗传育种开放重点实验室武汉430070 华中农业大学动物科技学院动物营养系武汉430070 武汉中粮肉食品有限责任公司武汉430000

选取体质量约为100 kg、氟烷基因型为NN的长×大二元杂交猪60头,随机分为3组:不休息组,休息3 h组,休息3 h+玩具组,公母各半。根据评分标准分别记录休息过程中猪的精神状况。放血时收集血样,用于分析血浆中皮质醇、促肾上腺皮质激素(... 详细信息

选取体质量约为100 kg、氟烷基因型为NN的长×大二元杂交猪60头,随机分为3组:不休息组,休息3 h组,休息3 h+玩具组,公母各半。根据评分标准分别记录休息过程中猪的精神状况。放血时收集血样,用于分析血浆中皮质醇、促肾上腺皮质激素(ACTH)浓度,乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性,乳酸、血糖浓度;添加EDTA-K2抗凝剂的血样用于血细胞分析。同时在放血时,测定血温。屠宰后,测定背最长肌24 h滴水损失;背最长肌(LM)、半膜肌(SM)45 min以及24 h的pH、色值、导电率。结果表明:①休息3 h+玩具组在3个时间段的精神评分要极显著高于休息3 h组,随着时间的延长猪都表现出趋于平静的趋势;②休息3 h+玩具组和休息组3 h组在皮质醇、促肾上腺皮质激素要显著低于不休组(P<0.05),相反乳酸脱氢酶、肌酸激酶要显著高于不休息组(P<0.05),而休息3h+玩具组与休息3 h组差别不显著(P<0.05);③3个休息处理组在肉质指标上没有出现显著差别(P<0.05);④休息3 h+玩具组、休息3 h组在红细胞数(RBC)、血红蛋白含量(HGB)均要显著低于不休息组(P<0.05);休息3h+玩具组在白细胞数(WBC)上显著高于不休组(P<0.05);休息3 h组的淋巴细胞绝对值(W-SCC)显著高于不休息组(P<0.05);而休息3 h+玩具组与休息3 h组在所有的免疫指标上都没有显著差异(P>0.05)。根据上述的结果显示,宰前一定要让猪有一个休息的过程,这种措施能有效缓解猪的应激,并能恢复其免疫能力;在休息的过程中,添加部分福利玩具,至少对猪的精神状态有明显的好处。

关键词：商品猪休息方式猪福利血液指标肉质

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PRLR、RBP4基因多态性分布及其对大白猪产仔数的影响

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中国畜牧兽医 2010年第7期37卷 120-123页

作者：刘远李良良莫小雨王建华熊远雷明刚华中农业大学动物科技学院农业部猪遗传育种重点开放实验室&农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070 宜昌正大畜牧有限公司宜昌443000

为了研究猪繁殖性状候选主效基因PRLR、RBP4多态性在大白猪群中的遗传效应,并应用于遗传改良,试验检测了278头大白母猪的基因多态性分布,分析了2个基因多态性位点不同基因型与该群体1418胎总产仔数和产活仔数的遗传效应。结果表明,PRLR... 详细信息

为了研究猪繁殖性状候选主效基因PRLR、RBP4多态性在大白猪群中的遗传效应,并应用于遗传改良,试验检测了278头大白母猪的基因多态性分布,分析了2个基因多态性位点不同基因型与该群体1418胎总产仔数和产活仔数的遗传效应。结果表明,PRLR基因位点上优势等位基因为B,其频率为0.538;头胎、二胎和所有胎次各基因型母猪的总产仔数大小均为BB>AB>AA,经产胎次各基因型母猪则为AB>BB>AA,但均没有显著差异,产活仔数的分析也得到了相似的结果;RBP4基因位点在该群体中均为AA型纯合子。

关键词： PRLR RBP4 猪产仔数

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利用SRAP标记分析3个团头鲂群体的遗传多样性

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华中农业大学学报 2010年第5期29卷 601-606页

作者：冉玮张桂蓉王卫民魏开建周玲玲华中农业大学水产学院/农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/农业部淡水生物多样性保护与利用重点开放实验室

采用SRAP（sequence-related amplified polymorphism）分子标记,对长江中下游地区淤泥湖、梁子湖、鄱阳湖的3个团头鲂自然群体的遗传多样性进行了分析。从88对引物组合中筛选出13对条带清晰、多态性丰富的引物组合,每对引物组合检测到... 详细信息

采用SRAP（sequence-related amplified polymorphism）分子标记,对长江中下游地区淤泥湖、梁子湖、鄱阳湖的3个团头鲂自然群体的遗传多样性进行了分析。从88对引物组合中筛选出13对条带清晰、多态性丰富的引物组合,每对引物组合检测到的位点数为8-21个,在3个团头鲂群体中共检测到172个位点。鄱阳湖群体的多态位点百分率（58.14%）、Nei＇s基因多样性（0.1849）和Shannon＇s信息指数（0.2799）最高,梁子湖群体的多态位点百分率（51.16%）、Nei＇s基因多样性（0.1524）和Shannon＇s信息指数（0.2347）次之,淤泥湖群体的多态位点百分率（29.07%）、Nei＇s基因多样性（0.0904）和Shannon＇s信息指数（0.1371）最低。3个团头鲂群体中,鄱阳湖群体遗传多样性最高,淤泥湖群体最低。3个群体间的Nei＇s无偏遗传距离为0.0866-0.2207,遗传相似度为0.8020-0.9170;鄱阳湖和淤泥湖群体间遗传距离最大（0.2207）,亲缘关系较远,鄱阳湖和梁子湖群体间遗传距离最小（0.0866）,亲缘关系较近。

关键词：团头鲂相关序列扩增多态性遗传变异鄱阳湖梁子湖淤泥湖

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猪HK2基因第17外显子多态与胴体和肉质性状的相关性研究

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畜牧兽医学报 2008年第10期39卷 1295-1299页

作者：王军邓昌彦熊远左波李凤娥雷明刚郑嵘华中农业大学农业部猪遗传育种重点实验室和农业动物遗传育种教育部重点实验室武汉430070 武汉科技学院环境科学研究所武汉430073

采用PCR-RFLP技术,分析了HK2基因第17外显子中MspⅠ的酶切突变多态位点(A171G)在6个群体186头猪中的多态性分布及其与胴体性状和肉质性状间的相关性。研究结果表明:3个纯种猪群和3个杂交猪群中A和B等位基因频率分布情况较一致,均为B等... 详细信息

采用PCR-RFLP技术,分析了HK2基因第17外显子中MspⅠ的酶切突变多态位点(A171G)在6个群体186头猪中的多态性分布及其与胴体性状和肉质性状间的相关性。研究结果表明:3个纯种猪群和3个杂交猪群中A和B等位基因频率分布情况较一致,均为B等位基因占绝对优势;在6个群体中,没有发现AA基因型个体,AB与BB基因型效应与胴体长、肋骨数和眼肌面积的相关性极显著(P<0.01),与肩部背膘厚、胸腰椎间背膘厚、三点平均背膘厚、眼肌高度、眼肌宽度、肥肉率、瘦肉率和肌内脂肪等性状的相关显著(P<0.05)。该位点是否可用作改良猪胴体、肉质性状的标记位点并在标记辅助选择中加以应用还有待进一步的研究。

关键词：猪己糖激酶 PCR—RFLP 胴体性状肉质性状关联分析

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应用两种方法克隆猪miRNA let-7b及let-7c

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农业生物技术学报 2008年第1期16卷 24-31页

作者：谢胜松冯阳沈艳秦红友朱猛进赵书红华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室农业部猪遗传育种重点开放实验室生物芯片上海国家工程研究中心

microRNA(miRNA)为一类大小约22个核苷酸的非编码小分子RNA,它们能通过与靶mRNA的3’UTR(非编码区)完全互补导致mRNA降解,或不完全互补结合阻断mRNA翻译。研究分别利用构建小RNA的cDNA文库和RNA加尾及引物延伸RT-PCR克隆法从猪骨骼肌中... 详细信息

microRNA(miRNA)为一类大小约22个核苷酸的非编码小分子RNA,它们能通过与靶mRNA的3’UTR(非编码区)完全互补导致mRNA降解,或不完全互补结合阻断mRNA翻译。研究分别利用构建小RNA的cDNA文库和RNA加尾及引物延伸RT-PCR克隆法从猪骨骼肌中鉴定了miRNA let-7b和let-7c,结果显示这两种直接克隆法特异性高,对包含这2个miRNA的前体序列折叠后显示具有茎-环结构特征。其中猪的let-7b还未见报道,而let-7c克隆结果与预测的完全一致,通过克隆的方法证实了猪中的let-7b和let-7c,比较后认为这两种方法各有优缺点,为推动猪miRNA的克隆鉴定提供了新的策略。

关键词： let-7b let-7c microRNA(miRNA) 克隆猪

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LbCas12a蛋白的原核表达及活性检测

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中国畜牧兽医 2022年第5期49卷 1621-1629页

作者：刘茹李小龙张晓倩田小欢余梅赵书红曹建华华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070 华中农业大学农业农村部猪遗传育种重点实验室武汉430070 华中农业大学生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

【目的】获得具有体外切割活性的来自毛螺旋菌属(Lachnospiraceae)ND2006的LbCas12a蛋白,以期为LbCas12a的应用研究提供重要的生物学工具。【方法】根据pMBP-LbCas12a质粒(Addgene,113431)的基因序列合成LbCas12a基因,并将其与pET-28a(+)线性化载体进行同源重组,构建重组质粒pET28a-LbCas12a,经测序和NheⅠ、SalⅠ双酶切鉴定后将阳性重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行IPTG诱导表达。通过12%SDS-PAGE凝胶电泳检测确定IPTG诱导的最佳浓度及温度,鉴定重组蛋白的表达形式,通过Ni-NTA树脂亲和层析的方法进行纯化、超滤法浓缩,BCA法检测蛋白浓度。将浓缩后的LbCas12a与猪细小病毒(PPV)靶标DNA、CRISPR RNA(crRNA)及偶联荧光基团的非特异性单链DNA(ssDNA)探针FQ共孵育,设置1个无LbCas12a蛋白的对照组、4个不同蛋白浓度(125、250、500、1000 nmol/L)的试验组,检测不同组别ssDNA探针的荧光强度,检测测试位点PPV活性。【结果】测序和NheⅠ、SalⅠ双酶切鉴定结果表明,重组质粒pET28a-LbCas12a构建成功且无移码突变。12%SDS-PAGE凝胶电泳检测结果表明,IPTG诱导表达的最佳浓度为0.5 mmol/L,最佳温度为37℃,表达形式主要为可溶性表达。蛋白浓度检测结果表明,浓缩后的蛋白浓度为485 ng/μL,质量为143 ku。活性检测结果表明,125、250、500、1000 nmol/L LbCas12a蛋白组的荧光强度均极显著高于对照组(P<0.01)。【结论】本研究成功表达出高活性的LbCas12a蛋白,且LbCas12a蛋白具有体外切割ssDNA的反式活性,为后续基于CRISPR-LbCas12a系统的分子检测技术奠定了基础。

关键词： LbCas12a蛋白原核表达蛋白纯化反式活性

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BCL10基因多态性与大白猪血液参数的关联分析

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中国畜牧杂志 2016年第13期52卷 18-22页

作者：胡素琴张先波单舒文栾宇朱猛进王海燕华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室农业部猪遗传育种重点开放实验室湖北武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

B细胞淋巴瘤10(B cell lymphoma-10,BCL10)是调控先天性免疫的重要功能基因,对免疫指标有重要的影响。本研究利用候选基因法策略,在猪中探讨BCL10基因多态与血液参数性状的关系。利用Hin P1I-RFLP技术对658头大白猪BCL10的基因型进行了... 详细信息

B细胞淋巴瘤10(B cell lymphoma-10,BCL10)是调控先天性免疫的重要功能基因,对免疫指标有重要的影响。本研究利用候选基因法策略,在猪中探讨BCL10基因多态与血液参数性状的关系。利用Hin P1I-RFLP技术对658头大白猪BCL10的基因型进行了检测,用Pop Gene3.2和SAS对BCL10基因的遗传结构及其与血液参数性状表型变异的关系进行了分析。结果表明:该基因第3外显子144位置处存在T>C变异,并处于遗传不平衡状态。混合线性模型分析结果表明,BCL10基因对白细胞数有极显著影响(P<0.01),其中CC型极显著高于TT型和TC型,TT型与TC型之间没有显著差异;同时对淋巴细胞数也有显著影响(P<0.05),CC型显著高于TT型,TC型与其它两种基因型间没有显著差异,TT型的淋巴细胞数最低。结果提示,BCL10基因的多态性与大白猪的部分血液参数(白细胞数和淋巴细胞数)极显著或显著关联,故其可用于猪相应免疫性状选择的分子标记。

关键词： BCL10 大白猪血液参数关联分析

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ESR、FSHβ和PRLR基因与清平猪×大白猪杂交后代繁殖性能的关系

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华中农业大学学报 2018年第6期37卷 66-74页

作者：熊琪陈文娟彭刚彭健柴进陈明新蒋思文湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室武汉430064 华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/农业部猪遗传育种重点开放实验室/生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

为了挖掘清平猪妊娠期短和产仔数多等优良繁殖性状的遗传背景,在清平猪与大白猪杂交后的F1代和F2代黑猪群体中进行了ESR、FSHβ和PRLR与该群体繁殖性能的关联性分析。结果显示:(1)FSHβ基因在F1和F2群体中的A等位基因与B等位基因的基因... 详细信息

为了挖掘清平猪妊娠期短和产仔数多等优良繁殖性状的遗传背景,在清平猪与大白猪杂交后的F1代和F2代黑猪群体中进行了ESR、FSHβ和PRLR与该群体繁殖性能的关联性分析。结果显示:(1)FSHβ基因在F1和F2群体中的A等位基因与B等位基因的基因频率相近;ESR在F1和F2群体中的优势基因均为B等位基因;PRLR基因在F1群体中的优势基因为C等位基因,在F2群体中C等位基因与T等位基因的基因频率相近。(2)FSHβ不同基因型对F1群体的产活仔数和F2群体的总产仔数、初生体质量、断奶仔猪体质量和3周龄体质量等重要繁殖性状均有显著影响。(3)ESR不同基因型对F2群体妊娠期长短的影响表现为AB猪数和70日龄体质量有显著影响;对F2群体的弱仔数、初生体质量、断奶仔猪体质量和3周龄体质量有显著影响。结果表明,清平猪杂交后代的选育过程中可以淘汰部分FSHβ基因AA型个体,应该提高有利基因B等位基因在群体中的频率;ESR基因的AB型有利于缩短妊娠期,可淘汰AA型个体;PRLR基因中T等位基因是繁殖性状的有利基因,但可能与弱仔性状正相关,须慎重选择。

关键词：清平猪候选基因繁殖性状关联性分析

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