检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2022年第5期52卷 633-639页

作者：陈秋慧李政志张海艳严蕊杨晶涵陈洁陈曦陈颖钰郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 武汉市农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430070 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

环介导等温扩增(LAMP)技术是一种能在恒温设备下对靶基因进行扩增的技术,具有精确、快速、简单及低成本的优点,已广泛应用于食品安全、医疗卫生及农业现场检测等多个领域。本文主要从环介导等温技术的原理、反应体系改进、产物检测方法... 详细信息

环介导等温扩增(LAMP)技术是一种能在恒温设备下对靶基因进行扩增的技术,具有精确、快速、简单及低成本的优点,已广泛应用于食品安全、医疗卫生及农业现场检测等多个领域。本文主要从环介导等温技术的原理、反应体系改进、产物检测方法的改进、LAMP与其他技术的联用,以及目前LAMP在动物病原检测方面的应用进行了分析,并展望了LAMP技术的应用前景,以期为同仁提供参考。

关键词：环介导等温扩增环引物 Bst DNA聚合酶 LAMP体系动物病原检测

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脑心肌炎病毒样颗粒疫苗的制备及免疫保护效果评价

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中国兽医学报 2025年第05期 994-1001页

作者：张艳芳朱琼付杰方耀辉靳佳音张丹娜邓菲曹胜波华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室

脑心肌炎是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus, EMCV)引起的一种以脑炎、心肌炎为主要临床特征的人畜共患传染病。为探索有效的预防措施，本研究利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统，将EMCV的P12A和3C基因插入到pFastBacDual穿梭... 详细信息

脑心肌炎是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus, EMCV)引起的一种以脑炎、心肌炎为主要临床特征的人畜共患传染病。为探索有效的预防措施，本研究利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统，将EMCV的P12A和3C基因插入到pFastBacDual穿梭载体中，构建重组杆状病毒Ac-P12A-3C,并大量表达和纯化了EMCV病毒样颗粒(EMCV-VLPs),透射电镜观察显示，EMCV-VLPs能正确组装约30 nm的病毒样颗粒。小鼠免疫和攻毒试验表明，该病毒样颗粒免疫可有效抵抗EMCV的攻击，保护率高达100%。组织病理切片结果显示，与PBS攻毒组相比，VLP免疫组的组织病理损伤显著减轻，且组织中的病毒载量也明显降低。仔猪免疫试验结果显示，该病毒样颗粒可以诱导仔猪产生良好的体液免疫反应，二免后中和抗体滴度可达1∶320～1∶640,且免疫过程中未观察到明显的副反应。本研究初步验证了病毒样颗粒疫苗的免疫原性和安全性，为研制基于EMCV-VLPs的亚单位疫苗奠定了基础，并为脑心肌炎的防控提供了新的策略。

关键词：脑心肌炎病毒(EMCV) 病毒样颗粒(VLPs) 免疫原性体液免疫杆状病毒-昆虫细胞表达系统中和抗体亚单位疫苗

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猪德尔塔冠状病毒N蛋白单克隆抗体2D7的制备与生物学特性鉴定

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中国动物传染病学报 2024年第5期32卷 115-125页

作者：张宁赵平刘思雨赵硕陈忠伟何颖欧阳康卢冰霞蒋家霞郭旋林昌华赵武黄伟坚秦毅斌赵凌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室南宁530001 广西大学动物科学技术学院南宁530005 广西职业技术学院南宁530226 广西农垦永新畜牧集团金光有限公司南宁530042 广西农垦永新畜牧集团西江有限公司贵港537100 广西桂垦牧业有限公司南宁530022

为获得猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并鉴定其生物学特性,本研究利用RT-PCR方法扩增PDCoV-N基因,构建表达质粒,转化BL21感受态细胞获得重组大肠杆菌,诱导表达后... 详细信息

为获得猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并鉴定其生物学特性,本研究利用RT-PCR方法扩增PDCoV-N基因,构建表达质粒,转化BL21感受态细胞获得重组大肠杆菌,诱导表达后获得PDCoV-N重组蛋白,将其进行纯化后再免疫小鼠,制备针对PDCoV-N蛋白的mAb,并进行了抗体的效价测定、免疫荧光(IFA)、Western blot、亚类的鉴定、mAb特异性的鉴定。结果,成功构建pColdⅡ-PDCoV-N重组原核表达质粒,SDS-PAGE显示重组N蛋白成功表达,分子质量约为38 kDa;经小鼠免疫、细胞融合、亚克隆筛选获得1株分泌PDCoV-N蛋白抗体的阳性杂交瘤细胞株;制备的腹水经间接ELISA方法测定抗体的效价为2.048×10^(6)。IFA、Western blot试验表明该mAb可以与PDCoV-N蛋白及全病毒特异性结合,亚类鉴定其亚型为IgG1,轻链为κ链。该mAb只与PDCoV反应,而与其他猪肠道病毒无交叉反应,表明本研究制备的mAb具有良好的特异性。本研究成功制备了PDCoV-N蛋白的mAb,为进一步研究PDCoV的生物学特性和诊断试剂的开发提供技术支持。

关键词：猪德尔塔冠状病毒 N蛋白单克隆抗体

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鸽新城疫病毒Ⅵ-HZ株的分离鉴定及其遗传进化分析

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中国兽医学报 2022年第4期42卷 651-656页

作者：钱晶刘雪王玮周红波王永山江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 仲恺农业工程学院动物科技学院岭南现代农业科学与技术广东省实验室广东广州510225 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

对疑似鸽新城疫(Newcastle disease,ND)的病料进行病毒鉴定和分离培养,获得1株鸽新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)Ⅵ-HZ株,为进一步了解病毒生物学特性及其分子特征,对其进行致病性和遗传进化分析。结果表明,该毒株MDT为80 h,I... 详细信息

对疑似鸽新城疫(Newcastle disease,ND)的病料进行病毒鉴定和分离培养,获得1株鸽新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)Ⅵ-HZ株,为进一步了解病毒生物学特性及其分子特征,对其进行致病性和遗传进化分析。结果表明,该毒株MDT为80 h,ICPI为1.2,EID_(50)为10^(7.0)/0.1 mL,HA效价为8 log_(2),属于中等毒力型NDV;人工感染鸽第7天出现明显腹泻和神经症状,死亡率为60%,病死鸽剖检可见脑膜充血、水肿及肠道出血;病理切片结果显示病死鸽脑组织水肿、小肠绒毛上皮细胞脱落坏死、黏膜固有层有炎症。全基因组测序显示Ⅵ-HZ株全长为15192 nt,基因排列方式为3'-NP-P/V/W-M-F-HN-L-5',其中F蛋白裂解位点氨基酸序列为^(112)KRQKRF^(117),具有NDV强毒的分子特征;系统发育进化分析表明该Ⅵ-HZ株为ClassⅡ类基因Ⅵ型毒株,与Ⅵ.2.2.2毒株亲缘关系最近。本研究为近期鸽NDV的分子流行病学调查提供了科学依据。

关键词：鸽新城疫病毒致病性遗传进化 F基因基因Ⅵ型

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猪源艰难梭菌的分离鉴定与生物学特性分析

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中国动物传染病学报 2022年第2期30卷 27-33页

作者：张悦艾伟诚王斐梁婉谢思思华琳李春辉彭忠吴斌华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430070 中南大学湘雅医院感染与控制中心长沙410008

为了了解我国猪源艰难梭菌(Clostridioides difficile,CD)的病原学及分子生物学特征,本研究收集湖北和广东地区疑似患有肠炎的病猪粪便样品,提取基因组DNA,利用已经报道的5重PCR方法对艰难梭菌的16S rDNA基因、毒素A的编码基因tcdA、毒... 详细信息

为了了解我国猪源艰难梭菌(Clostridioides difficile,CD)的病原学及分子生物学特征,本研究收集湖北和广东地区疑似患有肠炎的病猪粪便样品,提取基因组DNA,利用已经报道的5重PCR方法对艰难梭菌的16S rDNA基因、毒素A的编码基因tcdA、毒素B的编码基因tcdB以及二元毒素编码基因cdtA和cdtB进行检测,同时采用厌氧培养法,对PCR检测毒素编码基因为阳性的粪便样品进行艰难梭菌的分离培养,并对所分离到的菌株进行药物敏感性测试和全基因组重测序。结果发现:本研究所采集到的97份粪便样品经PCR检测显示有80份样品为16S rDNA阳性,其中仅有2份样品为tcdA和tcdB阳性。从这两份样品中分离出一株tcdA和tcdB阳性的艰难梭菌,命名为HuB01。药敏试验发现,HuB01对头孢菌素(FOX)、氯霉素(CHL)、克林霉素(CLI)、氨苄西林(AMP)、头孢曲松钠(CRO)耐药,对莫西沙星(MXF)和万古霉素(VAN)表现出中度耐药,而对利福西明(RFX)、甲硝哒唑(MTZ)、非达霉素(FDX)敏感。全基因组重测序发现HuB01的全基因组大小为3.93 Mb,平均GC含量为28.31%,编码3691个蛋白基因及63个tRNA和10个rRNA;3691个基因中含有31个耐药基因和164个毒力相关基因。多序列位点分型(MLST)结果显示HuB01为ST11。由于目前国内对于艰难梭菌的研究大多集中在人医领域,因此本研究可为兽医领域艰难梭菌的相关研究奠定基础。

关键词：艰难梭菌分离鉴定 PCR检测药敏试验全基因组重测序

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莽草酸对PEDV感染仔猪生长性能、腹泻指数、血清免疫及抗氧化指标的影响

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饲料研究 2023年第18期46卷 12-16页

作者：赵雯何颖韦明宇蒋家霞张胜斌胡庭俊张宁赵凌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 广西大学广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所、广西兽医生物技术重点实验室、农业农村部、中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西南宁530001 广西农垦永新畜牧集团有限公司广西南宁530022 广西职业技术学院广西南宁530226 广西农垦永新畜牧集团西江公司广西贵港537100

试验旨在研究莽草酸对感染猪流行性腹泻病毒(PEDV)仔猪的生长性能、腹泻指数、血清免疫及抗氧化指标的影响。将120头感染PEDV的7日龄“杜×长×大”仔猪随机分为6组,每组5个重复,每个重复4头猪。处理1组、2组、3组分别每日给感... 详细信息

试验旨在研究莽草酸对感染猪流行性腹泻病毒(PEDV)仔猪的生长性能、腹泻指数、血清免疫及抗氧化指标的影响。将120头感染PEDV的7日龄“杜×长×大”仔猪随机分为6组,每组5个重复,每个重复4头猪。处理1组、2组、3组分别每日给感染PEDV仔猪灌服800、400、200 mg/kg莽草酸,处理4组每日给感染PEDV仔猪灌服400 mg/kg绿原酸,处理5组每日给感染PEDV仔猪灌服2万单位庆大霉素,处理6组为阳性对照组,另选选择20头健康仔猪作为空白对照组。试验期为5 d,之后观察3 d。结果显示,与阳性对照组相比,处理1组、2组、3组仔猪平均日增重(ADG)均显著升高(P<0.05)。处理1组和2组仔猪的PEDV感染治愈率均达到85%,处理5组仔猪的PEDV感染治愈率为65%;处理1组、2组、3组仔猪血清中的免疫球蛋白G(IgG)含量均显著升高(P<0.05);处理1组、2组、3组仔猪血清中的总超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮(NO)、髓过氧化物酶(MPO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及总抗氧化能力(T-AOC)显著升高(P<0.05);丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)水平显著降低(P<0.05)。研究表明,莽草酸能够提高仔猪的生长性能,降低腹泻指数,增强血清免疫力和抗氧化能力,对PEDV感染仔猪具有抗病促生长作用。

关键词：莽草酸猪流行性腹泻病毒(PEDV) 生长性能抗氧化功能

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ASFV和PRRSV多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

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中国兽医科学 2023年第6期53卷 671-678页

作者：赵硕陈忠伟肖婷何颖张宁覃国喜卢冰霞段振华秦毅斌张胜斌段群棚赵武韦明宇广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西南宁530001 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 广西农垦永新畜牧集团金光有限公司广西南宁530042 玉林市动物疫病预防控制中心广西玉林537000 广西农垦永新畜牧集团西江有限公司广西贵港537100 广西农垦永新畜牧集团有限公司广西南宁530022

为了建立一种可同时精准、快捷鉴别检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法,本研究选择猪源β-actin为内参基因,根据ASFV的P72基因及PRRSV的ORF6基因设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了ASFV和PR... 详细信息

为了建立一种可同时精准、快捷鉴别检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法,本研究选择猪源β-actin为内参基因,根据ASFV的P72基因及PRRSV的ORF6基因设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了ASFV和PRRSV多重TaqMan荧光定量PCR检测方法,对该方法的特异性、敏感性、重复性进行验证,并初步应用于临床样品的检测。结果显示,该方法可在45 min内完成对ASFV、PRRSV及猪源β-actin基因的特异性扩增;对ASFV、PRRSV及猪源β-actin标准品模板的最低检测拷贝数分别为7.87×101 copies/μL、1.19×102 copies/μL和5.99×103 copies/μL,同一模板的3次重复试验的组内及组间变异系数均小于2%;用该方法检测92份临床样品,未检出ASFV,检出19份PRRSV阳性样品。结果表明,本研究建立了一种可快速鉴别检测ASFV及PRRSV的多重荧光定量PCR方法,较普通PCR敏感性高103倍,可应用于ASFV和PRRSV的快速鉴别诊断及流行病学调查。

关键词：非洲猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒多重TaqMan荧光定量PCR

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乳酸菌在农业和食品加工中的应用研究进展

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微生物学杂志 2022年第4期42卷 1-11页

作者：何进徐思杨刘波王阶平华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 福建省农业科学院农业生物资源研究所福建福州350003

乳酸菌是发酵糖类物质的主要终产物为乳酸的细菌总称。常见的乳酸菌包括乳杆菌属(Lactobacillus)、片球菌属(Pediococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、乳球菌属(Lactococcus)、链球菌属(Streptococcus)和双歧杆菌属(Bifdobacterium)等少数属的种类。许多乳酸菌属于人和动物胃肠道、泌尿生殖道、母乳、口腔等的正常菌群,能产生多种生物活性物质,具有调节肠道菌群平衡、增强机体免疫力、促进机体生长等益生功能,因而乳酸菌具有重要的应用价值。文本综述了乳酸菌在畜禽养殖饲料添加剂、青贮饲料发酵、水产养殖及植物病害防治等领域的应用研究进展,尤其在“饲料禁抗、养殖减抗、产品无抗”的养殖背景下,乳酸菌制剂是替代抗生素的最佳选择。同时也总结了乳酸菌在奶制品、肉制品加工以及植物基饮料、低糖食品和饮料发酵等方面的开发潜力,展望了乳酸菌研究与应用的发展趋势。

关键词：乳酸菌饲料添加剂动物养殖替抗产品乳酸菌基因工程

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anti-CRISPR的起源、发展和应用

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微生物学通报 2021年第9期48卷 3353-3367页

作者：裴晨辰李英俊华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学深圳营养与健康研究院广东深圳518000 中国农业科学院深圳农业基因组研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室深圳分中心农业农村部农业基因数据分析重点实验室广东深圳518120

细菌和古菌等微生物与病毒(噬菌体)之间的生存之战是一场"军备竞赛"。细菌和古菌已经进化出多种先天和适应性的免疫系统来抵御噬菌体的入侵。噬菌体则利用不同的对抗策略来躲避这些噬菌体防御机制。CRISPR-Cas(Clustered Regu... 详细信息

细菌和古菌等微生物与病毒(噬菌体)之间的生存之战是一场"军备竞赛"。细菌和古菌已经进化出多种先天和适应性的免疫系统来抵御噬菌体的入侵。噬菌体则利用不同的对抗策略来躲避这些噬菌体防御机制。CRISPR-Cas(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats-CRISPR-Associated)系统就是细菌和古菌广泛编码的一种抵御噬菌体等外源遗传元件的获得性免疫系统,与此同时,噬菌体也进化出特异性的anti-CRISPR来抵抗CRISPR-Cas系统的免疫。本文系统综述了anti-CRISPR的发现过程、分类和作用机制,并展望了其潜在的应用。

关键词： CRISPR-Cas anti-CRISPRs 获得性免疫核酸切割

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杀线虫深海芽胞杆菌的筛选

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生物资源 2022年第2期44卷 154-161页

作者：陈稳黄典余豪程万里邵宗泽张吉斌华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室/微生物农药国家工程研究中心湖北武汉430070 自然资源部第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室福建厦门361005 湖北洪山实验室湖北武汉430070

根结线虫(root-knot nematodes)对作物危害严重,难防难控。海洋微生物作为巨大的生物资源宝库,近年来逐渐成为开发杀线虫微生物菌剂的热点。为了获得对根结线虫具有拮抗活性的深海微生物资源,本研究用模式线虫——秀丽隐杆线虫(Caenorha... 详细信息

根结线虫(root-knot nematodes)对作物危害严重,难防难控。海洋微生物作为巨大的生物资源宝库,近年来逐渐成为开发杀线虫微生物菌剂的热点。为了获得对根结线虫具有拮抗活性的深海微生物资源,本研究用模式线虫——秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)进行初筛,从203株深海芽胞杆菌(Deep-sea Bacillus)中获得24株触杀活性在50%以上的菌株;以植物病原线虫——南方根结线虫(Meloidogyne incognita)进行复筛,获得14株触杀活性高于50%的菌株。选取复筛触杀活性最好的6株菌对南方根结线虫进行熏杀活性测定,发现阿耶波多氏芽胞杆菌(Bacillus aryabhata)MCCC 1K02966、海泥芽胞杆菌(Bacillus oceanisediminis)MCCC 1A14063、坚强芽胞杆菌(Bacillus firmus)MCCC 1A00263不仅对根结线虫的触杀活性达到60%以上,且熏杀活性也达到40%以上,同时具有触杀和熏杀双重杀线虫活性,在农业线虫防治领域中具有开发应用潜力。

关键词：深海芽胞杆菌秀丽隐杆线虫南方根结线虫触杀活性熏杀活性

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