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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第二届青年科学家学术论坛

作者：李东方江伟骏关兴艾陈方维王森刘琴喻龙贺兰赵俊龙农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院

巴贝斯虫是一种红细胞内专性寄生的血液寄生虫,在宿主体内仅可在红细胞内增殖,与巴贝斯虫极为相似的疟原虫在红内期以血红蛋白为主要营养来源,但巴贝斯虫的营养来源目前尚无报道。利用疟原虫血红蛋白代谢途径特异性抑制剂作用于吉氏巴... 详细信息

巴贝斯虫是一种红细胞内专性寄生的血液寄生虫,在宿主体内仅可在红细胞内增殖,与巴贝斯虫极为相似的疟原虫在红内期以血红蛋白为主要营养来源,但巴贝斯虫的营养来源目前尚无报道。利用疟原虫血红蛋白代谢途径特异性抑制剂作用于吉氏巴贝斯虫,具有明显的抑虫效果,如青蒿琥酯(IC50=0.37μM)和氯喹(IC50=0.34μM),因而推测血红蛋白也是巴贝斯虫的主要营养物质来源之一。本研究以吉氏巴贝斯虫为模型,鉴定了可能与血红蛋白降解和血色素形成相关的基因:Bgpain-2(恶性疟原虫Falcipain 2'的同源基因)和BgHDP(恶性疟原虫血红素解毒蛋白HDP的同源基因),荧光定量PCR证实这两个基因在红内期均有转录;重组表达Bgpain-2和BgHDP并纯化,酶催化反应表明rBgpain-2和rBgHDP能在体外有效地将血红蛋白转化为血色素,电镜结果显示降解产物具有明显的血色素结构,其大小为0.2μm(±0.05)×0.05μm (±0.01);重组蛋白降解血红蛋白的最佳反应条件为pH=4.0 (±0.2)的缓冲液体系,rBgpain-2与rBgHDP的比例为3:1,37℃孵育40分钟;此外,我们试图敲除Bgpain-2和BgHDP基因,根据敲除后虫体的表型评估其生物学功能。Bgpain-2基因可被敲除,在Bgpain-2完全不表达的情况下与野生型虫株的生长周期、复制速率、虫体形态等表型无明显变化,表明其他酶可能补救Bgpain-2的缺失;敲除BgHDP未获成功,目前正在尝试条件敲除,猜测HDP是巴贝斯虫降解血红蛋白的关键酶,但是这两个酶在巴贝斯虫降解血红蛋白代谢的过程中如何发挥功能有待进一步探索。这些结果对了解巴贝斯虫血红蛋白转化为血色素的机制具有重要意义,进而为研究虫体的营养获取途径奠定基础。

关键词：巴贝斯虫血红蛋白血色素 Bgpain-2 BgHDP

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环状RNA及其研究进展

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中国兽医科学 2021年第3期51卷 349-355页

作者：孔德来朱一帆翟文俊郭爱珍陈颖钰华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 国家动物结核病专业实验室(武汉) 湖北武汉430070 农业农村部部兽用诊断制剂创制重点实验室湖北武汉430070 农业农村部反刍动物生物制品重点实验室湖北武汉430070 湖北省兽医流行病学国际科技合作基地湖北武汉430070

环状RNA是非编码RNA家族的重要成员之一,广泛存在于真核生物内,并参与多种疾病的发生发展。本文就环状RNA的生物学特征、功能及其在畜牧兽医和人类疾病如结核病领域的研究进展进行综述,并分析了环状RNA的未来研究方向和亟待解决的一些问... 详细信息

环状RNA是非编码RNA家族的重要成员之一,广泛存在于真核生物内,并参与多种疾病的发生发展。本文就环状RNA的生物学特征、功能及其在畜牧兽医和人类疾病如结核病领域的研究进展进行综述,并分析了环状RNA的未来研究方向和亟待解决的一些问题,期望能为相关研究提供有价值的参考。

关键词：环状RNA 非编码RNA 调节疾病转录结核病

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寨卡病毒NS1蛋白在杆状病毒系统中的表达及免疫原性分析

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中国兽医科学 2020年第3期50卷 346-352页

作者：魏思琪张路平张艳芳叶静曹胜波陈政华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

本研究旨在采用杆状病毒表达系统表达并纯化寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)NS1蛋白,并对其免疫原性进行鉴定。将ZIKV NS1基因克隆至杆状病毒载体pFastBac1中,构建重组转移载体,将其转化DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将鉴定正确的重组... 详细信息

本研究旨在采用杆状病毒表达系统表达并纯化寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)NS1蛋白,并对其免疫原性进行鉴定。将ZIKV NS1基因克隆至杆状病毒载体pFastBac1中,构建重组转移载体,将其转化DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将鉴定正确的重组杆粒转染sf9细胞,获得重组杆状病毒,经SDSPAGE和Western-blot鉴定蛋白正确表达后,将其感染High5细胞,大量表达重组蛋白,并用镍柱亲和层析法进行纯化,将纯化后的ZIKV NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,进行血清特异性抗体效价检测。最终结果显示,获得了纯度较高分泌表达的ZIKV NS1蛋白,并且血清特异性抗体效价实验表明,纯化的ZIKV NS1蛋白能够诱导小鼠产生特异性免疫反应,有很好的免疫原性。本研究为ZIKV疫苗和诊断试剂盒的研发奠定了重要的基础。

关键词：寨卡病毒 NS1蛋白杆状病毒免疫原性

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牛支原体病诊断技术的研究进展

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中国兽医科学 2020年第10期50卷 1294-1300页

作者：刘晓雅王朝好李婷尹伊娅李雨芮陈颖钰郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

牛支原体感染可引起牛呼吸系统综合征、结膜炎、中耳炎、乳腺炎、关节炎甚至流产等疾病,给各国养牛业带来重大经济损失。由于目前尚无疫苗及有效的药物可用于该病的防治,及时诊断牛支原体病有利于牛场采取有效的措施以降低扩散风险,减... 详细信息

牛支原体感染可引起牛呼吸系统综合征、结膜炎、中耳炎、乳腺炎、关节炎甚至流产等疾病,给各国养牛业带来重大经济损失。由于目前尚无疫苗及有效的药物可用于该病的防治,及时诊断牛支原体病有利于牛场采取有效的措施以降低扩散风险,减少经济损失。本文就牛支原体病的临床特征、牛支原体分离培养、牛支原体免疫学检测、血清学诊断及分子诊断技术研究进展等方面进行综述,供同行参考。

关键词：牛支原体病诊断技术防控

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Rv0309通过抑制宿主炎性反应增强结核分枝杆菌的存活

Rv0309通过抑制宿主炎性反应增强结核分枝杆菌的存活

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中国防痨协会第33届全国学术大会暨中国防痨科技奖颁奖大会

作者：彭永崇朱小洁陈颖钰郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物医学院华中农业大学国家动物结核病专业实验室

目的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是导致人类结核病（Tuberculosis,TB）的主要病原菌;宿主先天免疫调节蛋白对结核分枝杆菌的致病起着不可估量的作用。本研究前期在结核分枝杆菌RD区蛋白中发现了一种具有抑制炎性作用的... 详细信息

目的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是导致人类结核病（Tuberculosis,TB）的主要病原菌;宿主先天免疫调节蛋白对结核分枝杆菌的致病起着不可估量的作用。本研究前期在结核分枝杆菌RD区蛋白中发现了一种具有抑制炎性作用的蛋白Rv0309,并通过表达、纯化该蛋白在细胞水平对其进行了验证。为进一步在菌体水平研究其功能,确定该蛋白在结核分枝杆菌中的重要作用,我们对其进行了深入研究。方法本研究分别构建了表达Rv0309蛋白的重组耻垢分枝杆菌Msv0309和缺失该基因的牛分枝杆菌BCG缺失株BCGΔrv0309,通过Western blot确定了该蛋白在分枝杆菌的细胞亚定位,并对细菌的生长速率、菌落形态、细胞壁通透性的影响进行了研究。利用RAW264.7细胞感染模型,以MOI=10:1分别感染Msv0309、BCGΔrv0309以及野生型菌株,对不同时间点细胞炎性因子在mRNA和蛋白质水平的变化进行了检测,进一步分析了分枝杆菌的胞内存活以及炎性相关天然免疫细胞信号通路的磷酸化水平的变化。最后,利用BCGΔrv0309、回补菌株和野生株感染小鼠模型,通过体内感染实验验证了Rv0309在调控宿主固有免疫反应的作用。结果研究表明,Rv0309定位于分枝杆菌细胞壁并与细胞壁通透性有关。纯化的重组rRv0309蛋白能够抑制脂多糖诱导的IL-6的释放,并呈现剂量依赖性。与野生株相比,Msv0309能够显著抑制IL-6,IL-1β和TNF-α的产生。相比之下,与野生型BCG和回补菌株cBCGΔrv0309::rv0309相比,BCGΔrv0309强烈诱导这些细胞因子的表达。进一步研究表明,Rv0309是通过降低NF-κB p65/IκBα和MAPK ERK/JNK的磷酸化水平来抑制炎性细胞因子的产生。重要的是,表达Rv0309蛋白的BCG和耻垢分枝杆菌增强了巨噬细胞中分枝杆菌的存活率。体内研究结果表明,感染BCGΔrv0309的小鼠肺部在感染早期表达出高水平的TNF-α和IFN-γ,以及大量淋巴细胞和中性粒细胞,而在晚期感染中肺部载菌量和炎症病理损伤最小。结论 Rv0309蛋白能够抑制感染过程中宿主的炎症反应并提高感染后结核分枝杆菌的存活率,为结核疫苗的研发提供了理论基础。

关键词：结核分枝杆菌 Rv0309 牛分枝杆菌BCG 炎症致病性

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一例动物园平顶猴和麋鹿结核病的暴发调查

一例动物园平顶猴和麋鹿结核病的暴发调查

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十九次全国学术研讨会

作者：陈颖钰闫钰章恺伦王宇郭爱珍农业微生物学国家重点实验室国家动物结核病专业实验室(武汉)华中农业大学湖

引言人兽共患性结核病是由结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)所导致的慢性消耗性人兽共患病,严重影响着人和动物的健康。其中,最为重要的结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别是感染人和牛结核病的主要病原菌,两者...

引言人兽共患性结核病是由结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)所导致的慢性消耗性人兽共患病,严重影响着人和动物的健康。其中,最为重要的结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别是感染人和牛结核病的主要病原菌,两者基因水平上99.95%同源,几乎可以感染所有的脊椎动物。猴和鹿是MTBC的自然宿主。猴因为有着与人结核

关键词：

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PEDV IgG抗体时间分辨荧光免疫层析(TRFIA)检测方法的建立

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中国兽医学报 2020年第11期40卷 2085-2089页

作者：朱玲程育芳曹华陈淑华孟宪荣何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

为了建立一种快速定量检测血清中猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgG抗体时间分辨荧光免疫层析(TRFIA)的检测方法,本研究采用竞争法和荧光免疫层析技术,以羧基荧光微球与PEDV S蛋白偶联,以抗IgG FC片段单抗和PE... 详细信息

为了建立一种快速定量检测血清中猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgG抗体时间分辨荧光免疫层析(TRFIA)的检测方法,本研究采用竞争法和荧光免疫层析技术,以羧基荧光微球与PEDV S蛋白偶联,以抗IgG FC片段单抗和PEDV S1单抗作为试纸条检测线(T线)和质控线(C线),制备PEDV IgG抗体检测荧光定量免疫层析试纸条。通过对蛋白与荧光微球偶联方法、包被抗体量等对本研究工艺进行优化,并通过线性范围、最低检出限、精密性等性能指标以及与临床样品检测结果比对,对PEDV IgG抗体时间分辨荧光层析检测方法进行评价。结果显示,本研究所制备的PEDV IgG抗体检测试纸条线性范围为25~2 500 g/L,低检出限为25 g/L,批内变异系数与批间变异系数均小于15%,平均添加回收率为100.88%~102.70%,检测时间为15 min,试纸条与5种其他猪病血清抗体无交叉反应。临床样品检测发现,其与实验室间接免疫荧光检测结果符合率为95.6%。综上,本研究所研制的PEDV IgG抗体检测时间分辨荧光免疫层析试纸条灵敏度较高、特异性较高、准确度高、操作简便、快速,可用于临床PEDV IgG抗体的检测。

关键词：猪流行性腹泻(PED) IgG抗体时间分辨荧光免疫层析(TRFIA) 定量检测快检

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miRNA在奶牛乳腺炎疾病中的研究进展

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中国兽医学报 2020年第8期40卷 1660-1664页

作者：李婷尹伊娅唐鑫张文劲李雨芮陈颖钰郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

奶牛乳腺炎是一种常见的奶牛疾病,多发而且病因复杂,除饲养管理不良或遗传因素外,其他多种病原微生物也会引起该病,如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌及支原体等,给养牛业造成了巨大的经济损失([1])。miRNA作为小的非编码RNA,与mRNA结... 详细信息

奶牛乳腺炎是一种常见的奶牛疾病,多发而且病因复杂,除饲养管理不良或遗传因素外,其他多种病原微生物也会引起该病,如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌及支原体等,给养牛业造成了巨大的经济损失([1])。miRNA作为小的非编码RNA,与mRNA结合,从而抑制蛋白的翻译或者引起mRNA的降解,参与细胞生长、分化、增殖以及凋亡等多种生物学功能。

关键词：奶牛乳腺炎 miRNA

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2018年伪狂犬病病毒的流行特征及其遗传变异分析

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畜牧兽医学报 2020年第3期51卷 584-593页

作者：孙颖王雪莹梁婉谢思思彭忠陈宏建华琳宋文博汤细彪陈焕春吴斌华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

为了了解当前伪狂犬病病毒(PRV)在我国猪群中的流行现状及其遗传变异情况,本研究利用PCR的方法对2018年1-12月来源于我国28个省、市、自治区的1 328份疑似猪伪狂犬病发病猪的组织样品开展了PRV-gE的检测及病毒的分离鉴定,同时针对所分... 详细信息

为了了解当前伪狂犬病病毒(PRV)在我国猪群中的流行现状及其遗传变异情况,本研究利用PCR的方法对2018年1-12月来源于我国28个省、市、自治区的1 328份疑似猪伪狂犬病发病猪的组织样品开展了PRV-gE的检测及病毒的分离鉴定,同时针对所分离的病毒的gB、gC和gE基因进行PCR扩增和DNA测序,并展开遗传变异分析。结果显示,共有92份样品为PRV-gE基因检测阳性,阳性检出率为6.93%。从92份PRV-gE阳性样品分离到13株PRV。分别基于gB基因部分片段、gC和gE基因进行遗传变异分析发现13株PRV与我国2012年以后流行的毒株(如HeN1等变异株)亲缘关系较近,而与2012年以前所分离的毒株(如Ea等经典毒株)的亲缘关系较远;此外,绝大多数中国分离株与国外分离毒株(如NIA-3、Bartha、Kaplan等)在遗传进化树中位于不同的进化分支;相对于国外分离株及国内早期流行的经典毒株而言,13株PRV分离株的gB、gC和gE蛋白中均存在许多特征性的氨基酸位点变异。本研究对于了解我国PRV流行现状及当前流行的PRV毒株的生物学特征具有十分重要的意义。

关键词：伪狂犬病病毒 PCR检测病毒分离遗传变异分析猪

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一例育肥猪猪呼吸道疾病综合征的诊断

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黑龙江畜牧兽医 2020年第16期 57-59,64,165页

作者：牛伟杰孙琪于学祥库旭钢何启盖罗锐华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物疫病诊断中心武汉430070

猪呼吸道疾病综合征(porcine respiratory disease complex,PRDC)是由多种病原及环境条件等多种因素引起的猪呼吸系统疾病。2019年4月份,湖北省某猪场育肥阶段猪只出现明显的呼吸道症状,且发病率高达60%,死亡率约为8%,造成了严重的经济... 详细信息

猪呼吸道疾病综合征(porcine respiratory disease complex,PRDC)是由多种病原及环境条件等多种因素引起的猪呼吸系统疾病。2019年4月份,湖北省某猪场育肥阶段猪只出现明显的呼吸道症状,且发病率高达60%,死亡率约为8%,造成了严重的经济损失。为了对该病进行诊断,试验采用剖检病变、实验室检测进行诊断,对分离菌进行药敏试验,并根据诊断结果进行防控。结果表明:根据病猪临床症状、剖检病变及实验室检测结果,最后确定该场PRDC是由细菌、病毒混合感染所致。推断可能是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV-2)混合感染引起免疫抑制后继发多杀性巴氏杆菌(Pm)和副猪嗜血杆菌(Hps)、猪链球菌(SS)感染所致。可采取改善饲养环境、药物治疗及对猪群进行群体保健等防控措施。说明猪场应重视PRDC的实验室诊断及防控。

关键词：猪呼吸道疾病综合征经济损失混合感染免疫抑制诊断防控

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