检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2019年第7期49卷 847-854页

作者：姚睿玉陈芳洲何启盖杨汉春中国农业大学动物医学院北京100083 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重影响全球养猪业的传染病,疫苗免疫是防控该病的重要措施,但猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)容易发生变异从而降低了免疫预防的效果。本研究从免疫了高致病性PRRS疫苗的发病猪场,分离出2株PRRSV毒株,并测... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重影响全球养猪业的传染病,疫苗免疫是防控该病的重要措施,但猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)容易发生变异从而降低了免疫预防的效果。本研究从免疫了高致病性PRRS疫苗的发病猪场,分离出2株PRRSV毒株,并测定了其全基因组序列,分别命名为:PRRSV/pig/CHN/JTS/201606和PRRSV/pig/CHN/TG/201711。为了探讨临床中分离得到的这2株PRRSV毒株与该场所使用疫苗之间的关系,我们进行了全基因序列的遗传变异和重组分析,结果显示,这2个毒株都以PRRSV-pig-CHN-TJ-200-610(EU860248.1)疫苗毒株为骨架,其中PRRSV/pig/CHN/JTS/201606毒株在ORF1a蛋白的1429-1522 aa区域存在独特的94 aa的缺失,PRRSV/pig/CHN/TG/201711毒株在1013-1132aa区域存在120 aa的缺失。综上,本研究结果表明,PRRSV疫苗株基因组中核苷酸的突变和缺失产生的新毒株是造成猪场疫苗免疫失败的原因。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组遗传变异

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基于PCV3-Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立及临床应用

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畜牧兽医学报 2019年第2期50卷 454-460页

作者：王俊伟陈芳洲库旭钢李畅何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料... 详细信息

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法,对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端(羧基端),而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3ORF2序列为靶基因,设计引物。以PCV3阳性病料为模板,PCR扩增截短的ORF2基因,并将其克隆至pET-30a载体构建重组质粒,并转染至大肠杆菌*** BL21感受态细胞,获得重组菌后选择最佳诱导表达条件,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物。以纯化后的重组Cap蛋白作为包被抗原,建立PCV3间接ELISA (indirectELISA)诊断方法,并初步用于临床样品检测。结果:从阳性病料中扩增出大小为285bp的PCV3ORF2基因片段,重组质粒经双酶切和测序鉴定构建成功。采用1mmol·L-1 IPTG诱导,在37℃条件下培养6h重组菌,重组蛋白获最佳表达。Western blot结果表明,该重组蛋白与PCV3阳性血清具有较好的反应原性。ELISA的最佳包被抗原质量浓度为1μg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶20,酶标抗体最佳工作浓度为1∶5 000。阳性判定值为S/P≥0.273。批内和批间系数均小于10%,表明该方法具有较好的重复性。PCV2阳性血清用本方法检测为阴性,表明该方法有较好的特异性。检测采集的439份临床猪血清,PCV3抗体阳性检出率为60.59%(266/439)。结果表明,本研究建立了一种快速、简便、敏感、特异的猪圆环病毒3型(PCV3)抗体检测方法。

关键词：猪圆环病毒3型 ORF2基因 Cap蛋白原核表达 ELISA检测

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关于当前人间新型冠状病毒肺炎疫情防控对我国养牛企业生产影响及其应对措施建议

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中国奶牛 2020年第2期 5-9页

作者：郭爱珍彭清洁胡长敏陈颖钰曹永强李家奎华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 武汉科前生物股份有限公司武汉430070 随州市弘大畜牧有限责任公司随州441300

自2020年1月以来,新型冠状病毒(简称“新冠”)肺炎疫情在局地爆发,隔离、封锁和交通管制已成为阻断人间传染源传播的重要防控措施。为摸清现阶段这些疫情防控措施对养牛业的影响,我们对全国38个养殖单位进行调查。调查结果显示,交通管... 详细信息

自2020年1月以来,新型冠状病毒(简称“新冠”)肺炎疫情在局地爆发,隔离、封锁和交通管制已成为阻断人间传染源传播的重要防控措施。为摸清现阶段这些疫情防控措施对养牛业的影响,我们对全国38个养殖单位进行调查。调查结果显示,交通管制给绝大部分养牛场饲料、兽药和疫苗等生产物资的供应带来障碍,湖北省尤其严重;并且产品(奶、牛、肉)加工和上市受阻。同时,有可能因牛群防疫计划不能正常实施、牛病不能及时处置等原因导致动物疫病爆发、长期倒奶导致环境污染等次生灾害。据此,我们对相关部门和养殖企业提出了应对措施和政策建议,以期为当前新型冠状病毒肺炎疫情下保持养牛业稳定发展提供数据和政策支持。

关键词：新型冠状病毒养牛业调查控制疾病

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猪伪狂犬病病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立

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中国兽医学报 2019年第9期39卷 1667-1673页

作者：刘青芸国师榜周宁华琳陈焕春吴斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

针对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守区的核苷酸序列设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV野毒的TaqMan实时荧光定量PCR方法。应用该方法检测猪常见病毒性病原(猪瘟病毒、猪细小病毒... 详细信息

针对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守区的核苷酸序列设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV野毒的TaqMan实时荧光定量PCR方法。应用该方法检测猪常见病毒性病原(猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型),PRV gE基因缺失株,以及健康猪的组织,结果均为阴性,证明该方法特异性良好。该检测方法能够检到的阳性质粒模板最低浓度为254 copies/μL,最低病毒浓度为4.22 TCID50/100μL,比常规PCR敏感性高10倍;重复性试验结果表明该方法重复性良好;用TaqMan实时荧光定量PCR方法和常规PCR方法同时检测37份临床样品,其中前者检出阳性病料22份,阳性检出率为59.64%,后者检出阳性病料15份,阳性检出率为40.54%,2种方法的符合率为81.08%。综上所述,该方法的建立为PRV的实验室诊断及流行病学调查提供了快速、准确的检测手段。

关键词：伪狂犬病病毒 gE基因 TaqMan实时荧光定量PCR

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三基因缺失重组弱毒株(PRV-HNX-TK^-/gE^-/gG^-+PCV2 ORF2)不同途径免疫的效果分析

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中国预防兽医学报 2019年第12期41卷 1261-1267页

作者：吴昊牛伟杰王久红胡耀方姚伦库旭钢何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学学院湖北武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

为评价口服免疫猪伪狂犬病毒三基因缺失重组弱毒株PRV-HNX-TK^-/gE^-/gG^-+PCV2 ORF2对母源抗体阳性保育猪的保护效果,本研究将该重组弱毒株通过口服和颈部肌肉注射两种不同途径免疫母源抗体阳性的断奶仔猪,通过ELISA方法测定血清PRV g... 详细信息

为评价口服免疫猪伪狂犬病毒三基因缺失重组弱毒株PRV-HNX-TK^-/gE^-/gG^-+PCV2 ORF2对母源抗体阳性保育猪的保护效果,本研究将该重组弱毒株通过口服和颈部肌肉注射两种不同途径免疫母源抗体阳性的断奶仔猪,通过ELISA方法测定血清PRV gB抗体、PCV2 Cap抗体和IFN-γ水平,利用固定病毒-稀释血清的中和试验方法检测PRV中和抗体水平;免疫结束后攻毒,记录各组猪临床表现和病理变化、测定其鼻拭子和肛拭子中病毒排毒时间、病毒载量等指标。结果显示,整个免疫试验过程中,口服组与注射组猪的PRV gB抗体均维持阳性、血清中PRV中和抗体效价均高于1:4、IFN-γ含量在免疫后均能达到300 pg/mL以上,PCV2抗体阳性率则出现下降;而未免疫组猪在第7 d后gB抗体转阴,中和抗体效价低于1:4、IFN-γ含量维持在约250 pg/mL,PCV2抗体阳性率(母源抗体)持续到二免后28 d才开始下降。免疫后攻毒,检测结果显示,口服组与注射组比对照组猪提前2 d体温下降,提前7 d恢复采食,而对照组猪出现高温、打喷嚏、咳嗽、流鼻涕、食欲不振、精神沉郁和神经症状并持续至攻毒后第8 d,并于攻毒后第12 d开始采食;口服组与注射组猪排毒高峰在攻毒后第2 d^6 d,第12 d后均停止排毒,对照组猪排毒持续期大于14 d;脑组织病理切片观察可见,口服组与注射组猪脑组织中仅少量小胶质细胞和淋巴细胞增多,而对照组猪脑组织中出现胶质细胞结节、血管袖套现象、卫星现象、噬神经元现象等病理变化,对照组猪扁桃体隐窝腔内含有大量脱落的隐窝上皮细胞、白细胞和炎性渗出液,并有燕麦细胞增多。以上结果表明口服方式免疫该三基因缺失重组弱毒株能够使保育猪产生针对PRV的有效免疫应答,但并不能诱导高水平的PCV2抗体。本研究为PRV疫苗研发带来了新的方向,也为免疫途径提供了更多选择,同时首次证实了该缺失弱毒株口服和肌注均能提供相似的免疫保护效果。

关键词： PRV缺失弱毒株口服免疫免疫效果评价

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应用基于重组慢病毒的CRISPR/Cas9技术构建基因突变的鸡DF1细胞

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华中农业大学学报 2019年第3期38卷 83-88页

作者：靳泽华谢梦利易辰阳黄英付磊王晓萍张安定华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/动物医学院/湖北省预防兽医学重点实验室/生猪健康养殖协同创新中心/农业农村部兽用诊断制剂创制重点实验室/科技部动物疫病联合研究中心武汉430070

为证实基于慢病毒的CRISPR/Cas9基因编辑技术可用于鸡基因组编辑,以鸡的mavs基因为靶基因,通过设计sgRNA,构建表达靶向mavs基因sgRNA的重组慢病毒,并将其感染DF1-Cas9细胞,通过T7E1酶切试验以及mavs基因的靶向序列测定,分析该方法是否... 详细信息

为证实基于慢病毒的CRISPR/Cas9基因编辑技术可用于鸡基因组编辑,以鸡的mavs基因为靶基因,通过设计sgRNA,构建表达靶向mavs基因sgRNA的重组慢病毒,并将其感染DF1-Cas9细胞,通过T7E1酶切试验以及mavs基因的靶向序列测定,分析该方法是否可以用于鸡细胞的基因编辑。扩增sgRNA靶向序列1 220 bp片段,经T7E1酶切琼脂糖凝胶分析可见约300 bp和900 bp大小的条带,表明感染sgRNA慢病毒的细胞mavs产生了突变。序列测定结果表明sgRNA靶向序列发生了多个碱基缺失的突变。以上结果表明基于慢病毒系统的CRISPR/Cas9技术可对鸡基因组进行编辑。

关键词： CRISPR/Cas9 慢病毒鸡DF1细胞基因编辑

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浙江金华地区PCV2分子流行病学调查及遗传变异分析

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中国兽医学报 2019年第10期39卷 1890-1896页

作者：吴明臻江云波敖超杰于学祥库旭钢陈芳洲孙琪吴昊何启盖赵青华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 金华职业技术学院浙江金华321017

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)主要引起猪的多系统功能障碍性疾病,同时,还可侵害猪的免疫系统,造成猪免疫抑制,容易继发细菌及其他病毒感染,大大增加猪群的死亡率。为了解PCV2在浙江金华猪群中的分布与流行状况以及PCV... 详细信息

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)主要引起猪的多系统功能障碍性疾病,同时,还可侵害猪的免疫系统,造成猪免疫抑制,容易继发细菌及其他病毒感染,大大增加猪群的死亡率。为了解PCV2在浙江金华猪群中的分布与流行状况以及PCV2变异规律,对从浙江省金华猪场收集的3 433份血清进行PCR检测,结果显示,2012-2018年PCV2阳性率分别为10.16%,11.95%,8.50%,9.94%,6.19%,5.94%,8.28%,母猪阳性率最高为13.49%。本研究发现在2012年浙江金华地区PCV2优势毒株已经由PCV2b变为PCV2d,且全部为PCV2d-2。将得到的ORF2序列同已知的疫苗序列对比后,发现SH株与浙江金华目前PCV2主流毒株序列一致性最高,但抗原位点比较仍有5处差异,这可能会对疫苗效果产生影响,需要进一步验证。另外只有PCV2d在免疫显性诱饵表位上发生了突变,这可能是PCV2d成为主流的原因。

关键词：猪圆环病毒2型流行病学调查遗传变异分析

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γ-聚谷氨酸的安全性评价(一)

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食品安全质量检测学报 2019年第17期10卷 5816-5821页

作者：张彩霞马立保冀志霞荣迪王艳青陈守文华中农业大学动物科学技术学院农业微生物学国家重点实验室

目的评价γ-聚谷氨酸(γ-polyglutamic acid,γ-PGA)的安全性。方法试验包括急性毒性试验和30 d喂养试验,通过判定小鼠和大鼠的中毒表现、死亡情况和指标测定,评价γ-PGA的安全性。结果小鼠经口LD50>15 g/BW(kg),没有出现明显的中毒... 详细信息

目的评价γ-聚谷氨酸(γ-polyglutamic acid,γ-PGA)的安全性。方法试验包括急性毒性试验和30 d喂养试验,通过判定小鼠和大鼠的中毒表现、死亡情况和指标测定,评价γ-PGA的安全性。结果小鼠经口LD50>15 g/BW(kg),没有出现明显的中毒症状,行为正常、粪便颜色正常、各器官组织完好、7 d内动物无死亡。雌性大鼠10 g/kg和15 g/kg组日增重显著低于对照组(P<0.05),试验组雄性大鼠的日增重显著低于对照组,料肉比显著高于对照组(P<0.01)。雌性大鼠15g/kg组肝脏和肾脏重量均显著低于对照组(P<0.01),5g/kg和10 g/kg组肾脏的相对重量显著高于对照组(P<0.01),雄性大鼠10 g/kg和15 g/kg组肝脏重量、15 g/kg组肾脏和睾丸重量均显著低于对照组(P<0.01),试验组睾丸相对重量均显著高于对照组(P<0.01)。结论虽然5 g/kg·BWγ-PGA会降低大鼠的日增重和饲料转化率,但对其他指标无不良影响,综上,γ-PGA属于无毒级。

关键词：聚谷氨酸安全性评价急性毒性试验 30天喂养试验

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仔猪吃初乳前后血清差异蛋白的鉴定和分析

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中国兽医学报 2019年第8期39卷 1577-1580,1590页

作者：徐守兴卢炳州刘华南王国庆吴斌张克山郑海学刘湘涛华中农业大学动物医学学院农业微生物学国家重点实验室预防兽医学湖北省重点实验室湖北武汉430070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

通过SDS-PAGE方法对仔猪吃初乳前后血清进行检测,找到差异蛋白后,利用LC-MS/MS技术对差异蛋白条带进行鉴定,并使用生物信息学手段对鉴定的蛋白进行GO和KEGG分析。结果显示,仔猪吃初乳前后有很明显的差异蛋白条带,共鉴定出338个蛋白,GO和... 详细信息

通过SDS-PAGE方法对仔猪吃初乳前后血清进行检测,找到差异蛋白后,利用LC-MS/MS技术对差异蛋白条带进行鉴定,并使用生物信息学手段对鉴定的蛋白进行GO和KEGG分析。结果显示,仔猪吃初乳前后有很明显的差异蛋白条带,共鉴定出338个蛋白,GO和KEGG分析结果表明,差异蛋白的功能主要和生长发育和免疫保护相关。这为进一步研究初乳调控仔猪生长发育和免疫调控奠定基础。

关键词：仔猪初乳血清差异蛋白鉴定分析

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4株猪流行性腹泻病毒的HA和HI试验

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中国动物检疫 2019年第9期36卷 78-82页

作者：郭恒科谭鑫库旭钢范盛先何启盖孟宪荣华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

为观察猪流行性腹泻病毒(PDEV)的血凝特性,进而为建立PEDVHA和HI试验,评估疫苗免疫抗体水平奠定基础,将CV777、DR13、YN13和YN144共4株PEDV毒株,在37℃下,分别用0、5、10、50、100μg/mL胰蛋白酶处理30min,然后用鸡、兔和猪红细胞进行血... 详细信息

为观察猪流行性腹泻病毒(PDEV)的血凝特性,进而为建立PEDVHA和HI试验,评估疫苗免疫抗体水平奠定基础,将CV777、DR13、YN13和YN144共4株PEDV毒株,在37℃下,分别用0、5、10、50、100μg/mL胰蛋白酶处理30min,然后用鸡、兔和猪红细胞进行血凝(HA)试验;用已经鉴定为PEDV抗体阳性的血清和乳清分别进行血凝抑制(HI)试验。结果显示:4株PEDV毒株只与兔红细胞发生凝集反应;CV777、DR13毒株的HA现象需要用5μg/mL的胰蛋白酶进行预处理,但是YN13和YN144毒株的HA现象不需要胰蛋白酶作用;该凝集现象能够被PEDV抗体特异性抑制。结果表明,PEDV能够凝集兔的红细胞,不能凝集鸡和猪的红细胞,因而可以用兔红细胞建立PEDV的HA和HI试验方法。

关键词：猪流行性腹泻病毒红细胞血凝试验血凝抑制试验红细胞醛化特异性

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