检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：胡进康超金梅林华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室农业部兽用诊断制剂创制重点实验室生猪健康养殖协同创新中心

擅要,随着养殖业大规模、集约化的快速发展,人类期望得到更加安全、高效的饲料添加剂来促进动物的生长和提高饲料利用率,同时能改善肉、牛奶和鸡蛋的品质,并能减少养殖业对生态环境的污染。随着抗生素的禁用,益生菌作为饲用抗生素的替... 详细信息

擅要,随着养殖业大规模、集约化的快速发展,人类期望得到更加安全、高效的饲料添加剂来促进动物的生长和提高饲料利用率,同时能改善肉、牛奶和鸡蛋的品质,并能减少养殖业对生态环境的污染。随着抗生素的禁用,益生菌作为饲用抗生素的替代品备受关注,它的功能主要是改善动物肠道微生态平衡,促进宿主健康进而抵抗对动物和人类构成威胁的病原菌。本文主要概述了益生菌在养殖业中的应用和对动物健康的影响。

关键词：益生菌机体免疫健康养殖

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CRISPR/Cas9技术在构建弓形虫微线体蛋白MIC3敲除株上的应用

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中国兽医学报 2017年第9期37卷 1720-1725页

作者：王一凡张伟超吴颢李龙娇周艳琴方瑞申邦赵俊龙农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种可以感染几乎所有温血动物的专性细胞内寄生原虫。该寄生虫入侵和感染宿主细胞需要其分泌细胞器所分泌的蛋白,其中包括微线体蛋白。近年来,CRISPR/Cas9技术已经成为分子生物学和功能基因组学研究的... 详细信息

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种可以感染几乎所有温血动物的专性细胞内寄生原虫。该寄生虫入侵和感染宿主细胞需要其分泌细胞器所分泌的蛋白,其中包括微线体蛋白。近年来,CRISPR/Cas9技术已经成为分子生物学和功能基因组学研究的重要工具,本研究利用CRISPR/Cas9技术对弓形虫Ⅰ型虫株RH和Ⅱ型虫株PRU的微线体蛋白mic3基因进行敲除。通过单克隆的筛选和鉴定,成功获得了2种虫株的mic3敲除株。之后对RH敲除株进行研究,发现mic3缺失可以轻微提高虫体在体外培养时的生长速度以及对小鼠的毒力。本研究不仅说明了CRISPR/Cas9技术可以应用到弓形虫的基因敲除和改造上,并且不受弓形虫虫株的限制,同时也为进一步研究mic3在虫体中的功能奠定基础。

关键词：弓形虫 CRISPR/Cas9 基因敲除 mic3基因

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IFN-γ-ELISpot方法用于评价猪伪狂犬病疫苗免疫效果

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畜牧兽医学报 2017年第10期48卷 1939-1948页

作者：谭鑫库旭钢于学祥郭恒科何东贤范盛先何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

鉴于常用的抗体检测方法不能完整反映免疫猪获得针对猪伪狂犬病毒的保护力,有必要建立猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性IFN-γ的酶联免疫斑点检测(ELISpot)方法,并评估伪狂犬病疫苗细胞免疫的免疫效果。依照ELISpot基本操作流程,摸索PRV作为... 详细信息

鉴于常用的抗体检测方法不能完整反映免疫猪获得针对猪伪狂犬病毒的保护力,有必要建立猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性IFN-γ的酶联免疫斑点检测(ELISpot)方法,并评估伪狂犬病疫苗细胞免疫的免疫效果。依照ELISpot基本操作流程,摸索PRV作为刺激原的最适浓度、外周血单个核细胞(PBMC)密度和作用时间以建立并优化该方法。将20头gB抗体检测阴性猪,随机分为单独弱毒疫苗免疫组、单独灭活疫苗免疫组、弱毒疫苗-灭活疫苗联合组及对照组,免疫后攻毒。利用所建方法,结合gB-ELISA、中和试验及攻毒保护试验,评价上述三种免疫程序的效果。试验结果表明:IFN-γ-ELISpot最佳条件为刺激原浓度2μg·孔^(-1)、外周血单核细胞(PBMC)浓度106·孔^(-1),培养时间36h。一免弱毒疫苗二免灭活疫苗组二免后2周,试验猪中和抗体效价可达1∶14.48,ELISpot斑点数可达(151.8±26.61)个·孔^(-1),且该免疫程序下,试验猪攻毒后体温、鼻拭子排毒及临床症状均低于其余试验组,攻毒8d后仅表现呼吸道症状;单独灭活疫苗免疫组二免后2周,试验猪的中和抗体效价可达1∶32.36,而ELISpot斑点数仅为(40.4±9.07)个·孔^(-1);单独弱毒疫苗免疫组二免后2周,试验猪的中和抗体效价仅为1∶1.36,但ELISpot斑点数可达(189.6±27.36)个·孔^(-1)。综合分析攻毒试验结果和ELISpot斑点数之间的相关性,本试验所建立的IFN-γ-ELISpot可用于猪伪狂犬病疫苗的细胞免疫评估,为免疫程序的评价和选择提供有效手段。

关键词：猪伪狂犬病 IFN-γ-ELISpot 细胞免疫疫苗免疫程序

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猪丹毒流行菌株耐药特性研究

猪丹毒流行菌株耐药特性研究

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第二届狮子山养猪高峰论坛暨第十八届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会

作者：胡进王雅康超金梅林华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室农业部兽用诊断制剂创制重点实验室生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

本研究通过分析临床分离的红斑丹毒丝菌耐药谱及对其喹诺酮耐药分子特征进行研究,发现红斑丹毒丝菌对卡那霉素、链霉素、阿米卡星、多粘菌素B和万古霉素的耐药率为100％,庆大霉素和复方新诺明的耐药率分别为97.6％和87.8％,环丙沙星、... 详细信息

本研究通过分析临床分离的红斑丹毒丝菌耐药谱及对其喹诺酮耐药分子特征进行研究,发现红斑丹毒丝菌对卡那霉素、链霉素、阿米卡星、多粘菌素B和万古霉素的耐药率为100％,庆大霉素和复方新诺明的耐药率分别为97.6％和87.8％,环丙沙星、氧氟沙星、壮观霉素、林可霉素和四环素的耐药率分别为48.8％,26.8％,24.4％,22.0％和14.6％.强力霉素、阿莫西林、恩诺沙星、头孢曲松、青霉素、氨苄西林、头孢拉定、阿奇霉素和克林霉素的耐药率均为0.从耐药率来看,当前最适合防控红斑丹毒丝菌的药物依次是：β-内酰胺类、林可酰胺类和四环素类.

关键词：红斑丹毒丝菌耐药谱喹诺酮耐药相关基因

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非人灵长类病毒性腹泻病研究进展

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中国兽医学报 2017年第1期37卷 183-189页

作者：祁明普汪乾坤陈颖钰郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学动物科技学院湖北武汉430070

非人灵长类动物是一类以猕猴为主的灵长类动物，包括猕猴、恒河猴、长尾黑颚猴、普通绒猴、绵头绢猴、大猩猩等，其在遗传物质、组织结构、生理代谢和生活习性等方面与人类高度相似，是医学领域中最具研究和应用价值的实验动物。但其在... 详细信息

非人灵长类动物是一类以猕猴为主的灵长类动物，包括猕猴、恒河猴、长尾黑颚猴、普通绒猴、绵头绢猴、大猩猩等，其在遗传物质、组织结构、生理代谢和生活习性等方面与人类高度相似，是医学领域中最具研究和应用价值的实验动物。但其在研究过程中常由于感染病毒而导致腹泻。

关键词：非人灵长类动物腹泻病毒轮状病毒杯状病毒腺病毒

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红斑丹毒丝菌SpaA蛋白的免疫效果评价

红斑丹毒丝菌SpaA蛋白的免疫效果评价

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第二届狮子山养猪高峰论坛暨第十八届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会

作者：吴超李敬涛朱伟峰王雅金梅林武汉科前生物股份有限公司华中农业大学动物医学院武汉科前生物股份有限公司华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室农业部兽用诊断制剂创制重点实验室武汉430070

使用本室制备的红斑丹毒丝菌重组蛋白SpaA与201佐剂乳化，制备猪丹毒亚单位疫苗，用制备的疫苗免疫仔猪，对疫苗进行仔猪免疫的安全性检测，并通过对免疫后仔猪的血清抗体测定及攻毒保护试验来评价疫苗的免疫效果。结果表明：经猪丹毒... 详细信息

使用本室制备的红斑丹毒丝菌重组蛋白SpaA与201佐剂乳化，制备猪丹毒亚单位疫苗，用制备的疫苗免疫仔猪，对疫苗进行仔猪免疫的安全性检测，并通过对免疫后仔猪的血清抗体测定及攻毒保护试验来评价疫苗的免疫效果。结果表明：经猪丹毒亚单位疫苗(SpaA)两次免疫后，仔猪的血清IgG抗体能上升到较高水平，没有副反应和应激产生，安全性高，保护率为100％。说明SpaA是制备猪丹毒亚单位疫苗理想的候选蛋白。

关键词：红斑丹毒丝菌亚单位疫苗 SpaA 抗体攻毒保护

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PCR和western-blot检测SpaA蛋白在红斑丹毒丝菌中的分布情况

PCR和western-blot检测SpaA蛋白在红斑丹毒丝菌中的分布情况

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第二届狮子山养猪高峰论坛暨第十八届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会

作者：吴超康超孙小美朱伟峰李敬涛金梅林武汉科前生物股份有限公司华中农业大学动物医学院武汉科前生物股份有限公司华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室农业部兽用诊断制剂创制重点实验室武汉430070

红斑丹毒丝菌血清型众多，我国主要是1a型和2型.SpaA蛋白是红斑丹毒丝菌重要的免疫原性蛋白，是猪丹毒亚单位疫苗的重要候选蛋白.对红斑丹毒丝菌的疫苗候选蛋白SpaA的编码基因在1a型、2型标准菌株和大量临床分离菌株中的分布进行检测.采... 详细信息

红斑丹毒丝菌血清型众多，我国主要是1a型和2型.SpaA蛋白是红斑丹毒丝菌重要的免疫原性蛋白，是猪丹毒亚单位疫苗的重要候选蛋白.对红斑丹毒丝菌的疫苗候选蛋白SpaA的编码基因在1a型、2型标准菌株和大量临床分离菌株中的分布进行检测.采用western-blot方法检测疫苗候选蛋白SpaA在1a型、2型标准菌株血清和大量临床分离红斑丹毒丝菌阳性血清中的反应.PCR结果表明：SpaA编码基因在1a型、2型标准菌株和大量临床分离菌株中都存在;western-blot结果表明：SpaA蛋白与1a型、2型标准菌株血清和大量临床分离红斑丹毒丝菌阳性血清都有反应.这表明：SpaA广泛存在于我国流行的主要血清型和当前流行菌株中，做为疫苗候选蛋白达到了制备亚单位疫苗的要求.

关键词：红斑丹毒丝菌 SpaA疫苗候选蛋白 PCR western-blot

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猪肿瘤坏死因子受体相关因子6的克隆、表达及对伪狂犬病病毒的抑制效应

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畜牧兽医学报 2017年第2期48卷 289-296页

作者：李永涛李红杰王晓雪贾广敏陈陆赵军王川庆刘红英河南农业大学牧医工程学院郑州450002 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 河南省动物卫生监督所郑州450002

肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)是天然免疫信号通路中重要的接头分子,笔者旨在探索猪TRAF6的抗病毒和免疫调控功能。首先利用RT-PCR从猪外周血单核细胞克隆该基因,并进行序列比对分析;其次利用Piggybac转座子系统建立猪TRAF6稳定表达... 详细信息

肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)是天然免疫信号通路中重要的接头分子,笔者旨在探索猪TRAF6的抗病毒和免疫调控功能。首先利用RT-PCR从猪外周血单核细胞克隆该基因,并进行序列比对分析;其次利用Piggybac转座子系统建立猪TRAF6稳定表达的PK-15细胞系;最后在细胞水平检测猪TRAF6对伪狂犬病病毒复制的影响以及对猪IFN-β等启动子活性的影响。结果显示,猪TRAF6基因为1 623bp;将猪TRAF6基因连接到Piggybac转座子质粒成功构建真核表达载体PB-TRAF6,然后将重组质粒转染PK-15细胞,经药物处理和荧光筛选获得稳定表达TRAF6的细胞系;通过荧光定量PCR和Western blot确定稳定细胞系TRAF6的高效表达;体外抗病毒试验表明,TRAF6稳定细胞系能够显著抑制伪狂犬病病毒的复制;双荧光报告基因法检测发现,TRAF6可以促进poly(I:C)诱导的Ⅰ型干扰素应答。结果提示猪TRAF6具有显著的抗病毒和免疫调节功能,为研究TRAF6的免疫学功能奠定基础。

关键词：猪肿瘤坏死因子受体相关因子6 Ⅰ型干扰素伪狂犬病病毒抗病毒活性

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金丝猴源益生粪肠球菌dlt7a的发酵工艺

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华中农业大学学报 2017年第5期36卷 74-80页

作者：白文妹李雪梅申立泉石德时杨敬元姚辉龙兴权欧阳潮肖运才农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学动物医学院武汉430070 湖北神农架金丝猴保育生物学湖北省重点实验室神农架442411 湖北华大瑞尔科技有限公司荆州434000

从神农架金丝猴的粪便中分离出1株益生菌株dlt7a,经鉴定为粪肠球菌。为进一步提高发酵液中dlt7a的活菌数量,对菌株dlt7a的发酵工艺进行优化。通过单因素水平试验,确定dlt7a的最佳培养条件为装液量20%(50mL/250mL),接种量2%,培养基初始pH... 详细信息

从神农架金丝猴的粪便中分离出1株益生菌株dlt7a,经鉴定为粪肠球菌。为进一步提高发酵液中dlt7a的活菌数量,对菌株dlt7a的发酵工艺进行优化。通过单因素水平试验,确定dlt7a的最佳培养条件为装液量20%(50mL/250mL),接种量2%,培养基初始pH 6.5。设计Plackett-Burman(PB)试验和响应面试验,找出发酵培养基中影响dlt7a活菌数的主要成分是蔗糖、鱼粉和KH_2PO_4,并优化3种重要成分的含量,确定最优发酵培养基配方为:蔗糖2.55%,鱼粉2.63%,豆粕2.5%,酵母膏0.4%,CaCO_3 1.0%,KCl 0.1%,MgSO_4·7H_2O 0.1%,KH_2PO_4 0.014%。在此条件下培养dlt7a菌株,活菌数可达58.83×108cfu/mL,比优化前提高了46.53%。

关键词：金丝猴粪肠球菌发酵工艺响应面法优化

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猪支气管败血波氏杆菌hcp基因缺失株构建及其生物学特性研究

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微生物学报 2017年第2期57卷 264-269页

作者：常宇慧张洪峰彭忠李慧陈焕春吴斌农业微生物学国家重点实验室生猪健康养殖协同创新中心华中农业大学动物科学技术学院动物医学院湖北武汉430070

【目的】构建猪支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)Ⅵ型分泌系统(T6SS)溶血素共调节蛋白hcp基因缺失株,并对其基本生物学特性进行初步的研究。【方法】使用自杀性质粒介导同源重组的方法敲除猪支气管败血波氏杆菌QH0814... 详细信息

【目的】构建猪支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)Ⅵ型分泌系统(T6SS)溶血素共调节蛋白hcp基因缺失株,并对其基本生物学特性进行初步的研究。【方法】使用自杀性质粒介导同源重组的方法敲除猪支气管败血波氏杆菌QH0814菌株hcp基因,并比较hcp基因缺失前后,菌体对细胞的黏附入侵、小鼠毒力及组织载菌量上的差异。【结果】成功构建支气管败血波氏杆菌hcp基因缺失株QH0814Δhcp,连续传50代且遗传稳定;缺失株与亲本株生长无明显差异;缺失株的黏附能力与亲本株差异不显著,但入侵能力显著降低(P<0.05);与亲本株相比,半数致死量提高,同时,缺失株对昆明鼠的感染能力也显著降低(P<0.05)。【结论】hcp基因的缺失对支气管败血波氏杆菌增殖无影响,但缺失后其入侵能力和定殖能力显著降低,由此推测hcp基因与支气管败血波氏杆菌的入侵和定殖相关。

关键词：支气管败血波氏杆菌 hcp基因缺失

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