检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 225-228页

作者：胡思顺王晓丽陆时娟张金娟李自力许青荣刘梅毕丁仁华中农业大学动物医学学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

为评价鸡毒支原体(MG)HS株p MGA1.2重组蛋白(rp MGA1.2)的免疫保护效果,本研究检测了rp MGA1.2对MG黏附体外培养的鸡胚气管环粘膜的抑制作用,同时以重组霍乱毒素B亚基(r CTB)作为粘膜免疫佐剂,对rp MGA1.2免疫的SPF鸡进行了攻毒试验。... 详细信息

为评价鸡毒支原体(MG)HS株p MGA1.2重组蛋白(rp MGA1.2)的免疫保护效果,本研究检测了rp MGA1.2对MG黏附体外培养的鸡胚气管环粘膜的抑制作用,同时以重组霍乱毒素B亚基(r CTB)作为粘膜免疫佐剂,对rp MGA1.2免疫的SPF鸡进行了攻毒试验。结果表明,rp MGA1.2能够有效的竞争性抑制MG定植于体外培养的鸡胚气管纤毛;而且rp MGA1.2经滴鼻点眼途径免疫SPF鸡能够诱导产生特异性体液免疫和呼吸道粘膜免疫,对2×109 ccu MG-HS攻击的保护率为67%。因此,rp MGA1.2具有较强的免疫原性,具有作为疫苗抗原的潜力。

关键词：鸡毒支原体 rpMGA1.2 rCTB 粘膜免疫

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猪伪狂犬病病毒HNX株在免疫猪群中水平传播能力的研究

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 426-429页

作者：张明辉库旭钢凌云志杨子靖何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学学院湖北武汉430070

为研究猪伪狂犬病病毒(PRV)HNX株水平传播的能力及PRV活疫苗的保护效力,本研究通过以颈部肌肉接种PRV HNX株(2 m L 107 TCID50)的未免疫猪作为病毒的传染源,同居感染未免疫猪和Bartha-K61株活疫苗免疫猪,通过检测抗PRV的g B和g E蛋白抗... 详细信息

为研究猪伪狂犬病病毒(PRV)HNX株水平传播的能力及PRV活疫苗的保护效力,本研究通过以颈部肌肉接种PRV HNX株(2 m L 107 TCID50)的未免疫猪作为病毒的传染源,同居感染未免疫猪和Bartha-K61株活疫苗免疫猪,通过检测抗PRV的g B和g E蛋白抗体、中和抗体及干扰素水平等评估疫苗保护力,并利用荧光定量PCR方法检测同居感染猪排毒情况。结果显示Bartha-K61株活疫苗能够快速诱导免疫猪产生抗g B蛋白的抗体,但疫苗诱导产生的交叉保护中和抗体水平较低。同居感染期间,免疫猪和未免疫猪均出现典型的临床症状,体温明显升高。荧光定量PCR方法结果显示,疫苗免疫能够减少免疫猪排毒,但不能阻止排毒,也不能阻止野毒感染。本研究结果表明Bartha-K61株活疫苗阻止PRV HNX株水平传播的效力是有限的,有必要更换疫苗病毒株。同居感染期间,每组感染猪均表现敏感,表明PRV HNX株病毒具有较强的水平传播能力。

关键词：猪伪狂犬病水平传播感染免疫阻止

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小鼠抑制素α亚基在杆状病毒表达系统中的表达和纯化

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中国兽医科学 2015年第12期45卷 1295-1299页

作者：李悦陈伟贞陈建国胡长敏刘东明丁明星韩丽华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

为利用杆状病毒表达系统表达小鼠的抑制素α亚基基因(INHα),将模板质粒pcDNA3.1(+)-INHα中的INHα基因克隆至载体质粒pFastBac1中,构建出重组转座质粒pFastBac1-INHα,转化至感受态DH10Bac细胞,形成重组穿梭质粒Bacmid-INHα,转染至Sf... 详细信息

为利用杆状病毒表达系统表达小鼠的抑制素α亚基基因(INHα),将模板质粒pcDNA3.1(+)-INHα中的INHα基因克隆至载体质粒pFastBac1中,构建出重组转座质粒pFastBac1-INHα,转化至感受态DH10Bac细胞,形成重组穿梭质粒Bacmid-INHα,转染至Sf9细胞,获得第一代重组杆状病毒(P1)。然后病毒连续传代2次,用RT-PCR鉴定重组的杆状病毒,用SDS-PAGE验证纯化后蛋白质的表达,并使用BCA蛋白质浓度检测试剂盒检测纯化后的蛋白质样品的质量浓度。结果表明,感染重组杆状病毒后的Sf9细胞能够明显看到细胞皱缩、碎裂等感染症状;RT-PCR能够扩增出1 272bp的条带,证明重组的杆状病毒构建正确;SDS-PAGE结果表明重组的杆状病毒能够表达出45ku的条带,与理论大小一致;利用BCA蛋白质浓度检测试剂盒测得纯化样品中蛋白质的质量浓度为(216.05±10.02)μg/mL。小鼠抑制素α亚基成功地在杆状病毒表达系统中被表达,为今后抑制素的广泛应用奠定了基础。

关键词：抑制素α亚基杆状病毒表达系统表达纯化

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猪流行性腹泻病和猪圆环病毒病混合感染的诊治

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中国畜牧兽医 2015年第10期42卷 2753-2761页

作者：刘洋库旭钢刘晓丽何启盖农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

2014年2月,突遇降雪天气,某规模化猪场2 000头母猪中约100头母猪所产新生仔猪集中在1周龄内出现大批死亡现象,死亡前均出现呕吐、消瘦及水样稀粪症状。通过采用现场调查、实验室病理解剖、病理组织学观察、免疫组化、RT-PCR、测序、ELIS... 详细信息

2014年2月,突遇降雪天气,某规模化猪场2 000头母猪中约100头母猪所产新生仔猪集中在1周龄内出现大批死亡现象,死亡前均出现呕吐、消瘦及水样稀粪症状。通过采用现场调查、实验室病理解剖、病理组织学观察、免疫组化、RT-PCR、测序、ELISA检测等方法,本试验确定该病是猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异野毒株感染引起,同时混合感染猪圆环病毒2型(PCV2)。通过采取母猪群紧急接种疫苗、仔猪口服卵黄抗体及加强保温、消毒等综合措施,该病迅速得到控制。

关键词：猪流行性腹泻病毒 RT-PCR S基因诊断

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小鼠和奶牛乳腺上皮细胞的分离及培养特性比较

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动物医学进展 2015年第12期36卷 56-61页

作者：刘玉辉赖金伦寇明明邓明亮刘瑞宁陈颖钰胡长敏郭爱珍华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

为建立小鼠乳腺上皮细胞(MMECs)及奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)分离培养体系,并比较其生长特性。分别无菌采集健康妊娠后期昆明鼠及泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺组织,采用改良混合酶消化结合差速贴壁法分离原代MMECs及BMECs,并进行细胞角蛋白18... 详细信息

为建立小鼠乳腺上皮细胞(MMECs)及奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)分离培养体系,并比较其生长特性。分别无菌采集健康妊娠后期昆明鼠及泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺组织,采用改良混合酶消化结合差速贴壁法分离原代MMECs及BMECs,并进行细胞角蛋白18的免疫荧光鉴定;通过细胞形态跟踪观察评价传代、冻存和复苏后MMECs及BMECs生物学特性;连续培养及细胞计数绘制MMECs及BMECs生长曲线。结果显示,从小鼠和奶牛乳腺组织分离的目的细胞,经角蛋白18免疫荧光鉴定证实为MMECs及BMECs;汇合的单层MMECs多角形,呈铺路石样外观,BMECs呈鹅卵石样;MMECs在传至第2代时细胞特有形状消失,而BMECs传至第9代时仍保持其鹅卵石样外观;MMECs只能复苏冻存原代细胞,传代BMECs均可冻存和复苏。采用改良混合酶消化结合差速贴壁法可获得高纯度的MMECs和BMECs,两种细胞在生长培养特性上存在显著差异。

关键词：小鼠乳腺上皮细胞奶牛乳腺上皮细胞分离培养生长特性

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鸭疫里默菌aroA基因缺失突变株的构建及生物学特性研究

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动物医学进展 2015年第12期36卷 1-5页

作者：张硕刘宁卢媞王颖周祖涛刘梅胡思顺栗绍文毕丁仁李自力华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

构建鸭疫里默菌aroA基因缺失株,并对其生物学特性及毒力进行研究。以本实验室分离的鸭疫里默菌YM株(RA-YM)为亲本株,建立pRE112-LSR重组自杀性质粒,通过结合转移的方法缺失RAYM株aroA基因,并利用PCR方法对突变株进行鉴定,成功构建了鸭... 详细信息

构建鸭疫里默菌aroA基因缺失株,并对其生物学特性及毒力进行研究。以本实验室分离的鸭疫里默菌YM株(RA-YM)为亲本株,建立pRE112-LSR重组自杀性质粒,通过结合转移的方法缺失RAYM株aroA基因,并利用PCR方法对突变株进行鉴定,成功构建了鸭疫里默菌aroA基因缺失株。生物学特性检测结果显示,鸭疫里默菌aroA基因缺失株不再水解精氨酸;体外生长曲线对数期细菌生长速度减缓,在稳定期趋于一致;半数致死量与野生株相比下降了3倍左右;aroA基因缺失株在血液、心、肝、脑等组织的载菌量与亲本株相比有所下降,但差异不显著。研究结果为深入研究鸭疫里默菌的分子致病机理和研制基因工程疫苗奠定了良好的基础。

关键词：鸭疫里默菌 aroA基因基因缺失生物学特性毒力因子

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猪源多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定

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中国兽医科学 2015年第9期45卷 943-951页

作者：彭忠王庚吴广敬王豪男郭龙汤细彪吴斌陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

2014年3月至2015年2月从来源于全国15个省份的180份临床猪肺组织样品中共分离到71株多杀性巴氏杆菌,分离率为39.4%。利用PCR技术对所分离的多杀性巴氏杆菌进行荚膜血清型鉴定,其中A型菌株41株（占57.8%）,D型菌株27株（占38.0%）,F型菌... 详细信息

2014年3月至2015年2月从来源于全国15个省份的180份临床猪肺组织样品中共分离到71株多杀性巴氏杆菌,分离率为39.4%。利用PCR技术对所分离的多杀性巴氏杆菌进行荚膜血清型鉴定,其中A型菌株41株（占57.8%）,D型菌株27株（占38.0%）,F型菌株3株（占4.2%）,71株多杀性巴氏杆菌中包括1株D型产毒素多杀性巴氏杆菌（占1.4%）,说明当前在我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌主要为A型和D型菌株。应用PCR检测多杀性巴氏杆菌23种毒力基因,结果显示：多杀性巴氏杆菌毒力基因的数量大多分布在15～19之间,平均携带个数为17.5个;23种毒力基因中,ptfA,fimA,hsf-2,sodA,sodC,ompA,ompH,oma87,plpB,exbB,tonB,Fur,hgbB的检出率在90%以上,而toxA基因的检出率极低（1.4%）,并且在猪源多杀性巴氏杆菌中未检测到t bpA的存在;分析毒力基因在不同血清型菌株中的携带及分布情况发现,A型的平均毒力基因携带数为18.2个,D型为16.4个;不同毒力基因在不同血清型的多杀性巴氏杆菌中的分布也存在一定的差异,其中唾液酸代谢酶基因nanB、透明质酸酶基因pmHAS及黏附基因tadD和pfhA在A型多杀性巴氏杆菌中的检出率高于其在D型多杀性巴氏杆菌中的检出率（P〈0.01）;而黏附基因hsf-1在D型多杀性巴氏杆菌的检出率显著高于其在A型多杀性巴氏杆菌中的检出率（P〈0.01）。对所分离菌株的16SrRNA基因进行测序,并与NCBI上公布的10株多杀性巴氏杆菌16S rRNA基因进行进化树分析,结果显示：71株多杀性巴氏杆菌主要分为2个亚群,亚群Ⅰ和HB03及3480的亲缘关系较近,而亚群Ⅱ则与HN06、Pm70、36950等菌株的亲缘关系较近;遗传进化的结果说明,多杀性巴氏杆菌的亲缘关系与其来源、血清型及其导致的疾病种类并没有表现出特定的亲缘关系。

关键词：多杀性巴氏杆菌分离鉴定荚膜血清型毒力基因 16SrRNA基因

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猪圆环病毒2型对小鼠淋巴细胞发育的抑制作用

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畜牧兽医学报 2015年第8期46卷 1400-1408页

作者：吴斌肖惠胡林杨了寒叶十一何启盖蔡双双张淑君华中农业大学动物科技学院动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北三峡职业技术学院宜昌443000

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起仔猪断奶多系统衰竭综合征的病原微生物,该病毒可以降低免疫反应引起严重的免疫抑制,直接导致体内淋巴细胞的凋亡和耗竭。为研究PCV2对发育中淋巴细胞的影响,本文以小鼠为试验模型,用免疫荧光法统计骨髓、胸... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起仔猪断奶多系统衰竭综合征的病原微生物,该病毒可以降低免疫反应引起严重的免疫抑制,直接导致体内淋巴细胞的凋亡和耗竭。为研究PCV2对发育中淋巴细胞的影响,本文以小鼠为试验模型,用免疫荧光法统计骨髓、胸腺、脾CD3、CD19阳性淋巴细胞数,qPCR定量分析淋巴细胞发育相关基因转录水平,MTT法检测体外培养淋巴细胞增殖能力。结果表明:(1)PCV2造成感染早期小鼠外周血淋巴细胞不同程度减少,并抑制体外培养淋巴细胞的增殖;(2)PCV2导致骨髓和脾CD19阳性B淋巴细胞极显著降低(P<0.01),并抑制淋巴细胞发育相关基因的转录;(3)PCV2对发育中淋巴细胞的凋亡也有一定促进作用。因此,PCV2抑制早期淋巴细胞的发育和促进发育中淋巴细胞凋亡可能是导致体内淋巴细胞大量耗竭的原因之一。

关键词： PCV2 T淋巴细胞 B淋巴细胞细胞发育

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猪肝羧酸酯酶1基因的克隆和在原核细胞中的功能性表达

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畜牧兽医学报 2015年第4期46卷 650-656页

作者：肖启玲李朋辉闫秉芳杨路王喜亮肖运才李自力刘梅毕丁仁石德时华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院农业部兽用诊断制剂创制重点实验室武汉430070 罗德岛大学生物医学科学系药物基因组学与分子治疗中心美国金士顿02881

为获得有活性的猪肝羧酸酯酶1(PLE1)并研究其功能,利用RT-PCR与常规PCR方法,从大白猪肝组织中扩增PLE1基因的ORF。将PLE1的ORF序列连接到pET15b原核表达载体,在Origami TM2(DE3)中与pGro7质粒共诱导表达,纯化目的蛋白质并检测其酶活性... 详细信息

为获得有活性的猪肝羧酸酯酶1(PLE1)并研究其功能,利用RT-PCR与常规PCR方法,从大白猪肝组织中扩增PLE1基因的ORF。将PLE1的ORF序列连接到pET15b原核表达载体,在Origami TM2(DE3)中与pGro7质粒共诱导表达,纯化目的蛋白质并检测其酶活性。测序结果表明克隆到PLE1基因编码区全长1 686bp的片段,该片段编码562个氨基酸。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,PLE1融合蛋白质成功表达,在30℃的培养温度下,IPTG诱导6h后,PLE1重组蛋白质表达量最高,且大部分以可溶性形式存在。酶活性试验结果表明,PLE1融合蛋白质水解底物p-NPA的酶活力为1.24U。研究结果不仅为研究PLE1水解兽药特性提供高纯度的具有原有酶活性的重组蛋白质,也为PLE同工酶家族其他重要成员的活性功能研究提供理论依据和技术手段。

关键词：猪肝羧酸酯酶1 功能性表达活性检测

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奶牛乳腺炎治疗研究进展

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动物医学进展 2015年第6期36卷 126-129页

作者：寇明明刘玉辉刘婧赖金伦胡长敏陈颖钰郭爱珍华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学国家肉牛产业技术体系疾病控制功能研究室湖北武汉430070

奶牛乳腺炎导致奶牛产奶量下降,奶品质降低,甚至奶牛的早期淘汰,对奶牛业造成巨大危害。传统抗生素治疗乳腺炎花费大,治疗效果不确定,且易导致细菌耐药及抗生素残留问题。乳腺炎防治新制剂乳酸链球菌素、Aegis溶菌酶、溶葡萄球菌酶,分... 详细信息

奶牛乳腺炎导致奶牛产奶量下降,奶品质降低,甚至奶牛的早期淘汰,对奶牛业造成巨大危害。传统抗生素治疗乳腺炎花费大,治疗效果不确定,且易导致细菌耐药及抗生素残留问题。乳腺炎防治新制剂乳酸链球菌素、Aegis溶菌酶、溶葡萄球菌酶,分别针对病原菌细胞膜、骨架、生物膜而发挥治疗作用;CpGDNA有助于激活机体天然免疫系统;血小板浓缩液不仅具有抗菌作用且可促进乳腺组织修复。在乳腺炎治疗新策略方面,应用激素可调控乳腺细胞分泌及修复能力;另外,调控乳腺细胞相关信号通路及中性粒细胞可控制乳腺炎症反应,达到预防和治疗乳腺炎的目的。

关键词：奶牛乳腺炎治疗

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